師立軍王佩惠貴民

（1.甘肅成紀(jì)生物藥業(yè)有限公司，甘肅天水 741020；2.甘肅中瑞醫(yī)藥有限責(zé)任公司，甘肅蘭州 731000）

當(dāng)歸中阿魏酸水提工藝的單因素考察

師立軍1王佩2惠貴民2

（1.甘肅成紀(jì)生物藥業(yè)有限公司，甘肅天水 741020；2.甘肅中瑞醫(yī)藥有限責(zé)任公司，甘肅蘭州 731000）

目的：優(yōu)選當(dāng)歸中阿魏酸的水提工藝。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定，以當(dāng)歸中阿魏酸的轉(zhuǎn)移率和浸膏得率為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)選出當(dāng)歸中阿魏酸的水提工藝。結(jié)果：當(dāng)歸中阿魏酸的最佳水提工藝為：未過(guò)20目篩網(wǎng)的當(dāng)歸細(xì)粉，在80℃下，提取兩次，初提用10倍量水提取3h，次提用8倍量水提取2h。結(jié)論：水提液中阿魏酸采用高效液相含量測(cè)定方法，優(yōu)選出的水提工藝穩(wěn)定、合理、可行。

當(dāng)歸；阿魏酸；水提；單因素試驗(yàn)

Abstract:Objective: Optimization of process for extraction of ferulic acid from angelica sinensis with water. Methods: By using high ef fi cient liquid phase chromatogram, the transfer rate of ferulic acid and the gaining rate of immersed ointment, which were used as comprehensive evaluation index, were measured. Then, the process of extracting ferulic acid with water was optimized using single factor experiment design. Result: The optimum process for extracting ferulic acid from angelica sinensis is: the fi ne powder of angelica sinensis is extracted twice under 80 ℃. The fi rst extraction is carried out for 3 hours with 10 times water, and the second extraction for 2 hours with 8 times water. Conclusion: The ferulic acid in water extraction liquid can be measured through liquid phase content, and the optimized process is stable, proper and feasible.

Keywords:angelica; ferulic acid; extraction with water; single factor experiment

1 前言

當(dāng)歸是傘形科植物當(dāng)歸 Angelica sinensis（Oliv.）Diels 的干燥根，具有補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止血，潤(rùn)腸通便的功效。當(dāng)歸是一種常用中藥材，在很多中藥制劑中都有應(yīng)用，其活性成分阿魏酸具有抗氧化[1]，清除自由基，保護(hù)血管內(nèi)膜不受損傷；降低膽固醇，防止脂質(zhì)沉積于血管壁；抗血小板功能，具有防止血管壁血栓的生成；增加免疫功能等作用，如何在現(xiàn)有的大工業(yè)生產(chǎn)條件下，消耗最小的生產(chǎn)成本，獲得最大的阿魏酸收率，是一個(gè)很有實(shí)效性的研究課題。以當(dāng)歸中的有效成分阿魏酸的轉(zhuǎn)移率和浸膏得率為綜合考察指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)優(yōu)選當(dāng)歸中阿魏酸的水提工藝，為生產(chǎn)工藝提供科學(xué)依據(jù)。

2 儀器與材料

2.1 儀器

高效液相色譜儀(Waters 600E)，20L不銹鋼桶，電子分析天平，粉碎機(jī)；篩網(wǎng)(20目）；電熱鼓風(fēng)干燥箱。

2.2 試劑與材料

當(dāng)歸（批號(hào)：20091012；產(chǎn)地：甘肅岷縣；來(lái)源：甘肅省天水市藥材公司）經(jīng)甘肅省天水市藥檢所鑒定為道地藥材；阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：20091108）；分析級(jí)甲醇；色譜級(jí)甲醇；分析級(jí)乙醇；色譜級(jí)乙腈；磷酸；微孔濾膜;蒸餾水;注射用水。

