鄧桂秀，於 虹，宋鵬飛，姜燕琴

〔江蘇省·中國科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園)，江蘇 南京 210014〕

藍漿果為杜鵑花科 (Ericaceae)越橘屬(Vaccinium L.)果樹，具有較高的經(jīng)濟價值和廣闊的應(yīng)用開發(fā)前景［1］。南方高叢藍漿果(V.corymbosum hybrids)是北美三大商業(yè)栽培藍漿果類型之一，與其他類型相比具有生長勢強、果實大、品質(zhì)好等優(yōu)點［2］。作者所在的課題組自2003年開始利用南方高叢藍漿果品種‘南月’(‘Southmoon’)進行實生選育工作，并優(yōu)選出一批實生單株［3－4］。鑒于優(yōu)選系均以單株形式存在，采用組織培養(yǎng)技術(shù)對其進行擴繁，既可保存種質(zhì)資源，又可達到快速繁殖、為進一步實驗提供大量苗木的目的。

藍漿果對營養(yǎng)元素的需求量較少，營養(yǎng)過剩反而會對其造成傷害［4－8］。大量的研究結(jié)果表明：含鹽量低的WPM和改良WPM(MWPM)培養(yǎng)基較適宜于藍漿果的離體培養(yǎng)［9－15］，而含鹽量較高的MS培養(yǎng)基不適宜于兔眼藍漿果(V.ashei Reade)的培養(yǎng)［12，16－17］； Tetsumura等［17］則認(rèn)為：由MS與WPM等量混合而成的MS－WPM混合培養(yǎng)基的鹽分濃度介于MS和WPM之間，在藍漿果的組織培養(yǎng)過程中可獲得更好的增殖效果。

為了篩選適宜于南方高叢藍漿果增殖的基本培養(yǎng)基，也為了給南方高叢藍漿果快速繁殖技術(shù)研究奠定實驗基礎(chǔ)，作者對MWPM、WPM、MS－WPM(MS與WPM等體積混合而成)、MS－MWPM(MS與MWPM等體積混合而成)和MWPM－WPM(MWPM與WPM等體積混合而成)5種基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝增殖和生長的影響進行了比較研究。

1 材料和方法

1.1 材料

供試材料為擴繁若干代的南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167的組培苗。

1.2 方法

參照文獻［18－20］分別配制MWPM、WPM和MS基本培養(yǎng)基，分別將MS與WPM、MS與MWPM、MWPM與WPM等體積混合配制成MS－WPM、MSMWPM和MWPM－WPM混合培養(yǎng)基。以MWPM、WPM、MS－WPM、MS－MWPM和MWPM－WPM為基本培養(yǎng)基，各培養(yǎng)基中均含2 mg·L－1ZT、20 g·L－1蔗糖和7 g·L－1瓊脂，pH 5.0。每瓶接種5個無菌枝，每種培養(yǎng)基接種3瓶，各重復(fù)3次，置于溫度25℃±2℃、光照度1 800～2 000 lx、光照時間16 h ·d－1的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。5周后統(tǒng)計每個無菌枝的總增殖倍數(shù)(每個無菌枝產(chǎn)生的總枝條數(shù))和有效增殖倍數(shù)(每個無菌枝產(chǎn)生的長度大于或等于1 cm的枝條數(shù))，測量每瓶叢生枝的鮮質(zhì)量、干質(zhì)量(80℃干燥48 h后稱量)、總長度和平均長度(總長度除以該瓶的總枝條數(shù))，參照文獻［21］的方法測定葉片的葉綠素含量。根據(jù)鮮質(zhì)量和干質(zhì)量計算含水量，計算公式為：含水量=〔(鮮質(zhì)量－干質(zhì)量)/鮮質(zhì)量〕×100％。各指標(biāo)均取3次重復(fù)的平均值。

1.3 數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計分析

采用Excel 2003軟件對實驗數(shù)據(jù)進行基本整理，采用SPSS 13.0統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進行相關(guān)性分析、方差分析和Duncan’s新復(fù)極差檢驗。

2 結(jié)果和分析

2.1 基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果叢生枝增殖倍數(shù)的影響

在不同基本培養(yǎng)基中南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝的總增殖倍數(shù)和有效增殖倍數(shù)見表1。

表1 不同基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝增殖的影響1)Table 1 Effect of different basicmedia on clum py shoot proliferation of superior strains A47 and A167 of southern highbush blueberry (Vaccinium corymbosum hybrids)cultivar‘Southmoon’1)

