趙 潔 劉艷玲 韓 冰 田 浩 郭玲玲

遼寧省微生物科學(xué)研究院，遼寧朝陽(yáng) 122000

咽康片是以金銀花為主要原料，再輔以其他成分按一定的配方比例組合而成的口含片劑，用于口腔感染、咽喉炎，具有抗菌、消炎、止咳的作用。本項(xiàng)試驗(yàn)主要探討咽康片中金銀花等幾味主要原料的體外抗菌作用，為本產(chǎn)品進(jìn)一步應(yīng)用和相關(guān)原料的合理使用提供基礎(chǔ)資料，供同道參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

金銀花、薄荷腦購(gòu)自朝陽(yáng)市藥材公司；供試菌種金黃色葡萄球菌由筆者所在醫(yī)院菌種保藏中心提供；肺炎克雷伯菌購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，編號(hào)：46114-8；培養(yǎng)基：肺炎克雷伯菌和金黃色葡萄球菌都使用營(yíng)養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂固體培養(yǎng)基[1-2]，購(gòu)自北京科海軍舟化學(xué)試劑公司。主要儀器、試劑：電熱恒溫培養(yǎng)箱DHG-9240A型（上海一恒科技有限公司），超凈工作臺(tái)SW-CJ-4（上海錦屏儀器儀表有限公司）、7230分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）；手提式高壓滅菌鍋GB4027.1.83煤電兩用型（遼寧省丹東市日用五金廠）。試驗(yàn)所用乙醇等化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌懸液的制備 將上述兩個(gè)菌種分別用營(yíng)養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基（蛋白胨10 g、氯化鈉5 g、牛肉浸出粉3 g、蒸餾水1 000 mL）和固體斜面培養(yǎng)基（蛋白胨10 g、氯化鈉5 g、牛肉浸出粉3 g、瓊脂14 g、蒸餾水1 000 mL）[3-4]進(jìn)行活化后，用無(wú)菌水1︰2 000稀釋，備用。

1.2.2 供試樣品的制備 （1）金銀花樣品制備：取金銀花適量用水提取兩次，過濾，除雜，合并提取液，濃縮至0.60 g/ m L。（2）薄荷腦樣品制備：稱取薄荷腦0.1 g加95%乙醇2 mL，再加蒸餾水至10 mL，備用。（3）咽康片混合物樣品制備：按配方比例分別加入金銀花、薄荷腦等提取物，混合后制成每片相當(dāng)于金銀花1.05 g、薄荷冰0.025 g的液體口含片（每片重2.0 g，另含其他提取物），備用。

1.2.3 供試樣品對(duì)供試菌種的抑菌作用 （1）金銀花提取物最低抑菌濃度測(cè)定：配制細(xì)菌液體培養(yǎng)基，分裝于試管內(nèi)，每管4 mL，分兩組，每組6支試管，121℃濕熱滅菌20 min后，準(zhǔn)確稱量金銀花提取物制成18%、27%、36%、45%、54%、63%（mL/mL）系列濃度，依次各取1 mL注入已滅菌的液體培養(yǎng)基中，每個(gè)系列接一個(gè)菌種，分別準(zhǔn)確注入菌懸液0.1 mL；再取兩支試管做空白對(duì)照，然后將試驗(yàn)管和空白對(duì)照管同時(shí)放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，觀察生長(zhǎng)現(xiàn)象，在空白系列內(nèi)分別接入與上述相同量的克雷伯菌和金黃色葡萄球菌菌懸液，立刻用7230分光光度計(jì)測(cè)量試驗(yàn)管和對(duì)照管的吸光度值[5-6]。（2）供試樣品與菌懸液混合觀察抑菌效果：取無(wú)菌培養(yǎng)皿加入一定量的供試樣品（咽康片混合物按0.8片和0.5片量、原料按相當(dāng)于半片量和一片量加入）、0.1 mL菌懸液和15 mL營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，立刻混合均勻，置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~20 h，觀察抑菌情況。

2 結(jié)果與討論

2.1 金銀花提取物最低抑菌濃度測(cè)定

在550 nm波長(zhǎng)下用7230型分光光度計(jì)測(cè)定培養(yǎng)液的吸收值 ，培養(yǎng)液吸收值與培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)菌繁殖速度成正相關(guān)，吸收值升高越快，表示培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)菌濃度升高越快。培養(yǎng)液中分別加入了具有抑菌作用的供試液體，起到抑菌作用，故可抑制培養(yǎng)液吸收值上升。將培養(yǎng)后的兩組培養(yǎng)物和空白對(duì)照在7230分光光度計(jì)上進(jìn)行比色測(cè)定，若某一濃度培養(yǎng)物的吸收值與空白對(duì)照這一濃度的吸收值相同（或比較接近）者，則表明此培養(yǎng)基中加入的細(xì)菌沒有繁殖和生長(zhǎng)，即可視為此濃度為最低抑菌濃度。測(cè)定結(jié)果為：金銀花對(duì)金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度7.2%（mL/mL），對(duì)克雷伯菌的最低抑菌濃度5.4 %（mL/mL）。

根據(jù)金銀花樣品的濃度將其轉(zhuǎn)換為質(zhì)量濃度，即對(duì)金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度為4.32%（g/m L），對(duì)肺炎克雷伯菌的最低抑菌濃度為3.24%（g/mL）。

由上述試驗(yàn)可知，由于細(xì)菌的種類不同，金銀花的抑菌效果有所不同，對(duì)肺炎克雷伯菌的抑菌效果強(qiáng)于對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果。

2.2 供試樣品與菌懸液混合培養(yǎng)后抑菌效果

供試樣品與菌懸液混合抑菌試驗(yàn)顯示：薄荷腦、金銀花和咽康片混合物均有一定的抑菌效果，而薄荷腦抑菌作用最強(qiáng)。見表1。實(shí)驗(yàn)圖譜見圖1~7。

表1 供試樣品對(duì)金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的抑菌效果

圖1 肺炎克雷伯菌陽(yáng)性對(duì)照

圖2 混合樣品1.6 g+肺炎克雷伯菌

圖3 薄荷腦0.025 g+肺炎克雷伯菌

圖4 金黃色葡萄球菌陽(yáng)性對(duì)照

圖6 混合樣品1.6 g+金黃色葡萄球菌

圖7 薄荷0.025 g+金黃色葡萄球菌

綜上試驗(yàn)結(jié)果可知：按照此配方比例研究制劑咽康片對(duì)克雷伯菌和金黃色葡萄菌具有良好抑菌作用，但組合后的樣品抑菌效果增強(qiáng)系數(shù)未作具體實(shí)驗(yàn)和計(jì)算，有待于進(jìn)一步研究。

[1] 于斐，賈秋樺.防風(fēng)水煎劑對(duì)肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌生長(zhǎng)的影響[J].山東醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2011，33（5）：337-338.

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[3] 蘇德模，馬緒榮.藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)[M].北京：華齡出版社，2007：125.

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