3 方法

3.1 分析方法的建立

色譜條件 色譜柱：Symmetry C18(5 μm 4.6× 150 mm Colunmn，Made in lrelaud)柱；流動(dòng)相：乙腈-0.085%磷酸溶液=25：75；流速：1mL?min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：316 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：20μL。[2]

阿魏酸對(duì)照品溶液的制備和檢驗(yàn)當(dāng)歸藥材中阿魏酸含量供試品溶液的制備均按照藥典[2]配制 。

3.2 影響當(dāng)歸中阿魏酸水提的因素

評(píng)價(jià)指標(biāo)的確定 當(dāng)歸中起主要作用的有效性成分為阿魏酸。所以將阿魏酸的提取轉(zhuǎn)移率定為一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)；又因?yàn)樵谥苿┕に囇芯恐?，浸膏量是一個(gè)重要影響指標(biāo)，所以在這里將浸膏得率定為另外一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)。根據(jù)各指標(biāo)成分在工藝選擇中的主次地位，給予不同的加權(quán)系數(shù)，求出綜合質(zhì)量評(píng)分Y，比較不同因素及其各水平對(duì)當(dāng)歸水提工藝的影響大小。

3.2.1 粉碎粒度的影響

提取工藝條件設(shè)定：

提取溫度：90℃；加水倍數(shù)：初次提取10倍，二次提取8倍；

提取時(shí)間：3 h；

提取溶劑：蒸餾水；提取次數(shù)：2次；浸泡時(shí)間：30 min；

粉碎粒度水平確定：

（1）過(guò)60目篩當(dāng)歸細(xì)粉；

（2）過(guò)40目篩而未過(guò)60目篩的當(dāng)歸細(xì)粉；

（3）過(guò)20目篩而未過(guò)40目篩的當(dāng)歸細(xì)粉；

（4）未過(guò)20目篩網(wǎng)的當(dāng)歸細(xì)粉；

（5）當(dāng)歸藥材切制成的飲片。

操作步驟：

按粉碎粒度五水平分別稱(chēng)取約4 kg當(dāng)歸細(xì)粉，按照提取工藝設(shè)定條件加水提取，于設(shè)定時(shí)間取樣1 ml，精濾后進(jìn)液相色譜檢測(cè)。3 h后準(zhǔn)確測(cè)量余液體積，對(duì)藥渣進(jìn)行第二次提取，于設(shè)定時(shí)間取樣1 ml，精濾后進(jìn)液相色譜檢測(cè)。2h后準(zhǔn)確測(cè)量余液體積。

3.2.2 水提溫度的影響[3]

提取工藝條件設(shè)定：

加水倍數(shù)：初次提取10倍，二次提取8倍；提取時(shí)間：3 h；

粉碎粒度：未過(guò)20目篩網(wǎng)的當(dāng)歸細(xì)粉；提取次數(shù)：2次；浸泡時(shí)間：30 min；提取溶劑：蒸餾水。

提取溫度水平設(shè)定：

（1）60℃；（2）70℃；（3）80℃；（4）90℃；（5）煮沸

操作步驟：

稱(chēng)取5份未過(guò)20目篩網(wǎng)的當(dāng)歸細(xì)粉各4 kg，按照提取工藝設(shè)定條件加水提取，于設(shè)定時(shí)間取樣1 ml，精濾后進(jìn)液相色譜檢測(cè)。3 h后準(zhǔn)確測(cè)量余液體積，對(duì)藥渣進(jìn)行第二次提取，于設(shè)定時(shí)間取樣1 ml，精濾后進(jìn)液相色譜檢測(cè)。2 h后準(zhǔn)確測(cè)量余液體積。

