徐 飛，遲富麗，談 華，劉雪梅，曹 彤，潘 偉，鐘天鷹

(南京醫(yī)科大學(xué) 附屬南京兒童醫(yī)院檢驗科，江蘇 南京 210008)

48株兒童侵襲性肺炎鏈球菌血清型分布

徐 飛，遲富麗，談 華，劉雪梅，曹 彤，潘 偉，鐘天鷹

(南京醫(yī)科大學(xué) 附屬南京兒童醫(yī)院檢驗科，江蘇 南京 210008)

目的 了解南京地區(qū)臨床分離的侵襲性肺炎鏈球菌血清型分布情況。方法 用莢膜腫脹實結(jié)果檢測2007年1月-2010年12月臨床分離的48株侵襲性肺炎鏈球菌的血清型別。結(jié)果 48株侵襲性肺炎鏈球菌常見的血清型別為19F(27．1%)、19A(22．8%)、14(18．7%)和 9v(8．3%)，有 2 株用丹麥抗血清無法確定血清型。結(jié)論南京地區(qū)兒童臨床分離的侵襲性肺炎鏈球菌的常見血清型為19F、19A、14和9v，與其它地區(qū)報道有一定差別。

侵襲性肺炎鏈球菌;血清型;分布;兒童

肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)是社區(qū)獲得性肺炎的主要致病菌之一［1］。肺炎鏈球菌還可引起胸膜炎、腦膜炎、敗血癥等侵襲性肺炎球菌病(IPD)。2005年，世界衛(wèi)生組織(WHO)估計全球每年約有160萬人死于肺炎鏈球菌感染，尤其是IPD，其中70萬～100萬為5歲以下兒童，其中多數(shù)生活在發(fā)展中國家［2］。

肺炎鏈球菌能否致病與莢膜有密切關(guān)系。根據(jù)莢膜多糖的抗原特性，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肺炎鏈球菌可分為46個血清群，90個血清型。在全球范圍內(nèi)，80%以上的IPD僅與20余種血清型有關(guān)。肺炎鏈球菌血清型構(gòu)成隨地域、年齡層次和時間會不斷的變遷，因此需要不斷進(jìn)行監(jiān)測。目前國內(nèi)尚缺乏是南京地區(qū)有關(guān)肺炎鏈球菌特別是引起IPD的肺炎鏈球菌的血清型分布情況的數(shù)據(jù)，為了了解本地區(qū)引起IPD的肺炎鏈球菌的血清型分布，給預(yù)防肺炎鏈球菌及其造成的疾病和臨床用藥等提供更多資料，我們收集了2007年1月-2010年12月48株引起IPD的肺炎鏈球菌，對其血清型分布進(jìn)行研究。

1 材料

1．1 菌株來源

分離自2007年1月-2010年12月臨床侵襲性肺炎鏈球菌感染標(biāo)本(血液、腦脊液、胸腹水及眼耳分泌物等)的肺炎鏈球菌48株。

1．2 主要試劑

肺炎鏈球菌培養(yǎng)基:Columbia基礎(chǔ)培養(yǎng)基CM0331(英國Oxoid公司)+5%脫纖維羊血;奧普托辛(Optochin)試驗(5 μg/片)紙片(英國 Oxoid公司);莢膜腫脹試驗(Quellung試驗)用莢膜特異性抗血清(丹麥Statens Serum Institute)。

2 方法

2．1 肺炎鏈球菌初步鑒定

2．1．1 膽汁溶菌試驗 取適量菌液，調(diào)pH值為弱堿性，加入10%去氧膽酸鈉，置于37℃，在15 min內(nèi)出現(xiàn)細(xì)菌溶解，培養(yǎng)液變清者為陽性。同時用加入生理鹽水的培養(yǎng)液作對照。

2．1．2 Optochin試驗 方法類似藥敏試驗。待試菌涂布于血平板表面，再將含有一定量的Optochin濾紙片貼于平板涂菌處。于37℃ CO2培養(yǎng)24 h后觀察抑菌圈的大小，肺炎鏈球菌抑菌圈的直徑＞14 mm，甲型溶血性鏈球菌＜14 mm。

2．2 肺炎鏈球菌分型莢膜腫脹試驗

采用莢膜腫脹試驗，嚴(yán)格按產(chǎn)品說明操作，油鏡下如莢膜顯著腫大，菌體周圍有一無色而較寬的環(huán)狀物時，判斷為莢膜腫脹試驗陽性。

3 結(jié)果

48株侵襲性肺炎鏈球菌共涉及8個血清型(群)，主要分布在19F、19A、14、9v、23F、6B、7F 和 8血清型(群)，其中 19F和 19A最多見，分別占27．1%和22．8%，8 最少占 2．1%，尚有 2 株用本實驗方法未能進(jìn)行血清分型，占4．2%，見表1。

表1 48株肺炎鏈球菌血清學(xué)鑒定結(jié)果

PCV7(包含血清型 4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1和5)覆蓋率為 62．5%，PCV11(包含血清型4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、5、3 和 7F)的覆蓋率達(dá)到 75%，而 PCVl3(包含血清型 4、6B、9V、14、18C、19F、23F、1、5、3、7F、6A 和 19A)由于覆蓋了19A、7F，其覆蓋率顯著提高，高達(dá)87．5%。

