賈 婷，吳向陽，仰榴青，肖 輝，鄒 燁，魏 紅

（1.江蘇大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；2.江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；3.江蘇大學(xué)藥學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013）

氫化物發(fā)生原子熒光法測(cè)定灰樹花中硒含量

賈 婷1，吳向陽2，*，仰榴青3，肖 輝2，鄒 燁1，魏 紅2

（1.江蘇大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；2.江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；3.江蘇大學(xué)藥學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013）

采用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測(cè)定灰樹花中硒含量。用硒標(biāo)準(zhǔn)溶液考察了載流鹽酸濃度、硼氫化鈉濃度、酸介質(zhì)濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響。比較了樣品的兩種前處理方式，得出了最佳測(cè)定條件。結(jié)果表明采用微波消解消化較為完全，優(yōu)于濕法消解；該方法線性范圍為1～10ng/mL，檢出限為0.002ng/mL，精密度為1.3%～4.1%（n=10），回收率為94.96%～97.94%（n=5），測(cè)得灰樹花中硒的含量為0.2242μg/g。本方法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、快速，可用于灰樹花中硒含量的測(cè)定。

原子熒光，灰樹花，硒

灰樹花是一種珍稀的藥食兼用真菌，有“實(shí)用菌王子”之美稱。它不僅味道鮮美，而且富含維生素，鋅、鈣、磷、鐵、硒等多種對(duì)人體有益的礦物質(zhì)，具有抗腫瘤，抗HIV病毒，改善免疫系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)血脂、血糖水平，降血壓等多種藥理活性［1］，目前已開發(fā)出多種灰樹花藥物和保健品。硒是人體和動(dòng)物必需的微量元素，研究發(fā)現(xiàn)，適量補(bǔ)充硒可提高人體免疫力，預(yù)防腫瘤和心血管等疾病的發(fā)生，它被稱為微量元素中“抗癌之王”［2］。然而，當(dāng)食物中缺硒或是含有過量硒時(shí)，都會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。因此，建立一種快速、準(zhǔn)確測(cè)定食用菌中硒的方法十分重要。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)灰樹花多糖研究較多，但對(duì)灰樹花中微量元素硒含量測(cè)定的方法學(xué)研究未見報(bào)道。本文采用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測(cè)定灰樹花中硒含量，比較樣品的兩種前處理方法，研究最佳實(shí)驗(yàn)條件，為灰樹花藥物和富硒保健產(chǎn)品的研究和開發(fā)提供依據(jù)［3］。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

硒標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000ppm） 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心購(gòu)買；灰樹花 浙江方格藥業(yè)提供，60℃真空干燥12h，粉碎，過200目篩備用；NaBH4、HNO3、HClO4、HCl、NaOH等實(shí)驗(yàn)所用試劑 均為優(yōu)級(jí)純；實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水。

AFS-930順序注射雙道原子熒光光度計(jì) 北京吉天儀器有限公司；硒高性能空心陰極燈 北京有色金屬研究總院；不銹鋼電熱板 江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠；MDS-2003F型微波消解儀 上海新儀微波化學(xué)科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品消化 微波消解：準(zhǔn)確稱取5份0.2000g灰樹花子實(shí)體粉末于聚四氟乙烯溶樣杯內(nèi)，加入HNO3∶HClO4=4∶1（V/V）混合酸5mL，搖勻加蓋，置于微波消解儀中，依次按照下列程序進(jìn)行消解：壓力0.5kPa，功率400W，消解時(shí)間6min；壓力0.7kPa，功率600W，消解時(shí)間6min；壓力1.0kPa，功率800W，消解時(shí)間8min，連續(xù)消解樣品，同時(shí)做試劑空白。室溫冷卻，在電熱板上趕酸至剩余體積2mL左右，冷卻，加入6mol/L鹽酸10mL，放置20min后，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，純水定容，備用。