3.2.3 加水倍數(shù)的影響

提取工藝條件設(shè)定：

提取溫度：90℃；提取時(shí)間：3 h；粉碎粒度：未過(guò)20目篩網(wǎng)的當(dāng)歸細(xì)粉；

提取次數(shù)：2次；浸泡時(shí)間：30 min；提取溶劑：蒸餾水。

加水倍數(shù)水平的設(shè)定：

（1）7倍 （2）8倍 （3）9倍 （4）10倍 （5）11倍 （6）12倍

操作步驟：

稱(chēng)取5份未過(guò)20目篩網(wǎng)的當(dāng)歸細(xì)粉各4 kg，按照提取工藝設(shè)定條件加水提取，于設(shè)定時(shí)間取樣1 ml，精濾后進(jìn)液相色譜檢測(cè)。3 h后準(zhǔn)確測(cè)量余液體積，對(duì)藥渣進(jìn)行第二次提取，于設(shè)定時(shí)間取樣1 ml，精濾后進(jìn)液相色譜檢測(cè)。2 h后準(zhǔn)確測(cè)量余液體積。

3.2.4 水提次數(shù)的影響

由前面三個(gè)當(dāng)歸中阿魏酸水提單因素考察試驗(yàn)結(jié)果可知：當(dāng)歸中的阿魏酸在經(jīng)過(guò)兩次提取后絕大多數(shù)已經(jīng)提取完全，所以將提取次數(shù)定為兩次。

3.2.5 當(dāng)歸水提時(shí)間的影響

由前面三個(gè)當(dāng)歸中阿魏酸水提單因素考察試驗(yàn)結(jié)果可知：當(dāng)歸中的阿魏酸在初提過(guò)程中，隨著時(shí)間的增加，阿魏酸的轉(zhuǎn)移率逐漸減小，3 h后阿魏酸的轉(zhuǎn)移率增加不明顯，所以將初提時(shí)間定為3 h。在次提過(guò)程中，隨著時(shí)間的增加，阿魏酸的轉(zhuǎn)移率同樣減小，2 h后阿魏酸的轉(zhuǎn)移率增加不明顯，所以將次提時(shí)間定為2 h。

4 結(jié)果與討論

4.1 當(dāng)歸藥材檢驗(yàn)

依照2005版《中國(guó)藥典》測(cè)定：

水分為：10.96%；總灰分： 6.87%； 酸不溶性灰分：1.92%； 浸出物：45.29%。

當(dāng)歸按干燥品計(jì)算其中阿魏酸的含量為0.07979%因此，本品按藥典檢驗(yàn)要求達(dá)標(biāo)，為合格藥材。

4.2 粉碎粒度單因素實(shí)驗(yàn)

由圖1可以看出：粉碎粒度越小，當(dāng)歸中阿魏酸提取完全所用的時(shí)間越少，轉(zhuǎn)移率越高。圖1的縱坐標(biāo)之所以不選擇阿魏酸的轉(zhuǎn)移率是因?yàn)樵诿總€(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)都不能準(zhǔn)確測(cè)量到余液體積，因此，選擇峰面積大小作為縱坐標(biāo)，從側(cè)面反應(yīng)出阿魏酸轉(zhuǎn)移率隨時(shí)間變化的趨勢(shì)。由圖2可以看出：二次提取的阿魏酸轉(zhuǎn)移率相比于一次提取的量要小很多，兩次提取已經(jīng)比較完全，所以沒(méi)有進(jìn)行第三次提取，因此，將提取次數(shù)初步定為兩次。同時(shí)，當(dāng)歸的粉碎粒度越小，阿魏酸的轉(zhuǎn)移率越大。由圖4可以看出：經(jīng)過(guò)水提后，浸膏中所含成分復(fù)雜，阿魏酸含量較低。

根據(jù)各指標(biāo)成分在工藝選擇中的主次地位，給予不同的加權(quán)系數(shù)，求出綜合質(zhì)量評(píng)分Y，Y=(各樣品中浸膏的含量/5個(gè)樣品中最重浸膏重)×30+（各樣品中阿魏酸含量/5個(gè)樣品中阿魏酸最高含量）× 70。

圖1

圖2

圖3

圖4

由圖5最終評(píng)分顯示：隨著當(dāng)歸粉碎粒度的減小，綜合評(píng)分值Y增加且增加趨勢(shì)變緩，所以，在后面當(dāng)歸中阿魏酸水提最佳工藝確定時(shí)，考慮到粒度越小，粉碎工藝越復(fù)雜，工藝成本越高，而相應(yīng)的綜合評(píng)分分值變化不大。因此，在粒度因素水平選擇中，應(yīng)選擇粒度較大的水平。

