陜 光 唐 甜

ADO在膀胱尿路上皮癌組織中的表達和意義

陜 光1唐 甜2

(1武漢大學人民醫(yī)院泌尿Ⅱ科;2武漢大學人民醫(yī)院腫瘤Ⅱ科 湖北430060)

目的 探討膀胱尿路上皮癌組織中腺苷(adenosine,ADO)的表達及臨床意義。方法 收集武漢大學人民醫(yī)院病理科2000-2006年有完整臨床和病理資料的膀胱尿路上皮癌存檔蠟塊50例和5例癌旁組織,采用免疫組織化學S-P法檢測50例膀胱尿路上皮癌和5例癌旁組織中ADO的表達水平。采用 HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文報告管理系統(tǒng),對ADO的表達進行定量分析,并用SPSS13.0軟件對各組免疫組織化學反應陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率做單因素方差分析和SNK(q)檢驗。結(jié)果 ADO在膀胱尿路上皮癌中呈低表達,癌旁組織中呈高表達。膀胱尿路上皮癌與癌旁組織相比,差異有顯著性 (P<0.05)。結(jié)論 ADO在膀胱尿路上皮癌中的低表達抑制了腫瘤細胞的凋亡,導致腫瘤細胞增生,ADO在膀胱尿路上皮癌的發(fā)生、發(fā)展中起了重要的促進作用。

膀胱尿路上皮癌; ADO; 免疫組織化學

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,其中95%是膀胱尿路上皮癌,手術治療后的復發(fā)率較高。其發(fā)病率和死亡率均居泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤首位[1]。

腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移是造成患者死亡的主要原因。因此進一步研究膀胱癌的發(fā)生發(fā)展機制,尋找能夠有效預測其生物學行為的指標,對其早期診斷、指導治療和預后具有重要的意義[2,3]。

腺苷(ADO)是體內(nèi)重要的信號分子,其信號途徑涉及炎癥、免疫、腫瘤等,成為近幾年研究的熱點[4]。腺苷是細胞內(nèi)的天然代謝產(chǎn)物之一。當細胞遭遇低氧低糖等環(huán)境生存壓力時,細胞內(nèi)外的腺苷濃度將急劇升高[5]。

實驗采用免疫組化和圖像分析方法檢測和分析了膀胱尿路上皮癌組織中ADO的表達與膀胱尿路上皮癌發(fā)生及發(fā)展的關系,為膀胱尿路上皮癌的診治提供新的實驗依據(jù)。

材料和方法

1.材料

收集武漢大學人民醫(yī)院病理科2004-2006年膀胱尿路上皮癌存檔蠟塊50例(均經(jīng)病理學證實為膀胱尿路上皮癌),其中男性38例,女性12例,平均年齡50.3歲,另5例癌旁組織距瘤緣3-5cm。標本均經(jīng) HE染色,光鏡觀察診斷,按WHO尿路腫瘤組織學分類(2004),浸潤性尿路上皮癌30例,非浸潤性乳頭狀尿路上皮癌;高級別15例,低級別5例;按UICC臨床分期,T1 31例,T2 11例,T3-4 8例。其中未經(jīng)化療的初發(fā)腫瘤28例,化療后復發(fā)腫瘤22例。

2.主要試劑

即用型兔抗人ADO多克隆抗體(北京中杉生物技術有限公司);超敏即用型SP通用型免疫組織化學試劑盒(北京中杉生物技術有限公司);DAB顯色試盒及多聚賴氨酸北京中杉生物技術有限公司)。

3.方法

3.1 常規(guī)石蠟切片,HE染色

3.2 免疫組織化學SP法檢測ADO相關抗原,按說明書操作

新鮮配置的DAB顯色液顯色,光鏡下控制反應時間(約3-5 min),蘇木素復染,中性樹膠封片并鏡檢;用PBS代替一抗作為陰性對照組,購買的陽性片作為ADO的陽性對照組。

4.免疫組織化學結(jié)果判斷

ADO以細胞核或胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應,陰性對照組除細胞核染成藍色外,應無棕黃色反應物。

