朱恒乾,陳朝喜,廖曉萍

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院廣東省獸藥研制與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東廣州510642;2.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,四川成都610041)

大腸桿菌是禽類肉食品的主要污染源之一,對(duì)禽類肉制品的質(zhì)量有著十分重要的影響。近年來,對(duì)于抗生素在食用動(dòng)物上的使用所導(dǎo)致的耐藥性的研究逐漸增加,并且這種耐藥性可以通過食物鏈傳給人體內(nèi)的微生物群[1],因此,禽源大腸桿菌耐藥性的產(chǎn)生可能導(dǎo)致嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。國外對(duì)食品源大腸桿菌已有較完善的監(jiān)測(cè)系統(tǒng),其中,德國[2]、日本[3]、西班牙[4]、美國[5],法國[6]及歐盟[7]都有細(xì)菌監(jiān)測(cè)結(jié)果的報(bào)道,而國內(nèi)雖有大量的畜禽病原菌耐藥性的研究報(bào)道[8],但我國對(duì)食品源病原菌耐藥性監(jiān)測(cè)仍處于初級(jí)階段。隨著細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生和發(fā)展,結(jié)合抗菌藥物的高使用頻率和用量加大,導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性問題越來越突出[9]。研究證明,細(xì)菌耐藥性的體外試驗(yàn)對(duì)確定藥物的日允許攝入量(ADI)是很有必要的[10]。本研究針對(duì)廣東省10多個(gè)地市多家禽類養(yǎng)殖場(chǎng)2007年至2009年分離得到的378株大腸桿菌進(jìn)行耐藥性研究,以分析目前禽類養(yǎng)殖業(yè)臨床用藥情況及耐藥性變遷的發(fā)展趨勢(shì),為臨床合理使用抗生素提供參考,并對(duì)我國食品源細(xì)菌耐藥性提供一定的監(jiān)測(cè)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源與質(zhì)控菌株 2007～2009年從廣東10多個(gè)地市多家禽類養(yǎng)殖場(chǎng)分離到378株大腸桿菌。E.coli 25922為藥物敏感性測(cè)定質(zhì)控菌。

1.2 藥品、試劑及培養(yǎng)基 腸桿菌科細(xì)菌生化編碼鑒定管購自杭州天和微生物試劑有限公司。鹽酸恩諾沙星、環(huán)丙沙星、左氟沙星購自廣州威佳科技有限公司;鏈霉素、卡那霉素、安普霉素、慶大霉素、氯霉素、氟苯尼考、頭孢曲松鈉購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所;頭孢噻呋鈉、四環(huán)素、磺胺甲惡唑購自杭州天和微生物試劑有限公司。LB肉湯、MH肉湯、MH瓊脂和麥康凱瓊脂購自廣東環(huán)凱微生物科技公司。

1.3 細(xì)菌的分離鑒定 將樣品增菌后接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng),挑取紅色不透明中等大小可疑菌落進(jìn)行純化培養(yǎng),并用腸桿菌科細(xì)菌生化編碼鑒定管進(jìn)行鑒定。

1.4 藥物敏感性檢測(cè) 根據(jù)臨床與試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)所推薦的藥物稀釋范圍稀釋藥液,采用瓊脂稀釋法進(jìn)行藥物敏感性檢測(cè)。參照CLSI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性判定。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果 從514個(gè)樣本中分離鑒定得到378株大腸桿菌,分離率為73.54%。

2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 378株臨床分離株對(duì)15種被測(cè)藥物的耐藥率見表1;多重耐藥情況見表2;半數(shù)抑菌濃度(MIC)和有效抑菌濃度(MIC)見表3。

表1 378株臨床分離大腸桿菌對(duì)15種抗生素的耐藥率統(tǒng)計(jì)

表2 378株受試菌對(duì)15種抗菌藥物的多重耐藥

表3 15種抗生素對(duì)受試菌的MIC50、MIC90統(tǒng)計(jì) (μg/m L)

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)廣東地區(qū)多個(gè)禽類養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行禽源大腸桿菌的耐藥性調(diào)查,數(shù)據(jù)表明耐藥性變化情況較明顯。