由表1可以看見，同一優(yōu)選系在不同基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)5周后叢生枝的總增殖倍數(shù)和有效增殖倍數(shù)存在明顯差異。對于優(yōu)選系A(chǔ)47來說，在MS－WPM和MS－MWPM混合培養(yǎng)基上叢生枝的總增殖倍數(shù)顯著高于其他培養(yǎng)基處理組；在MS－WPM混合培養(yǎng)基上叢生枝的有效增殖倍數(shù)顯著高于其他培養(yǎng)基處理組；在MWPM－WPM混合培養(yǎng)基上叢生枝的有效增殖倍數(shù)最低，顯著低于其他培養(yǎng)基處理組。對于優(yōu)選系A(chǔ)167來說，在MS－WPM混合培養(yǎng)基上叢生枝的總增殖倍數(shù)顯著高于其他混合培養(yǎng)基處理組；其有效增殖倍數(shù)顯著高于MWPM、WPM和MWPM－WPM培養(yǎng)基處理組，但與MS－MWPM混合培養(yǎng)基處理組間無顯著差異。

2.2 基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果叢生枝質(zhì)量和含水量的影響

不同基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝的鮮質(zhì)量和干質(zhì)量有顯著影響(表2)。在MS－WPM混合培養(yǎng)基上，優(yōu)選系A(chǔ)47叢生枝的鮮質(zhì)量和干質(zhì)量顯著高于其他培養(yǎng)基處理組；而在WPM單一培養(yǎng)基上優(yōu)選系A(chǔ)167叢生枝的鮮質(zhì)量最高，且顯著高于其他培養(yǎng)基處理組；在MS－WPM混合培養(yǎng)基上優(yōu)選系A(chǔ)167叢生枝的干質(zhì)量也最高，顯著高于MWPM、MS－MWPM和MWPMWPM培養(yǎng)基處理組，但與WPM單一培養(yǎng)基處理組間無顯著差異。在MWPM－WPM混合培養(yǎng)基上，優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝的鮮質(zhì)量均最低，優(yōu)選系A(chǔ)47叢生枝的干質(zhì)量最低，優(yōu)選系A(chǔ)167叢生枝的干質(zhì)量也接近最低水平。相關(guān)性分析結(jié)果表明，南方高叢藍漿果叢生枝的鮮質(zhì)量和干質(zhì)量與總增殖倍數(shù)的相關(guān)性均達到極顯著水平(P＜0.01)，相關(guān)系數(shù)分別為0.777和0.743，表明總增殖倍數(shù)較高，叢生枝的質(zhì)量相應(yīng)也大。

由表2還可見，不同基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果叢生枝的含水量也有較大影響。在WPM單一培養(yǎng)基上優(yōu)選系A(chǔ)47的叢生枝含水量最高，顯著高于MWPM、MS－MWPM和MWPM－WPM培養(yǎng)基處理組，但與MS－WPM混合培養(yǎng)基間無顯著差異。在WPM單一培養(yǎng)基上優(yōu)選系A(chǔ)167叢生枝的含水量也最高，顯著高于MWPM和MWPM－WPM培養(yǎng)基處理組，但與MS－WPM和MS－MWPM混合培養(yǎng)基處理組間無顯著差異。相關(guān)性分析結(jié)果表明，南方高叢藍漿果叢生枝的含水量與總增殖倍數(shù)的相關(guān)性達極顯著水平(P＜0.01)，相關(guān)系數(shù)為0.656，表明總增殖倍數(shù)高的叢生枝其含水量也高。

表2 不同基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝鮮質(zhì)量和干質(zhì)量及含水量的影響1)Table 2 Effect of different basicmedia on fresh and dry weights and water content of clumpy shoot of superior strains A47 and A167 of southern highbush blueberry(Vaccinium corymbosum hybrids)cultivar‘Southmoon’1)

2.3 基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果叢生枝長度的影響

不同基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝總長度和平均長度的影響見表3。對于優(yōu)選系A(chǔ)47而言，在MWPM、MS－WPM和MS－MWPM培養(yǎng)基上叢生枝的總長度均顯著高于WPM和MWPM－WPM培養(yǎng)基；在MWPM單一培養(yǎng)基上，叢生枝的平均長度最大，為1.72 cm，顯著高于其他培養(yǎng)基處理組；而在MWPM－WPM混合培養(yǎng)基上，叢生枝的總長度最小，平均長度也最小。對于優(yōu)選系A(chǔ)167而言，在MS－MWPM混合培養(yǎng)基上叢生枝的總長度顯著高于其他培養(yǎng)基處理組；在MWPM單一培養(yǎng)基上叢生枝的平均長度最高，顯著高于MS－MWPM和MWPM－WPM混合培養(yǎng)基處理組，與WPM和MS－WPM培養(yǎng)基處理組無顯著差異，但在MWPM單一培養(yǎng)基上叢生枝的總長度卻最低。