采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文報告管理系統(tǒng)(同濟千屏影像公司)對ADO的表達進行定量分析,每張切片隨機選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野(×400),測定每個視野下ADO陽性反應的平均光密度、陽性反應面積和所有細胞總面積,計算陽性面積率。以每例5個視野的平均光密度、陽性面積率的平均值作為該例的測量值。(陽性面積率=單位面積中陽性反應的總面積/單位面積中細胞的總面積×100%)

5.統(tǒng)計學處理

對各組免疫組織化學反應陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率作單因素方差分析和q檢驗,檢驗水準α為0.05。

結(jié) 果

1.HE染色

癌旁膀胱上皮可見細胞層次清晰,基底細胞排列整齊,表面蓋細胞胞質(zhì)嗜酸性(圖1)。膀胱尿路上皮癌細胞大小不一,排列紊亂,極性消失,常有瘤巨細胞形成。核大小不等,染色深,核分裂像較多(圖 2)。

2.ADO的表達

膀胱尿路上皮癌胞核內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒,ADO表達弱或呈陰性表達(圖3)。癌旁組織胞核內(nèi)可見較多棕黃色顆粒,ADO呈陽性表達(圖4);圖像分析結(jié)果見表。經(jīng)q檢驗,膀胱尿路上皮癌與癌旁組織之間,ADO的平均光密度及陽性面積率有顯著性差異(P<0.05),見表。

表 膀胱尿路上皮癌和癌旁組織ADO表達的平均光密度和陽性面積率(ˉx±s)Table The average optical density and the rate of positive area of ADO in bladder urothelial cancer and cancer side tissue(ˉx ±s)

討 論

膀胱癌是我國泌尿外科腫瘤中最常見的惡性腫瘤,近年來發(fā)病率呈上升趨勢。發(fā)生率在男性腫瘤中已上升至第4位,在女性腫瘤中位居第8位,其主要的病理類型是膀胱移行細胞癌,膀胱尿路上皮癌約占90%以上[6]。膀胱癌具有復發(fā)率較高的特點,且復發(fā)后腫瘤惡性度增高,浸潤和轉(zhuǎn)移等惡性行為有所增強。因此進一步研究膀胱癌的發(fā)生發(fā)展機制,尋找能夠有效預測其生物學行為的指標,一直是泌尿外科學者研究的重要課題。并且對其早期診斷、指導治療和預后具有重要的意義。

腺苷(ADO)是體內(nèi)合成DNA的重要分子,普遍存在于機體各組織及細胞中,在機體紊亂情況下對心血管和神經(jīng)系統(tǒng)有保護作用。最近發(fā)現(xiàn)ADO在某些特定情況下,如機體缺氧、炎癥和腫瘤組織中,其濃度由于三磷酸腺苷(A TP)分解過快而在短時間內(nèi)急劇升高,導致細胞凋亡。

腺苷受體有四種亞型,分別為A1、A 2A、A 2B、A3受體,它們均為 G蛋白耦聯(lián)受體。在人類,A1與A3受體相似;A2A與A2B受體相似[7]。A1與A3受體激活后通過激活 Gi蛋白抑制腺苷酸環(huán)化酶活性,最終導致磷脂酶 C活性增加。A 2A與A2B受體激活后通過激活 Gs蛋白增加腺苷酸環(huán)化酶的活性。所有四種受體亞型均可以和絲裂原活化蛋白激酶相耦聯(lián),在細胞的生長、存活、分化與死亡中發(fā)揮作用。腺苷是A TP的代謝產(chǎn)物,代謝迅速,半衰期為1.5s[8-10]。在眾多器官組織中,當氧供減少或能量消耗增加時,腺苷作為一種反應性代謝產(chǎn)物釋放到細胞外間隙且啟動受體介導的信號途徑,恢復能量供應與局部能量消耗的平衡。方式有兩種:快速方式為通過調(diào)節(jié)血管的緊張度,慢性方式為通過形成新的毛細血管,即血管發(fā)生。腺苷在組織損傷、缺血、腫瘤生長時大量產(chǎn)生可以促進血管生成[11-13]。

ADO在不同組織可發(fā)揮完全不同的作用,無論是在腫瘤或組織缺血缺氧環(huán)境中,由于A TP分解,都可引起ADO濃度的急劇升高。一般認為,在腫瘤中主要發(fā)揮促進腫瘤細胞凋亡的作用[14]。

