王海燕，龍子江，袁 藝，徐 燕

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，安徽合肥230036；2.合肥工業(yè)大學，安徽合肥230009；3.安徽中醫(yī)學院藥理教研室，安徽合肥230038；4.安徽農(nóng)業(yè)大學茶與食品科技學院，安徽合肥230036）

皋茶急性毒性安全性評價研究

王海燕1，2，龍子江3，袁 藝1，徐 燕4

（1.安徽農(nóng)業(yè)大學生命科學學院，安徽合肥230036；2.合肥工業(yè)大學，安徽合肥230009；3.安徽中醫(yī)學院藥理教研室，安徽合肥230038；4.安徽農(nóng)業(yè)大學茶與食品科技學院，安徽合肥230036）

目的：通過1次大劑量給藥，觀察小鼠出現(xiàn)的毒性反應及死亡情況，考察皋茶應用的安全性。方法：依據(jù)GB15193-2003《食品安全性毒理學評價程序和方法》進行急性毒性實驗，皋茶水提物小鼠灌胃給藥0.4mL/10g體重，灌胃給藥1次，藥后正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察14d。結果：皋茶水提物小鼠灌胃最大給藥量為22.8g浸膏/kg，相當于臨床60kg成人擬定日用量275倍。結論：皋茶水提物口服毒性低，應用較安全。

皋茶，急性毒性，安全性

1 材料與方法

1.1 實驗材料

皋茶 安徽舒城提供；實驗動物 昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，由河南省實驗動物中心提供，合格證號SCXK（豫）2005-0001。

1.2 實驗方法［4-6］

1.2.1 皋茶水提物（浸膏）制備 取皋茶樣品250g，沸水三次浸提（各次茶水比為1∶20、1∶10、1∶10）；三次浸提時間分別為30、20、10min，用100目尼龍濾布擠出茶汁，脫脂棉過濾，合并三次浸提茶湯，減壓濃縮至膏狀。浸膏含量：2.75g生藥/g；擬定人用量：5g浸膏/d（相當于13.75g生藥/d）。保存：4℃冰箱冷藏備用。

表1 皋茶水提物灌胃對雌性小鼠體重的影響（n=10，s）

表1 皋茶水提物灌胃對雌性小鼠體重的影響（n=10，s）

10 / 20.25±1.27 22.80±1.18 25.25±1.14皋茶水提物組14d空白對照組組別 動物數(shù)（n） 劑量（g/kg） 體重（g）用藥前 用藥后7d 用藥后10 62.8 20.10±1.15 22.95±1.21 25.75±1.11

表2 皋茶水提物灌胃對雄性小鼠體重的影響（n=10，s）

表2 皋茶水提物灌胃對雄性小鼠體重的影響（n=10，s）

組別 動物數(shù)（n） 劑量（g/kg） 體重（g）用藥前 用藥后7d 用藥后14d

表3 皋茶水提物灌胃對雌性小鼠食量的影響（n=2籠，s）

表3 皋茶水提物灌胃對雌性小鼠食量的影響（n=2籠，s）

注：每籠有5只小鼠，表4同。

組別 籠數(shù)（n） 劑量（g/kg） 食量（g/籠）用藥前 用藥后7d 用藥后14d

表4 皋茶水提物灌胃對雄性小鼠食量的影響（n=2籠s）

表4 皋茶水提物灌胃對雄性小鼠食量的影響（n=2籠s）

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1.2.2 動物實驗預實驗 取體重18～22g小鼠20只，雌雄各半，禁食（不禁水）8h后，將皋茶浸膏用蒸餾水配制成五種濃度分別為57%（最大濃度）、50%、45%、40%、35%的藥液，每種濃度取4只小鼠進行灌胃給藥1次，0.4mL/10g體重（最大給藥容積），藥后各組小鼠正常飼養(yǎng)，觀察藥后動物全身反應及死亡情況。

1.2.3 正式實驗

1.2.3.1 動物分組 因預實驗沒有測出皋茶水提物小鼠灌胃給藥的最小死亡量，無法測得LD50值，故改測其最大耐受量。取體重18～22g小鼠40只，雌雄各半，適應性飼養(yǎng)5d后，按照性別和體重均分為兩組：空白對照組和藥物組（皋茶水提物組），每組20只，雌雄各半。

1.2.3.2 藥液的配制 臨用前，用蒸餾水將皋茶水提物浸膏配制成濃度為57%的藥液（相當于1.57g生藥/mL）備用。

1.2.3.3 給藥方法 將小鼠禁食（不禁水）8h后，藥物組各鼠分別灌胃上述濃度為57%的藥液（最大濃度）0.4mL/10g體重（最大容積），空白對照組灌胃等容量的蒸餾水，給藥1次，藥后正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察14d。

1.2.3.4 觀察指標 體重和耗食量：用藥前及藥后7、14d稱各鼠體重及日食量一次；毒性癥狀觀察：觀察小鼠的外觀（a.毛發(fā)色澤，是否平順或聳毛；b.皮膚顏色，是否有紅腫、瘀紫、皮疹；c.眼、鼻、口腔是否有異樣分泌物或嘔吐物；d.呼吸道反應，是否有咳嗽、噴嚏或哮喘）、行為活動（a.鎮(zhèn)靜或興奮；b.四肢活動；c.是否有抽搐、強直或扭體反應）、糞便性狀（a.顏色；b.成形、半成形或稀便）等全身反應狀況及死亡情況。

