王衛(wèi)華，彭婷婷，晁建敏＊，安蕓,苗方

（菏澤醫(yī)學?？茖W校 山東菏澤274000;?菏澤市牡丹大藥房連鎖公司）

銀杏（Ginkgo biloba L）又名白果,是我國的特種植物,食用、綠化環(huán)境。特別在醫(yī)藥上有很高的利用價值。銀杏葉中黃酮類化合物可分為黃酮、雙黃酮和兒茶素等類化合物，共有36種，主要以苷的形式存在。銀杏黃酮的元有7種，即槲皮素、山柰素、異鼠李素、楊梅素、芹菜素、木草素、三粒小麥黃酮等，前3種是其主要成分［1］。在銀杏葉及提物（GBE）的質量控制中主要檢測這3種黃酮苷元的含量。銀杏葉中黃酮類化合物具有捕獲游離基和抑制血小板活化因子、擴張腦血管、促進血液循環(huán)、抗過氧化等功能，從而廣泛用于治療冠心病、心絞痛，治療老年癡呆癥和增強記憶功能，防治皮膚病、脫發(fā)等疾?。?］。銀杏所特有的值逐步為我們所重視。對銀杏中黃酮的總含量測定的方法較多，為了更好地開展銀杏葉的藥材質量標準化研究，擬建立了分光光度法檢測銀杏葉總黃酮含量的方法，從而為銀杏葉的質量評價提供一種新的依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 UV-2401分 光光度計（島津）。

1.2 試劑 蘆丁對照品（北京藥品生物制品檢定所）其余試劑均為分析純銀杏葉：采收于菏澤郊區(qū)，采后沖洗并將其在烘箱60℃烘至手捏碎，粉碎（60目 ）碎片貯于干燥器中置暗處保存。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的配制 精密稱取蘆丁對照品0.025 g（120℃干燥至恒重）置50 ml容量瓶中，加70%乙醇適量，水浴加熱，溶解，放冷，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，配制成0.5 mg／ml的對照品溶液。

2.2.供試品溶液的配制 精密稱取銀杏葉5.1004 g至100 ml的錐形瓶中，加70%乙醇75 ml，超聲45 min［3］，冷卻，過濾，濾液蒸干 ，用 70%乙醇定容于100 ml容量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 測定波長的選擇 精密移取對照品溶液2.00 ml置10 ml容量瓶中，按順序依次加入5%NaNO2溶液 0.4 ml混勻 ，放置6 min，加10%AlCl3溶液 0.4 ml搖勻，放置6 min，再加入4%NaOH溶液4 ml，并加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻放置15min［4］。同法以對照品溶液吸取0 ml配制的10 ml溶液作為空白，在400～700 nm范圍內進行掃描，確定它們的最大吸收波長為510 nm。

2.4 標準曲線繪制 精密吸取對照品貯備液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 ml分別置于 10 ml容量瓶中，按方法配制，以試劑作空白，于510 nm處分別測其吸收度。以對照品濃度C（mg/ml）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程：A=26.208C+0.0318（ r=0.9993），線性范圍為（0.025 mg～0.250 mg）/ml。

2.5 樣品的測定 取供試品溶液3 ml 3份，照標準曲線繪制，制備待測溶液，以試劑為空白，在510 nm處測定其吸光度，代入回歸方程中得實驗結果，平均百分含量為1.56%。（見表1。）

表1 樣品中總黃酮的含量測定

2.6 穩(wěn)定性實驗 取對照品試液1份每隔10 min測 1次吸光度，顯示在 60 min內穩(wěn)定，RSD為0.43% 。

2.7 精密度實驗 精密吸取同一樣品供試液2 ml，照“標準曲線繪制”中的方法測定吸收度，RSD為1.08% ，表明儀器精密度良好。

表2 加樣回收率試驗結果（mg,%）

2.8 樣品加樣回收率實驗 精密吸取標準溶液0.10 ml、0.20 ml、0.30 ml各1份，分別加入已知含量的供試品溶液3.00 ml，結果見表2。由表中可以看出，分光光度法測定銀杏葉總黃酮中蘆丁平均回收率為99.4%，RSD為0.44% ，回收率良好。

3 討論

本實驗所提取的黃酮類化合物溶液用顯色法測定時會產生渾濁現(xiàn)象，因此該法不能準確地測定總黃酮的含量。高相液相色譜法無疑是使用最多，也是準確度最為可靠的分析方法，但是分析時間相對長、分離效率低、即使采用梯度洗脫技術也難使某些成分完全分離，且儀器比較昂貴，色譜柱易被污染，而且污染后難于清洗，使柱的使用壽命縮短，在工業(yè)中不易推廣［5］。從實驗結果可知，以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定其總黃酮含量，操作簡便，重現(xiàn)性好，結果準確。從紫外掃描圖譜上發(fā)現(xiàn)的510 nm波長總黃酮含量測定的方法經檢驗是可行的，是一種簡便快捷的方法。

針對含量測定配制供試品溶液的不同提取方法，不同提取溶劑，不同溶劑體積及不同提取時間分別考察，結果以75 ml 70%乙醇超聲提取45 min含量最高，雜質較少。

［1］ 王飛娟.銀杏葉中黃酮類化合物的研究進展[J].西北藥學雜志，2010 ，25（2）：155-156

［2］ 于華忠，李國章，曹庸，等.銀杏黃酮的含量測定［J］.中國林副特產，2005，4（2）：22-22.

［3］ 李春紅，潘宏，田吉.香椿嫩葉中總黃酮的含量測定［J］.瀘州醫(yī)學院學報 2010，33（4）：380-382.

［4］ 王浩江，孫體健，曹曉峰.月季花中總黃酮含量測定［J］.山西醫(yī)科大學學報，2007，38（4）：318-319.

［5］ 王新雯，海洪，金文英等.黃酮類化合物含量測定方法的研究進展［J］.遼寧化工，2008，37（12）：857-860.