袁文澤 ，賈 赟 ，蔡曉萍 ，肇慧君 ，孫艷峰 ，簡中友 ，胡傳偉 ，吳 斌

（1. 遼寧出入境檢驗檢疫局， 遼寧大連 116001；2. 大連機(jī)場出入境檢驗檢疫局，遼寧大連 116001）

為了明確野生候鳥是否是引起家禽爆發(fā)禽流感的直接原因，我們希望能夠在中國遼寧境內(nèi)邊境地區(qū)遷徙侯鳥的禽流感病毒流行病學(xué)方面獲得更多的信息。為此，本研究對2009—2010年遼寧境內(nèi)邊境地區(qū)遷徙的野生侯鳥進(jìn)行了流感病毒的流行病學(xué)分析。

1 實驗材料

1.1 檢測樣本收集

從2009年1月到2010年12月，我們根據(jù)野生候鳥的遷徙時間和路線，在春秋兩季分別在遼寧省的大連、丹東、東港、營口、葫蘆島、錦州、盤錦等七個城市的野生候鳥聚居地（包括池塘、湖泊、海邊以及經(jīng)濟(jì)生產(chǎn)禽類附近的水禽管理區(qū)城），共采集了野生候鳥和水禽的血清樣品和拭子樣品，其中白鷺血清共80份，拭子樣品840份。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)抗原和其他診斷試劑

各亞型禽流感病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原H5、H7、H9亞型均購自中國農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所國家禽流感診斷實驗室。禽流感病毒通用型熒光RT-PCR試劑盒和H5、H7、H9亞型禽流感病毒熒光RT-PCR試劑盒為深圳匹基生物科技公司產(chǎn)品。

2 實驗方法

2.1 血凝抑制試驗（HI）

HI實驗按照國家標(biāo)準(zhǔn)：高致病性禽流感診斷技術(shù)（GB/T 18936-2003）規(guī)定的操作方法進(jìn)行。

2.2 病原檢測（采用禽流感病毒熒光RT-PCR方法）

按照GB/T18936-2003規(guī)定的熒光RT-PCR方法操作規(guī)程對離心后的拭子樣品進(jìn)行檢驗。

3 實驗結(jié)果

3.1 遷徙候鳥類和水禽禽流感病毒的血清學(xué)調(diào)查

運用HI方法總共檢測了80份血清樣本的禽流感抗體水平，根據(jù)OIE建議的禽流感抗體陽性標(biāo)準(zhǔn)（HI抗體≥41og2），所檢測的血清樣本對H5、H7、H9等亞型都呈陰性（表1）。

表1 不同品種鳥類血凝抑制實驗結(jié)果（HI抗體≥41og2判為陽性）

3.2 遷徙候鳥類和水禽禽流感病毒的病原檢測

從2009到2010年，我們從840只野生候鳥和水禽中采集了840份咽拭子和肛拭子。采集拭子的鳥類品種和數(shù)量分別是：紅嘴鷗95、白鷺110、夜鷺75、綠頭鴨 68、鴻雁 82、灰雁 80、綠翅鴨 80、燕鷗 95、斑頭雁75。采集的各種野生候鳥和禽類拭子樣品通過2500 r/min離心10 min，按照GB/T18936-2003規(guī)定的熒光RT-PCR方法操作規(guī)程對離心后的拭子樣品進(jìn)行檢驗，檢測結(jié)果均為陰性。