圖5

圖6

4.3 水提溫度單因素實(shí)驗(yàn)

圖7

圖8

由圖7可以看出，提取溫度為80℃時(shí)，當(dāng)歸中阿魏酸的轉(zhuǎn)移率最大。由圖8可以看出：對(duì)于前四組來(lái)說(shuō)，溫度變化對(duì)于浸膏得率的影響不是太大，煮沸組浸膏重增大明顯。由圖9可以看出，各浸膏中阿魏酸含量較少，80℃提取的浸膏中阿魏酸含量最高。由圖10可以看出，提取溫度應(yīng)不小于80℃，并以80℃為最佳提取溫度。（注：評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同前）

圖9

圖10

4.4 加水倍數(shù)單因素實(shí)驗(yàn)[4]

由圖11可以看出，隨加水倍數(shù)的增加其峰面積減小趨勢(shì)，提取液阿魏酸濃度呈減小趨勢(shì)，除以各自的余液體積后，阿魏酸轉(zhuǎn)移率隨加水倍數(shù)的變化趨勢(shì)見(jiàn)圖12。由圖12可以看出：隨著加水倍數(shù)的遞增，阿魏酸的轉(zhuǎn)移率呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)，當(dāng)加水倍數(shù)為10倍時(shí)，其阿魏酸轉(zhuǎn)移率達(dá)到最大值。由圖13可以看出：隨加水倍數(shù)的遞增，浸膏重的變化與阿魏酸轉(zhuǎn)移率隨加水倍數(shù)遞增所呈現(xiàn)出的變化趨勢(shì)近似。由圖14可以看出：當(dāng)歸水提液中成分復(fù)雜，阿魏酸在浸膏中的含量較低，當(dāng)加水倍數(shù)大于9倍時(shí)，浸膏中阿魏酸含量增加明顯。由圖15可以看出：當(dāng)歸水提的最佳加水倍數(shù)為10倍。（注：評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)同前）

圖11

圖12

圖13

圖14

圖15

5 結(jié)論

在經(jīng)過(guò)上述當(dāng)歸中阿魏酸水提工藝的單因素考察試驗(yàn)后，將最佳水提工藝定為：未過(guò)20目篩網(wǎng)的當(dāng)歸細(xì)粉，在80℃下，提取兩次，初提用10倍量水提取3 h，次提用8倍量水提取2 h。按照最佳工藝提取當(dāng)歸中阿魏酸三次，阿魏酸的轉(zhuǎn)移率為89.71 ±1.42%，水提液中阿魏酸含量采用高效液相測(cè)定方法，優(yōu)選出的水提工藝穩(wěn)定、合理、可行。

[1]閻雪梅.煎煮時(shí)間對(duì)當(dāng)歸中阿魏酸穩(wěn)定性的影響.天津藥學(xué)，2005，17（3）：21.

[2]2005年版《中國(guó)藥典》一部89頁(yè)

[3]呂海濤，王艷麗，王英芹.當(dāng)歸提取液中穩(wěn)定性研究中成藥，2008，30（10）：1555-1557.

[4]王萍，趙生俊，張紅.當(dāng)歸中阿魏酸提取工藝的研究 新疆中醫(yī)藥，2006，24（3）：49-50.

Investigation of Single Factor in Angelica Ferulic Acid Extraction Process

Shi Lijun1Wang Pei2Hui Guimin2
(1. Gansu Chan Gee Pharmaceutical Co., Ltd Tianshui 741020; 2. Gansu Zhongrui Pharmaceutical Co., Ltd Lanzhou 731000)

R943

A

1008-455X(2011) 01-0020-04

2010-11-16

師立軍（1979-），男，工程師，主要從事藥廠(chǎng)生產(chǎn)管理及工藝研究工作。

Tel:13830856986 E-mail:shili0012003@126.com