相關(guān)性分析結(jié)果表明，南方高叢藍漿果叢生枝的總長度與總增殖倍數(shù)、有效增殖倍數(shù)、鮮質(zhì)量、干質(zhì)量和含水量均呈極顯著的正相關(guān)關(guān)系(P＜0.01)；而叢生枝的平均長度與總增殖倍數(shù)呈極顯著的負相關(guān)關(guān)系(P＜0.01)，相關(guān)系數(shù)為－0.476。這可能是由于總長度與其他指標(biāo)一樣，反映了叢生枝的整體生長狀況，因此具有一致的變化趨勢；而平均長度顯示的是叢生枝單株的平均長度，在總長度相近的情況下，當(dāng)總增殖倍數(shù)升高時，叢生枝的平均長度下降。

表3 不同基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝總長度和平均長度的影響1)Table 3 Effect of different basic media on total and average lengths of clumpy shoot of superior strains A47 and A167 of southern highbush blueberry（Vaccinium corymbosum hybrids）cultivar‘Southmoon’1)

2.4 基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果叢生枝葉片葉綠素含量的影響

不同基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝葉片葉綠素含量的影響見表4。在MS－WPM和MS－MWPM混合培養(yǎng)基上，優(yōu)選系A(chǔ)47叢生枝葉片的葉綠素a和b含量顯著高于其他培養(yǎng)基處理組；在MWPM－WPM混合培養(yǎng)基上，其葉綠素a和b的含量均最低。對于優(yōu)選系A(chǔ)167而言，在WPM、MS－WPM和MS－MWPM培養(yǎng)基上叢生枝葉片的葉綠素a含量顯著高于MWPM和MWPM－WPM培養(yǎng)基處理組，而在MS－MWPM混合培養(yǎng)基上葉綠素b含量顯著高于MWPM和MWPM－WPM培養(yǎng)基處理組，但與WPM和MS－WPM培養(yǎng)基處理組無顯著差異。

表4 不同基本培養(yǎng)基對南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝葉片葉綠素含量的影響1)Table 4 Effect of different basic media on chlorophyll content in leaf of superior strains A47 and A167 of southern highbush blueberry (Vaccinium corymbosum hybrids)cultivar‘Southmoon’1)

3 討論和結(jié)論

本研究中，在MS－WPM混合培養(yǎng)基上，南方高叢藍漿果優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝的總增殖倍數(shù)、有效增殖倍數(shù)、叢生枝總長度及葉綠素含量均高于WPM和MWPM單一培養(yǎng)基，且大部分指標(biāo)數(shù)據(jù)顯著高于WPM和MWPM單一培養(yǎng)基；在MS－WPM混合培養(yǎng)基上，叢生枝鮮質(zhì)量、干質(zhì)量及含水量與WPM和MWPM單一培養(yǎng)基相當(dāng)?？傮w而言，在MS－WPM混合培養(yǎng)基上南方高叢藍漿果叢生枝增殖快、長勢旺、葉色綠，其增殖效果明顯優(yōu)于WPM和MWPM單一培養(yǎng)基，這一研究結(jié)果與Tetsumura等［17］的研究結(jié)論一致。其原因可能是MS－WPM混合培養(yǎng)基綜合了MS和WPM單一培養(yǎng)基的優(yōu)勢，平衡了鹽分濃度，既避免了因WPM單一培養(yǎng)基中鹽分濃度較低而出現(xiàn)的養(yǎng)分不足狀況，又避免了因MS單一培養(yǎng)基中鹽分濃度較高而導(dǎo)致的養(yǎng)分過?，F(xiàn)象，更加有效地調(diào)節(jié)了培養(yǎng)基中的氮素濃度，對因氮素不足而出現(xiàn)的新枝發(fā)紅的癥狀有一定的改善作用。

在MS－MWPM混合培養(yǎng)基上，南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝各指標(biāo)均優(yōu)于或與WPM和MWPM單一培養(yǎng)基相近，叢生枝增殖速度較快、長勢較旺盛、葉色綠。總體而言，在MSMWPM混合培養(yǎng)基上南方高叢藍漿果叢生枝的增殖效果優(yōu)于WPM和MWPM單一培養(yǎng)基，但不及MSWPM混合培養(yǎng)基?？赡苁且驗镸S－MWPM混合培養(yǎng)基中的硝態(tài)氮含量高于MS－WPM混合培養(yǎng)基，而藍漿果具有喜氨態(tài)氮特性，在吸收硝態(tài)氮時往往會釋放出大量陰離子，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基pH值升高，進而影響藍漿果對養(yǎng)分的吸收和利用［22－23］。