4 討論

自2003年以來，H5N1亞型高致病禽流感相繼在一些東南亞國家如柬埔寨、中國、印度尼西亞、日本、韓國、朝鮮、泰國、越南中暴發(fā)，導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，并威脅人類的健康。據(jù)中國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的信息了解到從2004年1月到2005年8月，中國大陸（主要集中在東南部）共有17個省暴發(fā)了78次HPAI。中國科學(xué)家們就遷徙的鳥類是否是引起家禽禽流感大暴發(fā)的直接原因引起激烈爭論。盡管禽流感對于動物和人都具有重要的生態(tài)學(xué)意義，一些研究結(jié)果暗示野生鳥類為禽流感病毒的自然儲存宿主[1]。尤其是意大利，美國等國家在此方面研究較為深入，他們證實禽流感病毒的各亞型都已從野生水鳥中分離到，但是中國對于野生水鳥與禽流感病毒傳播之間的關(guān)系研究甚少，為了調(diào)查自2009年1月到2010年12月遼寧境內(nèi)遷徙路線上的野生侯鳥在AIV傳播中的作用，我們進(jìn)行了針對AIV的流行病學(xué)調(diào)查分析。我們總共調(diào)查了10種遷徙水鳥，它們分別聚居和遷徙在遼寧境內(nèi)的候鳥遷徙路線上（大連，丹東，東港，葫蘆島，錦州，盤錦，營口）7個邊境地區(qū)的候鳥密集活動區(qū)內(nèi)。所采集的血清樣本對H5、H7、H9亞型禽流感抗原都呈陰性，說明在被檢的野生候鳥樣品中，A型流感病毒（H5、H7、H9亞型）在野生候鳥體內(nèi)可能以低水平傳播，以至用常規(guī)的血清學(xué)方法檢測不到抗體。也可能是由于某些禽流感病毒比較低的免疫原性，或者較低的敏感性以至不能檢測低水平的抗體滴度。

在病原檢測方面通過對2009—2010年遼寧境內(nèi)10種遷徙野生候鳥和水禽采集肛拭子和咽拭子，進(jìn)行禽流感病原檢測，未能檢測到H5、H7亞型高致病禽流感病毒。鑒于以上研究結(jié)果，雖沒有檢測高致病性禽流感病毒，但我們?nèi)孕枰^續(xù)深入研究中國境內(nèi)遷徙水鳥與流感病毒的相互關(guān)系以證實家禽流感暴發(fā)和遷徙野生水鳥作為流感病毒自然儲存宿主之間的關(guān)系。

目前全球范圍的HPAI H5Nl的暴發(fā)與流行可能包含了“野鳥—家禽—野鳥—家禽”的反復(fù)性傳播鏈接，而且每次移轉(zhuǎn)宿主、每一個反復(fù)都可能使病毒的毒性增強(qiáng)。LPAI可以在家禽和野鳥中循環(huán)變異直到HPAI疫情發(fā)生。HPAI病毒對家禽及最初緣起的野鳥都是致命的。所以要密切監(jiān)測野鳥攜帶的禽流感毒株是否為高致病性的病毒，一旦發(fā)現(xiàn)要立即采取措施保護(hù)野生鳥類，同時也要嚴(yán)格控制毒株傳入家禽中。

5 結(jié)論

從研究和監(jiān)測數(shù)據(jù)表明，在2009—2010年期間，在遼寧邊境地區(qū)遷徙停留的野生候鳥和水禽未發(fā)現(xiàn)攜帶高致病性禽流感病毒。沒有直接證據(jù)證明遼寧境內(nèi)和相鄰省區(qū)家禽發(fā)生的禽流感和高致病禽流感與遼寧邊境地區(qū)遷徙野生候鳥有直接關(guān)系，由于監(jiān)測時間和監(jiān)測樣品有限，未建立遼寧邊境地區(qū)野生候鳥和高致病性禽流感流行的直接關(guān)系，需進(jìn)一步開展更大范圍的針對邊境地區(qū)野生候鳥攜帶高致病性禽流感的溯源性調(diào)查研究。

[1]Sharp C B，Kawaoka Y，Jones D J，et al.Coinfection of wild ducks by inflenza A distribution patterns and biological signif i cance. J Virol，1997，71 ：6128-6135.

[2]張?zhí)?，李峰，田國華，等.家禽和野鳥中高致病性禽流感的風(fēng)險分析[J].中國動物檢疫，2009，26（2）：66-67.

[3]趙全邦，馬睿麟，蔡金山，等.青海湖地區(qū)野（候）鳥禽流感流行病學(xué)監(jiān)測[J].中國動物檢疫，2008，25（11）：39-40.