付靜濤 曹授俊 范永剛 陳學(xué)生 肖西山 （北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 房山 102442 甘肅省酒泉市畜牧服務(wù)中心 北京市平谷區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）

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受體牛移植后再次放栓對(duì)妊娠率的影響

付靜濤①*曹授?、俜队绖偄坳悓W(xué)生②肖西山①（①北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 房山 102442 ②甘肅省酒泉市畜牧服務(wù)中心 ③北京市平谷區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）

本試驗(yàn)采用對(duì)移植后的受體牛再次陰道內(nèi)放入本牛用過的CIDR(孕酮陰道栓)的方法，對(duì)妊娠率進(jìn)行對(duì)比研究。結(jié)果表明：再次放栓組妊娠率(育成牛63.64%和經(jīng)產(chǎn)牛60.98%)略高于未再次放栓組(育成牛53.66%和經(jīng)產(chǎn)牛53.85%)，但無顯著性差異(P>0.05)。

受體牛 胚胎移植 放栓 妊娠率

應(yīng)用現(xiàn)代繁殖生物技術(shù)加速品種改良及擴(kuò)大種群是目前國際上推動(dòng)畜牧業(yè)，尤其是養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展的重要途徑之一。現(xiàn)代繁殖生物技術(shù)涉及到對(duì)種質(zhì)細(xì)胞—精子、卵和胚胎在體外進(jìn)行細(xì)胞或遺傳水平的操作，再通過胚胎移植產(chǎn)生人們所需要的個(gè)體乃至群體。而移植后胚胎在母體子宮的著床率直接影響著繁殖生物技術(shù)應(yīng)用的效率。因而，受體牛妊娠率一直是各國從事繁殖生物技術(shù)研究的科學(xué)家所關(guān)注的焦點(diǎn)之一。胚胎著床涉及到胚胎和受體牛子宮之間的相互作用，是一種高度進(jìn)化和完善的生理過程。本文從受體牛移植胚胎后再次放栓對(duì)妊娠率的影響進(jìn)行了研究，旨在提高受體牛移植妊娠率，從而為胚胎移植產(chǎn)業(yè)化奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 胚胎來源 胚胎引自于加拿大太平洋遺傳中心(Canadian Pacific Genetics Centre)的荷斯坦奶牛體內(nèi)生產(chǎn)的胚胎。

1.1.2 胚胎冷凍方法 采用1.5mol/L乙二醇為抗凍保護(hù)劑的常規(guī)冷凍法。

1.1.3 受體牛的選擇及飼養(yǎng)管理 受體牛來源于甘肅省酒泉市，品種為黃牛雜交牛、西門塔爾雜種牛和低產(chǎn)黑白花奶牛。其中包括育成牛和經(jīng)產(chǎn)牛、年齡在2~8周歲。同期發(fā)情處理前進(jìn)行兩次直腸檢查，選擇無繁殖障礙性疾病、健康、體況達(dá)到中等以上，斷奶40d以上，且具有正常發(fā)情周期的210頭母牛做受體實(shí)施同期發(fā)情處理。受體母牛在同期發(fā)情處理45d前加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，補(bǔ)飼富含維生素、礦物質(zhì)的全價(jià)配合飼料和適量胡蘿卜。

1.1.4 藥品和儀器 5%亞硒酸鈉VE注射液：亞硒酸鈉10mg+500IUVE/10ml/支(東臺(tái)市動(dòng)物藥廠，上海)。CIDR：1.38g孕酮/支(Duirs PfarmAg Ltd；New Zealand)。PGF2α：0.2mg/支(上海計(jì)劃生育研究所)。移植槍、硬外套、軟外套(法國進(jìn)口)。

1.2 方法

1.2.1 同期發(fā)情處理 采用CIDR聯(lián)合使用PGF2α法對(duì)受體母牛進(jìn)行同期發(fā)情處理。在受體牛發(fā)情周期的任意一天于陰道內(nèi)埋置CIDR，第9天肌肉注PGF2α0.6 mg/頭(經(jīng)產(chǎn)牛)或0.5mg/頭(育成牛)，第12天取出CIDR(清洗消毒后保存，并標(biāo)記牛號(hào))，于24~48h開始觀察發(fā)情，并準(zhǔn)確記錄發(fā)情時(shí)間。