研究結(jié)果還表明，在MWPM－WPM混合培養(yǎng)基上南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝的增殖倍數(shù)在5種培養(yǎng)基中雖然不是最低的，但叢生枝的各項生長指標(biāo)均較低或最低，這可能是因為WPM和MWPM單一培養(yǎng)基的成分及濃度較為相近，等體積混合后不能起到應(yīng)有的互補作用。

綜合叢生枝的各項測定指標(biāo)，尤其是增殖倍數(shù)、鮮質(zhì)量、干質(zhì)量及葉綠素含量等指標(biāo)，認(rèn)為MS－WPM和MS－MWPM混合培養(yǎng)基較目前常用的WPM和MWPM單一培養(yǎng)基更適用于南方高叢藍漿果品種‘南月’優(yōu)選系A(chǔ)47和A167叢生枝的增殖培養(yǎng)。

［1］楊建民，黃萬榮.經(jīng)濟林栽培學(xué)［M］.北京：中國林業(yè)出版社，2004：369.

［2］於 虹，王傳永，吳文龍.藍漿果栽培與采后處理技術(shù)［M］.北京：金盾出版社，2003：10.

［3］張德巧，於 虹，姜燕琴，等.南方高叢藍漿果‘南月’實生后代果實特性的變異分析［J］.植物資源與環(huán)境學(xué)報，2008，17(3)： 44－48.

［4］Zhang D Q，Yu H，Jiang Y Q，et al.Seedling selection of‘Southmoon’blueberry［J］.Acta Horticulturae，2008，810：65－70.

［5］Tamada T.Growth response of‘Woodard’rabbiteye blueberry to high rates of macronutrients［J］.Acta Horticulturae，2002，574： 355－361.

［6］Tamada T.Fertilizer responsiveness of‘Woodard’in rabbiteye blueberry［J］.HortScience，1992，27：666.

［7］Tamada T.Effect of manganese，copper，zinc and aluminum application rate on the growth and composition of‘Woodard’rabbiteye blueberry［J］.Acta Horticulturae，1997，446：497－506.

［8］Braswell JH，Matta F B，Spiers JM.Influence of N，P，K，Ca and Mg rates on leaf elemental concentration and plant growth of‘Gulfcoast’blueberry［J］.Acta Horticulturae，1997，446：363－368.

［9］Wolfe D E，Eck P，Chin C K.Evaluation of seven media for micropropagation of highbush blueberry［J］.HortScience，1983，18：703－705.

［10］劉樹英，安 偉，孔令學(xué)，等.兔眼越橘芽的誘導(dǎo)及再生［J］.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2004，26(6)：632－635.

［11］黃文江，劉慶忠，闞顯照.高灌藍莓離體繁殖的研究［J］.安徽師范大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2004，27(3)：314－317.

［12］張長青，李廣平，朱士農(nóng)，等.兔眼越橘莖段快繁高效技術(shù)研究［J］.果樹學(xué)報，2007，24(6)：837－840.

［13］段祖安，李建華，強 薇，等.越橘品種‘達柔’離體培養(yǎng)快繁技術(shù)體系的研究［J］.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2008，39(4)：506－510.

［14］Erig A C，Schuch M W.In vitro establishment of blueberry trees starting from nodal segments［J］.Scientia Agraria，2005，6：91－96.

［15］姜燕琴，於 虹，陳靜波.不同基本培養(yǎng)基對南高叢越橘優(yōu)選系增殖的影響［J］.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2009，31(5)：532－537.

［16］劉 捷，吳小鋒，劉學(xué)平，等.藍漿果的組織培養(yǎng)及離體微繁技術(shù)研究［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007(5)：101－103.

［17］Tetsumura T，Matsumoto Y，Sato M，et al.Evaluation of basal media for micropropagation of four highbush blueberry cultivars［J］.Scientia Horticulturae，2008，119：72－74.

［18］Rowland L J，Ogden E L.Use of a cytokinin conjugate for efficient shoot regeneration from leaf sections of highbush blueberry［J］.HortScience，1992，27：1127－1129.

［19］Lloyd G，McCown B.Commercially feasible micropropagation of mountain laurel，Kalmia latifolia，by use of shoot-tip culture［J］.Proceedings of International Plant Propagators’Society，1980，30： 421－427.

［20］Murashige T，Skoog F.A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures［J］.Physiologia Plantarum，1962，15：473－497.

［21］張志良，瞿偉菁.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)［M］.3版.北京：高等教育出版社，2004：67－70.

［22］Merhaut D J，Darnell R L.Ammonium and nitrate accumulation in containerized southern highbush blueberry plants［J］.HortScience，1995，30：1378－1381.

［23］Donald J M，Rebecca L D.Ammonium and nitrate uptake in containerized southern highbush blueberries［J］.HortScience，1991，26：682.