4 討論

肺炎鏈球菌是引起肺炎、嬰幼兒急性化膿性中耳炎和細(xì)菌性腦膜炎的重要病原菌。近年來肺炎鏈球菌耐藥菌株及耐藥菌型迅猛增加，使臨床治療更加棘手。為了解肺炎鏈球菌菌型分布情況，許多國家和地區(qū)開展了肺炎鏈球菌特別是侵襲性肺炎鏈球菌的血清型監(jiān)測。監(jiān)測顯示，世界范圍內(nèi)90%以上的侵襲性感染是由16種左右的肺炎鏈球菌血清型引起［3-4］，常見的血清型有 19F、23F、19A、6B、14、6A等。血清型隨著時間會不斷的變遷，美國1998-1999年，19A型僅占IPD的2．5%，2005年達(dá)到36%，僅次于19F位居第二。

姚開虎等［5］報道2006-2007年北京、上海、廣州和深圳4家兒童醫(yī)院279株肺炎鏈球菌以19F最常見(60．6%)、其次為 19A(9．7%)、23F(9．3%)和6B(5．4%)，上述4種血清型占全部菌株的84．9%。劉春林等［6］報道全國15個地區(qū)148株來自血液、腦脊液等侵襲性感染部位的肺炎鏈球菌清分型主要集中在19A、19F、3、23F、5、6、14 和 9 血清型(群)，以19A(22．3%)、19F(16．9%)最常見，其次為 3 群(7．4%)和23F(6．8%)。本次研究48株侵襲性肺炎鏈球菌血清分型中，以19F比例最高(27．1%)、其次是19A(22．8%)、14(18．7%)、9v(8．3%)、6b(6．3%)、23F(6．3%)，以 19F 和 19A 最常見，這和國內(nèi)外報道基本一致。不同的是本次研究中14血清型占18．7%，比例明顯比文獻(xiàn)［5-6］報道的要高，這可能與肺炎鏈球菌存在地區(qū)差異有關(guān)。和國內(nèi)外其他地區(qū)的報道相類似的是，非疫苗覆蓋血清型(NVT)如19A、7F、8的比例升高了，其中19A所占比例高達(dá)22．8%。發(fā)生血清型變化的機(jī)制尚不明確，可能是由于結(jié)合疫苗血清型僅為7種血清型，推廣使用PCV7對肺炎鏈球菌的生存具有選擇性壓力，有利于NVT的傳播流行;本研究中PCV7覆蓋率只有62．5%，PCV11的覆蓋率為75%，而PCV13由于覆蓋了19A、7F，其覆蓋率顯著提高，高達(dá)87．5%。但也有監(jiān)測結(jié)果提示19A型增加可能不是PCV7應(yīng)用的結(jié)果，而與抗生素選擇壓力有關(guān)。本研究中PCV7覆蓋率為62．5%，PCV11的覆蓋率為75%，而PCV13由于覆蓋了19A、7F，其覆蓋率顯著提高，高達(dá)87．5%。南京地區(qū)兒童感染侵襲性肺炎鏈球菌血清型分布中19A型在IPD中占據(jù)重要位置，因此本地區(qū)兒童在接種肺炎鏈球菌疫苗，PCV13應(yīng)為首選，肺炎鏈球菌監(jiān)測是一個長期的過程，我們應(yīng)密切監(jiān)測肺炎鏈球菌特別是侵襲性肺炎鏈球菌血清型的變化，以便及時準(zhǔn)確地評價疫苗的預(yù)防效果。

［1］ Taylor S N，Sanders C V．Unusual manifestations of invasive pneumo-coccal infection［J］．Am J Med，1999，107:12S-27S．

［2］ World Health Organization．Pneumococcal conjugated vaccine for childhood immunization-WHO position paper［J］．Wkly Epidemiol Rec，2007，82(12):93-104．

［3］ Garcfa-Suarez M M，Villaverde R，Caldevilla A F，et a1．Serotype distribution and antimicrobial resistance of invasive andnon-invasive pneumococccal isolates in Asturias，Spain［J］．Jpn J Infect Dis，2006，59:299-305．

［4］ Denham B C，Clarke S C．Serotype incidence and antibioticsusceptibility of Streptococcus pneumoniae causing invasive diseasein Scotland，1999-2002［J］．J Med Microbiol，2005，54:327-331．

［5］ 姚開虎，王立波，趙根明．北京上海廣州深圳4家兒童醫(yī)院肺炎住院患兒肺炎鏈球菌分離株的血清型分布［J］．中國循證兒科雜志，2006，44:928-932．

［6］ 劉春林，趙春江，劉昱東，等．侵襲性肺炎鏈球菌148株血清型、耐藥性及分子分型研究［J］．中華醫(yī)學(xué)雜志，2010，90(22):1565-1570．

Study on serotype distribution in 48 isolates of invasive Streptococcus pneumoniae with which children infected

XU Fei，CHI Fu-li，TAN Hua，LIU Xue-mei，CAO Tong，PAN Wei，ZHONG Tian-ying
(Department of Clinical Laboratory，the Children's Hospital Affiliated to Nanjing Medical University，Nanjing 210008，China)

Purpose To investigate serotype distribution of invasive Streptococcus pneumoniae of clinical isolates in Nanjin．Methods A total of 48 strains invasive Streptococcus pneumoniae were collected from January 2007 to December 2010．Serotyping of Streptococcus pneumoniae was performed by using quelling reaction．Results The most common serotypes 48 Streptococcus pneumoniae isolates were 19F(27．1%)、19A(22．8%)、14(18．7%)and 9v(8．3%)．There were two strains(4．2%)that cannot be identified with the antisera used．Conclusion The major serotypes of invasive Streptococcus pneumoniae with which children infected in Nanjing are 19F，19A，14 and 9v．

Streptococcus pneumoniae;serotypes;distribution;children

R446．5

A

1005-1678(2012)06-0909-02

2012-07-20

徐 飛，男，病原生物學(xué)碩士，主管技師，主要從事臨床微生物工作，E-mail:feixu1975@126．com。