摘 要：目的：建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定金葉接骨木莖葉中齊墩果酸和熊果酸含量的方法。方法：采用Thermo ODS-2HYPERSIL（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（80%：20%）；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，流速0.8 mL/min，柱溫25 ℃。結(jié)果：齊墩果酸的線性范圍為12.17～243.36 μg /mL（r=0.999 9），回收率為98.50%（RSD為3.03）；熊果酸的線性范圍為3.25～64.92 μg（r=0.999 8），回收率為99.49%（RSD為1.37）。金葉接骨木莖中齊墩果酸含量（mg/g）為1.485，熊果酸為0.348；葉中齊墩果酸為0.636，熊果酸為0.437。結(jié)論：本法操作簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可用于金葉接骨木中齊墩果酸與熊果酸的含量測(cè)定。
　　關(guān)鍵詞：金葉接骨木；齊墩果酸；熊果酸；高效液相色譜法
　　中圖分類號(hào)：R282.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007-2349（2011）06-0076-02
　　
　　金葉接骨木（Sambucus canadensis.‘Aurea’）為忍冬科接骨木屬植物加拿大接骨木（Sambucus Canadensis L.）的彩色葉變種，本區(qū)作為觀賞植物從外地引進(jìn)并在銀川地區(qū)栽培［1］。接骨木屬植物有著廣泛的臨床藥用價(jià)值，其中齊墩果酸、熊果酸是接骨木屬植物抗病毒性肝炎活性成分，臨床用于治療急性病毒性肝炎療效顯著［2］。本人在前期的實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)出金葉接骨木的莖葉中含有槲皮素、蕓香苷以及熊果酸、齊墩果酸等化學(xué)成分［3］。金葉接骨木如接骨木屬其他植物一樣具有一定藥用價(jià)值，本文對(duì)銀川地區(qū)引種的三年生金葉接骨木莖葉中齊墩果酸和熊果酸兩種成分進(jìn)行含量測(cè)定，并建立高效液相色譜法測(cè)定金葉接骨木中齊墩果酸和熊果酸含量的方法，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用其植物提供科學(xué)依據(jù)。
　　
　　1 儀器與試藥
　　
　　1.1 儀器 日立L2000高效液相色譜儀（L-2455DAD）檢測(cè)器，L-2300柱溫箱，L-2200自動(dòng)進(jìn)樣器，L-2130四元泵，分析天平（AP210，十萬(wàn)分之一），超聲波提取器（KQ-500B），中藥材粉碎機(jī)（FW100型）。
　　1.2 試藥 齊墩果酸對(duì)照品（批號(hào)110742-200314，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；熊果酸對(duì)照品（批號(hào)8502，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；甲醇（色譜純，美國(guó)天地試劑公司）；乙腈（色譜純，美國(guó)天地試劑公司）；娃哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。
　　
　　2 方法與結(jié)果
　　
　　2.1 色譜條件 色譜柱：美國(guó)Thermo ODS-2HYPERSIL（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸水溶液（80%：20%）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm，流速0.8 mL/min，柱溫：25 ℃。
　　2.2 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱量熊果酸對(duì)照品5.0 mg，齊墩果酸對(duì)照品1.3 mg，共同置5 mL容量瓶中，色譜甲醇溶解，定容，得熊果酸、齊墩果酸混合對(duì)照品溶液，臨用前稀釋［4~5］。在2.1項(xiàng)所述色譜條件下，取對(duì)照品溶液進(jìn)樣10 μL檢測(cè)。得色譜圖1。
　　
　　
　　
　　結(jié)果顯示，齊墩果酸色譜峰保留時(shí)間為28.00 min，熊果酸色譜峰保留時(shí)間在29.59 min，兩者能夠基線分離。
　　2.3 供試品溶液的制備 分別取金葉接骨木的葉和莖藥材，粉碎，過(guò)80目篩，60 ℃干燥至恒重。分別精密稱取適量（相當(dāng)于生藥0.5 g），置200 mL具塞三角錐形瓶中，加入甲醇10 mL，超聲提取40 min，冷卻，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0 mL容量瓶中得金葉接骨木葉和莖藥材供試品溶液。
　　2.4 線性范圍考察 取稀釋后的齊墩果酸、熊果酸混合對(duì)照品溶液（齊墩果酸、熊果酸濃度分別為243.36 μg/mL、64.92 μg/mL），分別稀釋1.5、2、3、4、10、20倍后按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，以峰面積為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。齊墩果酸回歸方程C=0.000 1A+3.440 5，r=0.999 9，表明齊墩果酸在12.17～243.36 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；熊果酸回歸方程C=4×10-5A+0.979 1，r=0.999 8，表明熊果酸在3.25～64.92 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
　　2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一金葉接骨木葉供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定，考察其穩(wěn)定性。記錄峰面積，計(jì)算齊墩果酸和熊果酸峰面積的RSD分別為0.63%、0.81%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
　　2.6 精密度試驗(yàn) 取同一金葉接骨木葉供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算齊墩果酸和熊果酸峰面積的RSD，RSD分別為1.05%、0.73%（n=6）。表明儀器精密度良好。
　　2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱定同一批金葉接骨木葉樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法分別制備6份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，分別按回歸方程計(jì)算齊墩果酸和熊果酸的含量。其RSD值分別為0.85%、1.42%（n=6），表明此方法重復(fù)性良好。
　　2.8 加樣回收率 稱取已知含量的金葉接骨木葉樣品6份，每份約0.5 g，準(zhǔn)確計(jì)算樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量，分別加入適量齊墩果酸和熊ul0Pyuw91QsVYt98lEOByQ==果酸對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣。結(jié)果顯示，齊墩果酸和熊果酸的加樣回收率分別為98.50%（RSD為3.03）和99.49（RSD為1.37），回收率良好。
　　2.9 樣品測(cè)定 分別取金葉接骨木葉和莖藥材粉末約0.5 g精密稱定，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別取10 μL進(jìn)樣檢測(cè)，記錄金葉接骨木莖和葉的色譜圖和峰面積。如圖2、3所示。
　　
　　
　　
　　測(cè)得金葉接骨木莖齊墩果酸與熊果酸含量分別為1.485 mg/g和0.348 mg/g；葉中齊墩果酸和熊果酸的含量分別為0.636 mg/g和0.437 mg/g。
　　
　　3 討論
　　
　　齊墩果酸與熊果酸均屬三萜類化合物，結(jié)構(gòu)相似，其理化性質(zhì)相近，因而在色譜柱上的保留時(shí)間非常相近，如果柱效不高并且流動(dòng)相選擇不當(dāng)時(shí)，很難將其分開(kāi)。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測(cè)定金葉接骨木莖葉中的這兩種成分時(shí)，采用調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，并加大流動(dòng)相中水的比例，可以有效的將兩者分開(kāi)。本法定量準(zhǔn)確，回收率高，并能同時(shí)測(cè)出齊墩果酸與熊果酸的含量，簡(jiǎn)單易行，可做為同時(shí)含有齊墩果酸與熊果酸植物的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。
　　金葉接骨木在我國(guó)多省區(qū)均有栽培，其枝繁葉茂，資源豐富，能否如接骨木屬植物一樣具有藥用價(jià)值，本次實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用其植物提供了一定的科學(xué)依據(jù)。
　　致謝：對(duì)本課題給予幫助的韓義欣、張霞等老師表示感謝！
　　
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　　（收稿日期：2011-04-18）