1.2.2 胚胎解凍 冷凍胚胎的細(xì)管首先空氣浴7~8s，然后在32℃水浴中解凍10s，拔掉栓塞即可裝入移植槍進(jìn)行移植，但要求在解凍后8~10min內(nèi)移植完畢。

1.2.3 胚胎移植 采用一步細(xì)管法直接移植165頭。移植前首先對(duì)受體牛確認(rèn)發(fā)情時(shí)間，并結(jié)合直腸檢查，觸摸黃體發(fā)育是否合格，對(duì)黃體合格的受體牛實(shí)施胚胎移植。致密桑椹胚可移植于發(fā)情后6.0~7.0d的受體，早期囊胚和囊胚可移植于7.0~7.5d的受體。

1.2.4 再次放栓 把同期發(fā)情時(shí)用過的CIDR進(jìn)行消毒處理，隨機(jī)選取85頭(育成牛44頭，經(jīng)產(chǎn)牛41頭)移植后的受體(對(duì)應(yīng)本牛用過的CIDR)再次放入陰道內(nèi)，10d后取出。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用χ2檢驗(yàn)

2 結(jié)果

對(duì)165頭受體牛進(jìn)行分組試驗(yàn)，其中85頭移植后再次陰道內(nèi)放置用過的CIDR，80頭未用。再次放入組妊娠率略高于未放置組，但差異不顯著(P>0.05)，見附表。

附表 移植后再次放栓的效果比較

牛的類型是否放栓移植頭數(shù)妊娠頭數(shù)妊娠率(%) 育成牛是442863.64ａ 否412253.66ａ 經(jīng)產(chǎn)牛是412560.98ａ 否392153.85ａ

注：同一欄數(shù)值中具有相同字母表示無顯著性差異(P>0.05)

3 討論

妊娠涉及胚胎和母體子宮間妊娠信號(hào)的建立、附植的發(fā)生和胎盤的形成等一系列分子事件[1]。同時(shí)妊娠率也受胚胎質(zhì)量、受體牛同期化程度、胚胎移植和胚胎體外操作技術(shù)水平以及孕激素水平等因素的影響[2]。

盧淮武等[3]報(bào)道，孕酮影響子宮平滑肌細(xì)胞的通透性，使細(xì)胞內(nèi)鉀離子濃度降低，鈉離子濃度升高，肌纖維松弛，興奮性降低，同時(shí)降低妊娠子宮對(duì)縮宮素的敏感性，減少子宮收縮，有利于受精卵在子宮內(nèi)生長發(fā)育。

董金蓮等[4]報(bào)道，排卵后補(bǔ)充孕激素起到改變顆粒細(xì)胞的促性腺素受體含量，從而調(diào)節(jié)黃體化過程，促使子宮黏膜層加厚，腺體彎曲度增加，分泌功能增強(qiáng)，有利于胚胎著床，促使子宮頸口收縮，子宮頸粘液變稠形成宮頸塞起到保護(hù)作用。

由于孕激素有助于懷孕的過程，移植后再次放入同期發(fā)情時(shí)用過的CIDR，由于CIDR中的孕酮沒有完全釋放，所以繼續(xù)外源性增加孕酮的含量，將有助于周期黃體的維持，提高妊娠率；但是，第2次放CIDR時(shí)，一定要嚴(yán)格消毒，以防造成感染，使妊娠率下降。

由于本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)較少，結(jié)論還有待于進(jìn)一步驗(yàn)證。

[1] Cross James C, Werb Zena, Fisher Susan J. Implantation and the placenta key pieces of the development puzzle. Science, 1994, 266: 1508-1518.

[2] 付靜濤, 朱士恩, 李樹靜等. 影響受體牛冷凍移植胚胎效果的主要因素[J]. 中國畜牧雜志.2008,17(8): 14-17.

[3] 盧淮武, 周暉, 張建平等. 孕激素在黃體功能不全型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 中國處方藥.2010,03: 36-38.

[4] 董金蓮, 徐有盛等. 黃體酮和維生素治療奶牛不孕癥的試驗(yàn)[J]. 青海畜牧獸醫(yī)雜志.2009, 39(06):22-23.

（2011–04–18）

北京市科委重點(diǎn)項(xiàng)目[H022020060420]和國家科技支撐計(jì)劃[2006BAD04A02-10]部分內(nèi)容資助。

北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院項(xiàng)目[SF-YF-09-16]資助。

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1007-1733(2011)07-0017-02