摘 要： 為了檢測podoplanin在非小細胞肺癌（NSCLC）上的表達，探討其臨床病理學意義。作者應用免疫組織化學SP法檢測50例NSCLC患者及10例癌旁正常肺組織中podoplanin的表達，分析其表達情況及與臨床病理參數(shù)之間的關系。結果在NSCLC患者癌細胞中存在podoplanin表達，且明顯高于癌旁正常肺組織；陽性表達與患者淋巴結轉(zhuǎn)移有關（P均＜0.05），得出Podoplanin在NSCLC中存在表達，并且與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移有關的結論。
　　關鍵詞： 非小細胞肺癌 Podoplanin 表達
　　
　　Podoplanin是一種小分子黏液樣跨膜糖蛋白，在人體多種組織細胞中表達，如腎足突細胞、胎盤、肺、間皮細胞等，但主要表達在淋巴管內(nèi)皮細胞，故作為淋巴管內(nèi)皮的特異性標記廣泛應用于組織病理學。［１］研究發(fā)現(xiàn)，Podoplanin在人腫瘤細胞如宮頸癌、口腔鱗癌等表達上調(diào)與患者的預后有關，［２］—［３］可見Podoplanin在腫瘤進展過程中發(fā)揮重要的作用。目前對Podoplanin在NSCLC中的研究甚少。本研究采用免疫組化的方法，通過檢測NSCLC患者Podoplanin的表達，并且探討其臨床病理學意義。
　　1.材料與方法
　　1.1標本來源
　　組織標本取自 2007年3月至2010年10月德州人民醫(yī)院手術切除的初診非小細胞肺癌（NSCLC）石蠟包埋標本50例，另設15例癌旁正常肺組織作為對照。所選標本術前均未接受化療、放療及其他治療。標本中男32例，女18例。診斷時平均年齡50.32歲（44—78歲）。根據(jù)1999年修正的最新“分類法”確定組織分類：鱗癌12例，腺癌32例，腺鱗癌6例；組織分化程度：5例為高分化，22例中分化，23例低分化；根據(jù)《美國聯(lián)合會癌癥分期手冊》進行術后分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期17例，Ⅲ-Ⅳ期14例；伴有淋巴結轉(zhuǎn)移者21例，無淋巴結轉(zhuǎn)移者29例。
　　1.2主要試劑
　　鼠抗人Podoplanin單克隆抗體D2-40（Dako公司），免疫組化SP法檢測試劑盒及DAB顯色劑（北京中杉公司）。
　　1.3實驗方法及步驟
　　采用免疫組織化學SP檢測目的蛋白。所有標本均用10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm切片，常規(guī)脫蠟至水化，用pH6.0檸檬酸鹽為修復液的微波修復方法進行抗原修復，一抗4℃過夜，二抗37℃孵育，DAB顯色。每批染色均設陽性和陰性對照。
　　1.4結果判定標準
　　免疫組織化學結果判定標準：Podoplanin陽性細胞胞膜或胞漿呈均勻著色的棕黃色顆粒，背景清晰無非特異性著色。每張切片均由2位病理科醫(yī)生雙盲法閱片，如對臨床資料均不了解，2名醫(yī)師計數(shù)差10%以上，就重新計數(shù)。
　　1.5數(shù)據(jù)處理
　　采用Spss15.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學處理。Podoplanin在NSCLC癌細胞及間質(zhì)上表達的關系和與患者臨床病理參數(shù)的關系采用x2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　2.結果
　　2.1Podoplanin在人NSCLC標本中的表達
　　Podoplanin陽性染色主要位于細胞膜和細胞質(zhì)中，為棕黃色顆粒（圖1）。Podoplanin在癌細胞中存在表達18%（9/50），且顯著高于正常對照組織（6.67%，P＜0.05）；在癌旁正常肺組織間質(zhì)中未見有表達。
　　2.2NSCLC中Podoplanin的表達與患者臨床病理參數(shù)的關系
　　見表2.
　　x2檢驗分析表明陽性表達與淋巴結轉(zhuǎn)移相關（P＜0.05），與患者分期、分化程度均無相關性（P均＜0.05）。
　　3.討論
　　Podoplanin首次發(fā)現(xiàn)于腎病鼠模型的腎小球足突細胞表面，在防止細胞黏附、維持腎小球足突細胞形態(tài)和維持腎小球通透性方面有重要作用。［４］Podoplanin還在肺成熟和淋巴管的形成過程中發(fā)揮重要作用。［５］結構上Podoplanin擁有一個誘導血小板聚集域（platelet aggregation-stimulating domain，PLAG），所以Podoplanin具有誘導血小板聚集的功能。［６］研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞聚集血小板的功能越強，轉(zhuǎn)移率越高；聚集血小板的功能越弱，轉(zhuǎn)移率越低。［７］聚集的血小板圍繞在癌細胞周圍，可以保護癌細胞逃避免疫監(jiān)視直接粘附于血管內(nèi)皮，增強癌栓在循環(huán)中的阻力，促進癌細胞外滲和血行轉(zhuǎn)移。［８］Suzukilnoue［９］等發(fā)現(xiàn)癌細胞上Podoplanin 的表達可以促進血小板的聚集，并且與癌細胞的遷徙、浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性行為有關。由此可見，Podoplanin可通過誘導血小板聚集促進腫瘤的進展。在本研究中，Podoplanin在NSCLC癌細胞上表達明顯高于癌旁正常肺組織，提示Podoplanin在癌細胞表達與腫瘤的惡性程度及進展有關。
　　綜上所述，本研究結果顯示Podoplanin在NSCLC上存在高有表達，還與患者淋巴結轉(zhuǎn)移有關。因此，對Podoplanin的深入研究，可能為抑制腫瘤進展轉(zhuǎn)移提供新思路。
　　
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