2 結果與分析

2.1 預實驗結果

經(jīng)1.2.2預實驗，結果發(fā)現(xiàn)：小鼠連續(xù)觀察7d，無任何異常反應和死亡現(xiàn)象。

2.2 正式實驗結果

藥后及停藥觀察期間，各組小鼠進食、飲水均正常，體重呈增長趨勢，與空白對照組比較無明顯差異（P＞0.05），詳見表1～表4。各組小鼠外觀特征基本正常，毛發(fā)色澤正常，有少數(shù)動物出現(xiàn)聳毛現(xiàn)象，皮膚顏色粉紅正常，耳、眼、口、鼻未見異樣分泌物，呼吸道反應正常，未見咳嗽、哮喘及噴嚏現(xiàn)象，四肢活動、步態(tài)正常，灌胃后24h內，藥物組多數(shù)動物排出棕黑色軟糞便，24h以后糞便逐漸恢復正常，呈灰褐色，顆粒狀成形糞便，無一動物死亡，詳見表5和表6。

3 結論

皋茶水提物小鼠灌胃最大給藥量為22.8g浸膏/kg，相當于62.8g生藥/kg（按照公斤體重折算，相當于臨床60kg成人擬定日用量（5g浸膏/d，相當于13.75g生藥/d）的275倍；按照體表面積折算，相當于臨床成人日用量的35倍）；實驗結果表明：皋茶水提物口服給藥毒性較低，應用較安全。

［1］方文培.中國植物志［M］.第46卷.北京：科學出版社，1981.

［2］方文培.中國槭樹科的修訂［J］.植物分類學報，1966，11（2）：139.

［3］徐延志.槭樹科的地理分布［J］.云南植物研究，1996，18（1）：43-50.

［4］李儀奎.中藥藥理實驗方法學［M］.第二版.上海：上?？茖W技術出版社，2006：1001-1007.

［5］陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：1131.

［6］中華人民共和國衛(wèi)生部GB111593-94.食品安全毒理學評價程序和方法［S］.北京：中國標準出版社，1995.

Acute toxicity evaluation of Gaocha

WANG Hai-yan1，2，LONG Zi-jiang3，YUAN Yi1，XU Yan4
（1.College of Life Science，Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China；2.Hefei University of Technology，Hefei 230009，China；3.Anhui University of Traditional Chinese Medicine，Hefei 230038，China；4.College of Tea&Food Science and Technology，Anhui Agricultural University，Hefei 230036，China）

Objective：Through once large dose feeding Gaocha and observing the rapid toxicity effect on the mice， the safety of Gaocha was studied.Methods：The test of acute toxicity according to GB15193-2003（Appraisal process and Methods of Toxicity of Food Safety）was carried out to research the toxicology of food of the Gaocha. The mice were feed Gaocha with 0.4mL/10g each time，after that were feed normal.Then observed and recorded in the next 14d.Results：There was no evident poisoning symptom or any death for animals after test on the young mice of different sex which had eaten the Gaocha with 22.8g/kg.Be equivalent to that 275 times of adult drink amounts a day.Conclusion：It is concluded that the Gaocha is highly safe for drinking.

Gaocha；acute toxicity；safety

TS201.4

A

1002-0306（2011）02-0316-03

皋茶是苦茶槭嫩芽葉經(jīng)一系列加工后，制成的一種代茶飲料?？嗖栝剩鄺l槭）（Acer.Ginnala. Maxim），屬植物界被子植物亞門（Angiosperms），雙子葉植物綱（Dicotyledoneae），槭樹科（Aceraceae），槭屬（AcerL），落葉小喬木或灌木，是我國廣大林區(qū)一種有重要經(jīng)濟價值的野生藥用植物資源。它既是良好的庭園和街道觀賞樹木、優(yōu)質纖維樹種、栲膠原料、黑色染料，又是具有治病健身之藥效的新型保健茶飲料皋茶的原料［1-3］。近年來，皋茶以其獨特的品質和保健功能作為一種非茶屬天然植物飲料逐漸在國內市場上走俏，在現(xiàn)代商品市場上嶄露頭角。皋茶資源極為豐富，因基礎研究不足，限制了其開發(fā)力度，目前對皋茶的藥理功能研究甚少，且迄今未見其毒理學研究報告，本文對皋茶急性毒性進行了研究，為進一步研究開發(fā)新型保健飲料提供了基礎研究依據(jù)，同時為皋茶的資源開發(fā)利用（食品和醫(yī)藥領域）奠定初步基礎研究，潛在經(jīng)濟效益、社會效益明顯。

2010-08-13

王海燕（1977-），女，講師，研究方向：植物學教學科研及天然產(chǎn)物開發(fā)與研究。

高校省級優(yōu)秀青年人才基金重點項目（2010SQRL061ZD）。

表6 皋茶水提物灌胃對小鼠死亡情況的影響