濕法消解：準(zhǔn)確稱取5份0.2000g灰樹花子實(shí)體粉末于50mL錐形瓶中，加入 HNO3∶HClO4=4∶1（V/V）混合酸5mL，冷消化12h，同時(shí)做試劑空白。然后于電熱板上加熱，及時(shí)補(bǔ)加混酸溶液，當(dāng)溶液變?yōu)榍辶翢o色并伴有白煙時(shí)，繼續(xù)加熱至剩余體積為2mL左右，冷卻，加入6mol/L鹽酸10mL，放置20min后，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶，純水定容，備用。

1.2.2 儀器最佳條件 原子化器溫度200℃，原子化器高度8mm，負(fù)高壓270V，燈電流80mA，載氣與屏蔽氣流量分別為400、800mL/min，注入量1mL，讀數(shù)方式為峰面積，讀數(shù)時(shí)間7s，延遲時(shí)間1.5s。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確量取1mL硒標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用2.4mol/L的鹽酸溶液逐級(jí)稀釋得濃度為10.0ng/mL的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液。儀器自動(dòng)稀釋成濃度為1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度，測(cè)得其熒光強(qiáng)度，以硒濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在最佳工作條件下測(cè)得回歸方程為 IF= 28.551C-5.6438，R2=0.9999。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)條件的選擇 以6ng/mL硒標(biāo)準(zhǔn)溶液依次考察了載流鹽酸濃度、硼氫化鈉濃度、酸介質(zhì)濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響，平行測(cè)定3次，優(yōu)選出最佳的實(shí)驗(yàn)條件。

1.2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 在最佳的實(shí)驗(yàn)條件下，分別測(cè)定2、4、6ng/mL硒標(biāo)準(zhǔn)液的熒光強(qiáng)度并計(jì)算其RSD（n=10）。

1.2.6 回收率實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取5份0.2000g樣品粉末，加入25ng/mL硒標(biāo)準(zhǔn)品1mL，按照1.2.1的方法進(jìn)行樣品預(yù)處理，測(cè)定其熒光強(qiáng)度并計(jì)算加標(biāo)回收率。

1.2.7 樣品測(cè)定 在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，依次測(cè)定樣品空白溶液和樣品溶液的熒光強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算硒含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 載流鹽酸濃度的選擇

相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)于硒而言，載流溶液以鹽酸最佳［4］。合適的酸度可以提高待測(cè)元素氫化物的生成和釋放效率，且硼氫化鈉還原反應(yīng)的電位強(qiáng)烈依賴于pH，酸度低時(shí)，可被還原的元素多，引起干擾也較嚴(yán)重，但酸度過大時(shí)，熒光強(qiáng)度進(jìn)入平臺(tái)期，對(duì)儀器的管道有很強(qiáng)的腐蝕作用。硼氫化鈉濃度0.7%時(shí)，不同濃度的載流鹽酸對(duì)6ng/mL硒標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光強(qiáng)度的影響見圖1。可知，隨著載流鹽酸濃度的增加，熒光強(qiáng)度不斷增強(qiáng)，當(dāng)鹽酸濃度為10%時(shí)熒光強(qiáng)度最大，而當(dāng)鹽酸濃度高于10%后，熒光強(qiáng)度隨著濃度的增加而減小。因此，本文選擇10%的鹽酸作為介質(zhì)。

圖1 載流鹽酸濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響（n=3）

2.2 硼氫化鈉濃度的選擇

本方法選擇硼氫化鈉作為還原劑［5］，其濃度大小影響氫化物生成速率和氬氫焰的質(zhì)量。載流鹽酸濃度10%時(shí)，不同濃度的硼氫化鈉對(duì)6ng/mL硒標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光強(qiáng)度的影響見圖2?？芍?，隨著NaBH4濃度的增加，熒光強(qiáng)度不斷增強(qiáng)，當(dāng)NaBH4濃度為0.9%時(shí)熒光強(qiáng)度達(dá)到最大；而當(dāng)NaBH4濃度高于0.9%后，熒光強(qiáng)度隨著濃度的增加而減小。因此，本文選擇NaBH4濃度為0.9%。

