薛愛華，張琳美，宋文靜

(天津市南開區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 300102)

HPLC法測(cè)定益心康膠囊中丹參酮ⅡA的含量*

薛愛華，張琳美，宋文靜

(天津市南開區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 300102)

目的:建立HPLC法測(cè)定益心康膠囊中丹參有效成分丹參酮ⅡA的含量。方法:采用HPLC法，色譜柱為Agilent;流動(dòng)相:甲醇－乙腈－水(325∶100∶125);檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm;柱溫為室溫;流速1.5 ml/min。結(jié)果:丹參酮ⅡA在0.019 78 ～0.395 6 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9)，平均回收率99.89%，RSD 為1.98%。結(jié)論:本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于益心康膠囊中丹參酮ⅡA的含量測(cè)定。

益心康膠囊，丹參，含量測(cè)定，丹參酮ⅡA，HPLC法

益心康膠囊是本醫(yī)院制劑(批準(zhǔn)文號(hào):津藥制字Z20070470號(hào))，處方主要由西洋參、丹參、麥門冬組成，具有益氣養(yǎng)陰、活血通脈的功效。為提高益心康膠囊質(zhì)量控制，增加了益心康膠囊成分中丹參所含有效成分丹參酮ⅡA的定量測(cè)定指標(biāo)，采用HPLC法測(cè)定丹參酮ⅡA含量，方法如下。

1 儀器與試藥

WAters 515 HPLC Pump高效液相色譜儀，N－2000雙通道色譜工作站，RAININ DYNAMAX紫外檢測(cè)器，SIL－6A手動(dòng)進(jìn)樣器。丹參酮ⅡA對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110766－200417);益心康膠囊(本院制劑室提供，批號(hào) 070420、070421、070522)。乙腈為色譜純;水為去離子水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 參照《中國(guó)藥典》2005年版一部有關(guān)含量測(cè)定方法［1］制定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇－乙腈－水(325∶100∶125)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm;柱溫為室溫;流速為1.5 ml/min。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA計(jì)算不低于2 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品10 mg，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;精密量取2 ml，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1 ml含丹參酮ⅡA16 μg)。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物0.3 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加入甲醇適量溶解，超聲處理(功率120 W，頻率40 kHz)60 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方取除丹參的各味藥材按益心康膠囊制備工藝制得樣品，再按“2.2.2”供試品溶液制備方法，制得陰性樣品溶液。分別精密吸取上述3種溶液各 5 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。

圖1 對(duì)照品(A)供試品(B)陰性對(duì)照(C)HPLC色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品12.36 mg，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取2 ml，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得到濃度為0.019 78 mg/ml對(duì)照品溶液。吸取該對(duì)照品溶液 1、2、5、10、15 和 20 μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。得回歸方程為Y=2 629 713.895 3 X －5 506.044 2(r=0.999 9)。

2.4 精密度試驗(yàn) 取益心康膠囊(批號(hào)070420)，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，精密吸取供試品溶液5 μl，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定樣品中丹參酮ⅡA峰面積。結(jié)果RSD值為0.84%，說明精確度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件分析，分別在 0、2、4、6、8、12 和24 h測(cè)定，結(jié)果RSD為0.74%，表明供試品中的丹參酮ⅡA在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批益心康膠囊(批號(hào)070420)，精密稱取6 份，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，測(cè)定每份樣品中丹參酮ⅡA含量。結(jié)果樣品中丹參酮ⅡA平均含量為0.584 1 mg/粒，RSD為1.89%，說明本方法重現(xiàn)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品(批號(hào)070420)6份，稱取含量測(cè)定中規(guī)定量的1/2量，精密稱定，分別置于25 ml量瓶中，精密加入0.284 0 mg/ml丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液1 ml，再按照“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.89%，RSD為1.98%。見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定 取3批益心康膠囊樣品，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，分別精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各5 μl，注入液相色譜儀，進(jìn)樣6次，依法測(cè)定，求得平均值，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 提取方法的選擇 《中國(guó)藥典》2005年版一部［1］中規(guī)定丹參中丹參酮ⅡA的提取方法為甲醇加熱回流1 h，考慮到超聲提取法較熱回流提取法更簡(jiǎn)便易行，故考查超聲提取30、60和90 min，結(jié)果表明超聲處理60 min樣品中測(cè)得的丹參中丹參酮ⅡA含量5.865 9 mg/g，與《中國(guó)藥典》2005年版一部中規(guī)定的加熱回流1 h中測(cè)得的丹參中丹參酮ⅡA含量5.790 8 mg/g結(jié)果相近，故采用超聲60 min提取法代替加熱回流提取法來制備供試品溶液。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 《中國(guó)藥典》2005年版一部有關(guān)丹參酮ⅡA含量測(cè)定方法，均采用270 nm波長(zhǎng)檢測(cè)。故采用藥典檢測(cè)丹參酮ⅡA常用波長(zhǎng)270 nm為本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于益心康膠囊的質(zhì)量控制。

1 中國(guó)藥典.一部.2005:52，附錄33

R927.2

A

1006-5687(2012)04-0015-03

2011-12-01