3.1 臨床分離株對(duì)15種抗生素的耐藥變化情況綜合藥敏數(shù)據(jù)可以得出,細(xì)菌對(duì)所選用抗生素的耐藥率變化情況可以分為三種：(1)耐藥率逐年上升。屬于這種情況的藥物有恩諾沙星、左氧氟沙星、鏈霉素、氟苯尼考和磺胺甲惡唑,其中增幅最高的為鏈霉素(18.08%)。(2)耐藥率逐年下降。有這種變化趨勢(shì)的藥物有環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻呋和四環(huán)素,降幅最大的為頭孢噻呋(8.75%)。(3)耐藥率表現(xiàn)為2008年最高,2009年次之,2007年最低,這些藥物包括阿米卡星、安普霉素、慶大霉素和多西環(huán)素。

3.2 受試菌株對(duì)15種抗生素多重耐藥情況 由多重耐藥數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出,細(xì)菌的耐藥性較嚴(yán)重,耐藥譜主要集中在5耐至12耐。從耐藥譜可知,2007年多重耐藥率為49.17%,2008年為52.02%,而2009年已達(dá)到67.50%。統(tǒng)計(jì)數(shù)字說明,臨床分離的禽源大腸桿菌多重耐藥率在逐年上升。細(xì)菌對(duì)各種抗生素均有一定的耐藥性,表現(xiàn)為多重耐藥,這提示我們臨床用藥已不能僅僅使用單一藥物來治療細(xì)菌感染。由實(shí)地調(diào)查得出,養(yǎng)殖場(chǎng)中用藥情況復(fù)雜,復(fù)雜的用藥情況一方面有利于疾病的治療,但同時(shí),受試菌的多重耐藥性的產(chǎn)生與臨床上復(fù)雜的用藥情況有密切的關(guān)系,用藥情況越復(fù)雜越容易導(dǎo)致多重耐藥性的產(chǎn)生。

3.3 MIC50與MIC90數(shù)據(jù)分析 由表3可知,15種抗生素的MIC50數(shù)值變化幅度較小,多數(shù)表現(xiàn)為逐年2倍的增長(zhǎng)趨勢(shì),而MIC90多表現(xiàn)為逐年4倍的增長(zhǎng)趨勢(shì)。抑菌濃度的逐年提高可以說明細(xì)菌對(duì)多數(shù)抗生素的耐藥水平有一定程度的提高。

3.4 與其他同類耐藥性研究的比較 日本食用動(dòng)物源大腸桿菌耐藥性的監(jiān)測(cè)報(bào)告指出,細(xì)菌對(duì)磺胺間二甲氧芐啶、土霉素、鏈霉素、氨芐西林和卡那霉素耐藥率高,雛雞源大腸桿菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的耐藥率達(dá)10%。近年的細(xì)菌的耐藥呈下降趨勢(shì),但雛雞源大腸桿菌耐藥性仍有所提高。

近年來,國內(nèi)也有大量的食品動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性調(diào)查試驗(yàn)。宋立等[8]對(duì)國內(nèi)不同地區(qū)禽源大腸桿菌的耐藥性試驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn),細(xì)菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的耐藥率為57.1%至66.7%,高于本試驗(yàn)數(shù)據(jù)。本試驗(yàn)中細(xì)菌對(duì)其的耐藥率約為10%,屬低水平耐藥。本試驗(yàn)中的數(shù)據(jù)與其他試驗(yàn)不同的原因可能是所調(diào)查的地區(qū)所使用的飼料和飼養(yǎng)條件有一定的差異,具體原因有待進(jìn)一步調(diào)查研究。

4 結(jié)語

目前,控制耐藥性產(chǎn)生的主要手段就是規(guī)范用藥和減少抗生素的用量[12]。本試驗(yàn)首次對(duì)廣東省10個(gè)地市進(jìn)行禽源大腸桿菌耐藥性變遷進(jìn)行報(bào)道,所研究地區(qū)的大腸桿菌耐藥性率雖低于其他相關(guān)報(bào)道,但可以說明,該地區(qū)禽源大腸桿菌的耐藥水平也已達(dá)到較為嚴(yán)重的程度,提示我們應(yīng)加強(qiáng)食品源細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè),并對(duì)藥物的臨床應(yīng)用進(jìn)行監(jiān)管,以避免藥物的濫用和無指征用藥。

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