圖2 硼氫化鈉濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響（n=3）

2.3 酸介質(zhì)濃度的選擇

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［6］，本文選擇鹽酸作為酸介質(zhì)。鹽酸對(duì)硒元素的測(cè)定具有干擾少，靈敏度高［7］的特點(diǎn)。載流鹽酸濃度10%，硼氫化鈉濃度0.9%時(shí)，不同濃度的鹽酸對(duì)6ng/mL硒標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光強(qiáng)度的影響見圖3。由圖可知，鹽酸濃度在1～7mol/L之間，對(duì)熒光強(qiáng)度的影響較小，而適當(dāng)?shù)乃峤橘|(zhì)濃度可以提高靈敏度、減少過渡金屬離子對(duì)氫化反應(yīng)產(chǎn)生的干擾，因此本文選擇酸介質(zhì)濃度為2.4mol/L。

圖3 酸介質(zhì)濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響（n=3）

2.4 檢出限和線性范圍

在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，測(cè)定空白溶液20次，利用空白溶液的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差與標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的比值得到該方法的檢出限為0.002ng/mL。選擇線性范圍為1.0～10.0ng/mL，此范圍硒標(biāo)準(zhǔn)工作曲線相關(guān)系數(shù)為0.9999。

2.5 精密度

載流鹽酸濃度為10%，硼氫化鈉濃度為0.9%，酸介質(zhì)濃度為2.4mol/L條件下，測(cè)定2、4、6ng/mL的硒標(biāo)準(zhǔn)液熒光強(qiáng)度（n=10），其RSD分別為4.11%、3.51%和1.32%，可知該方法的精密度較好。

2.6 加標(biāo)回收率

由表1可知，濕法消解的回收率為90.72%～99.38%，平均回收率為94.93%，RSD為4.19%；微波消解的回收率為94.96%～97.94%，平均回收率為96.23%，RSD為1.16%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明微波消解的準(zhǔn)確度較高。

表1 加標(biāo)回收率測(cè)定

2.7 樣品測(cè)定

由表2可知，微波消解前處理的硒含量測(cè)定值明顯高于濕法消解，并且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，說明微波消解消化較為完全，優(yōu)于濕法消解。因此，微波消解適用于灰樹花樣品的前處理。

表2 樣品測(cè)定（平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差，n=5）

3 結(jié)論

微波消解消化較為完全，優(yōu)于濕法消解。實(shí)驗(yàn)最佳條件為載流鹽酸濃度10%、硼氫化鈉濃度0.9%、酸介質(zhì)濃度2.4mol/L。微波消解前處理、氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法適用于灰樹花中微量元素硒含量的測(cè)定，該法靈敏度高、準(zhǔn)確度好、精密度高、操作簡(jiǎn)便、成本低。

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Determination of total selenium in grifola frondosa by hydride generation atomic fluorescence spectrometry

JIA Ting1，WU Xiang-yang2，*，YANG Liu-qing3，XIAO Hui2，ZOU Ye1，WEI Hong2
（1.College of Chemistry and Chemistry Engineering，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China；2.College of Environment，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China；3.College of Pharmacy，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China）

To establish the method of hydride generation-atomic fluorescence spectrometry for the determination of selenium in Grifola frondosa.The best determination conditions including the concentration of carrier hydrochloride，sodium borohydride，medium acid were selected by standard solution.The two kinds of sample pre-treatment methods were compared，the best determination condition was selected.The results revealed that microwave digestion was more complete in sample pre-treatment，which was better than the wet digestion.The linear range was 1～10ng/mL，the detection limit was 0.002ng/mL，the precision was 1.3%～4.1%（n=10），the recovery rate was 94.96%～97.94%（n=5），the contents of selenium in Grifola frondosa was 0.2242μg/g.This method could be used to determine selenium in Grifola frondosa.lt was accurate，sensitive，simple and rapid.

atomic fluorescence；grifola frondosa；selenium

TS207.3

A

1002-0306（2011）02-0338-03

2009-09-22 *通訊聯(lián)系人

賈婷（1984-），女，碩士研究生，從事應(yīng)用化學(xué)研究。