本研究發(fā)現(xiàn)ADO在膀胱尿路上皮癌組織中的表達較癌旁組織明顯降低,提示ADO在某些特定情況其濃度由于三磷酸腺苷(A TP)分解過快而在短時間內(nèi)急劇升高,導致細胞凋亡。ADO濃度升高有重要意義,在神經(jīng)、心血管系統(tǒng)中有保護細胞的作用,而在腫瘤等組織卻可引起細胞凋亡,其作用可通過ADO受體或轉(zhuǎn)運進入細胞內(nèi)發(fā)揮,因此ADO在膀胱尿路上皮癌組織中的表達較癌旁組織明顯降低,細胞凋亡減少,導致腫瘤組織中的細胞增殖,然而ADO在膀胱尿路上皮癌的發(fā)生和發(fā)展中起了重要作用。

總之,ADO是體內(nèi)普遍存在且重要的信號分子,其信號途徑與細胞生長、分化等均有聯(lián)系;但同時它又是一個特殊分子,ADO在不同組織可發(fā)揮完全不同的作用,無論是在腫瘤或組織缺血缺氧環(huán)境中,由于A TP分解,都可引起ADO濃度的急劇升高[15],其確切機制有待進一步探討。

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圖 版 說 明

圖1 癌旁組織:可見上皮細胞層次清晰,基底細胞排列整齊,表面蓋細胞胞質(zhì)嗜酸性(→).HE×200

圖2 膀胱尿路上皮癌:膀胱尿路上皮癌細胞大小不一,排列紊亂,極性消失,常有癌巨細胞形成。核大小不等,染色深,核分裂像較多(→).HE ×200

圖3 ADO的表達膀胱尿路上皮癌胞核內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒(→),ADO表達弱(S-P×200)。

圖4 ADO的表達 癌旁組織胞核內(nèi)可見較多棕黃色顆粒(→),ADO表達強(S-P×200)。

EXPLANATIONOF FIGURES

Fig.1 cancer side tissue:the epithelial cell distinctive was Obviously Clear,the basis cell arrange in neat rows,the surface covers the cell was acidophilia.HE×200

Fig.2 Bladder Urothelial Cancer.The cancer cell was size varies、arrangement disorder and polar vanishing,cancer giant cell was common formation.The nuclear was size different and the dyeing depth,the nuclear fission was more.HE×200

Fig.3 the expression of ADO in Bladder Urothelial Cancer.There were few brown particles in the nuclear,which showed expressed weakly.SP×200

Fig.4 the expression of ADO in cancer side tissue.There were plenty of brown particles in the nuclear,which showed ADO expressed strongly.SP×200

Expression and clinical signif icance of ADO in bladder urothelial cancer

Shan Guang1,Tang Tian2
(1Department of Urology,Renmin Hospital of Wuhan university;2Department of Oncology,Renmin Hospital of Wuhan University,Hubei 430060,china)

Objective To investigate the expression and clinical significance of ADO in bladder urothelial cancer.Methods Parafflin-embeded specimen f rom 50 cases of bladder urothelial cancer and 5 cases of normal tissues near the bladder urothelial cancer,which were all filed with f ull pathological and clinical data,were collected f rom the pathology department of the Renmin Hospital of Wuhan University between 2000 and 2006.The expression of ADO was detected by immunohistochemical S-P method.Quantitative analysis of ADO was conducted by high definition pathological graphics context report system(HPIAS-1000).One-way analysisof variance and SNK(q)tests were used to analyse the mean density and the positive area rate of the immunohistochemical results.Results The expression of ADO in bladder urothelial cancer was lower than that in normal tissues(P<0.05).Conclusion The low expression of ADO in bladder urothelial cancer suppresses the apoptosis of tumour cells and causes tumour cell proliferation,so ADO plays an important role in the occurrence and the development of bladder urothelial cancer.

Bladder urothelial cancer; ADO; Immunohistochemistry

R737.14

A

10.3870/zgzzhx.2011.03.013

2011-01-10

2011-04-01

陜光,男(1980年),漢族,博士。