黃秀梅，趙思俊，王 娟，孫曉亮，譚維泉，曲志娜

（中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

藥物雖然在維護(hù)人類及動(dòng)物健康和福利方面發(fā)揮了重大的作用，但由于抗菌藥物廣泛使用所引發(fā)的耐藥性問題也已成為危及食品安全、動(dòng)物和人類健康的一個(gè)全球性問題。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）是一個(gè)負(fù)責(zé)改善全球動(dòng)物健康狀況的國(guó)際組織，近年來控制和解決動(dòng)物源細(xì)菌耐藥性問題成為其主要工作之一。早在1998年OIE就開始關(guān)注耐藥性的檢測(cè)和控制。2003年，OIE專門成立了“抗菌藥物耐藥性工作組”，針對(duì)抗菌藥物的使用及其耐藥性問題開展了系列工作，制定了獸用抗菌藥物耐藥性監(jiān)測(cè)計(jì)劃的指導(dǎo)原則。

1 監(jiān)測(cè)目的

了解細(xì)菌耐藥性發(fā)展趨勢(shì)；發(fā)現(xiàn)新的耐藥性機(jī)制；為人類和動(dòng)物健康風(fēng)險(xiǎn)性評(píng)估提供足夠的數(shù)據(jù)；為保障動(dòng)物和人類健康相關(guān)措施的制定提供基礎(chǔ)；為指導(dǎo)臨床開具處方和謹(jǐn)慎使用抗菌藥物提供資料。

2 監(jiān)測(cè)內(nèi)容和方式

各成員要對(duì)耐藥性采取主動(dòng)監(jiān)測(cè)及監(jiān)控，被動(dòng)監(jiān)測(cè)和監(jiān)控只能提供輔助信息。主動(dòng)監(jiān)測(cè)須按采樣計(jì)劃主動(dòng)采樣，當(dāng)不屬于采樣計(jì)劃范圍內(nèi)的送檢樣本屬被動(dòng)監(jiān)測(cè)范圍。

要注意調(diào)查的系統(tǒng)性（包括統(tǒng)計(jì)學(xué)方法），常規(guī)采樣和監(jiān)測(cè)要包括農(nóng)場(chǎng)、市場(chǎng)和屠宰場(chǎng)。要制定監(jiān)測(cè)計(jì)劃，確定采樣動(dòng)物源、群體數(shù)及采樣量，并應(yīng)查看獸醫(yī)臨床檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室診斷記錄。

3 抗菌藥物耐藥性監(jiān)測(cè)計(jì)劃的建立

3.1 總則

定期或持續(xù)地對(duì)動(dòng)物源性、食品源性、環(huán)境源性和人源性耐藥細(xì)菌流行變化規(guī)律進(jìn)行監(jiān)控，對(duì)遏制抗菌藥物耐藥性的傳播和指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物具有重要意義。應(yīng)對(duì)食物鏈不同環(huán)節(jié)進(jìn)行動(dòng)物源性細(xì)菌監(jiān)測(cè)，包括食品加工、包裝和銷售等各個(gè)環(huán)節(jié)。

3.2 采樣原則

采樣應(yīng)按統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行，并應(yīng)保證樣品的代表性及采樣方法的穩(wěn)定性。采樣應(yīng)考慮以下因素：樣品大小、樣品來源（動(dòng)物、食品、動(dòng)物飼料）、動(dòng)物種類、同種動(dòng)物的不同類型（按年齡、生產(chǎn)類型分類）、相同類型的動(dòng)物分類、動(dòng)物的健康狀況（健康或疾?。?、隨機(jī)樣本（定向的、系統(tǒng)的）、樣本的采集（動(dòng)物糞便、屠體或食品）等等。

3.2.1 采樣量 樣品量應(yīng)保證足夠耐藥菌的檢出，但不宜過多以免造成資源浪費(fèi)，具體見表1。

表 1 評(píng)估抗菌藥物耐藥性流行的樣本量

3.2.2 樣品來源

3.2.2.1 動(dòng)物 OIE各成員國(guó)應(yīng)考察本國(guó)的畜牧生產(chǎn)體系，經(jīng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估后，才能得出耐藥性的嚴(yán)重性以及對(duì)動(dòng)物和人類健康的影響。采樣應(yīng)該考慮牲畜類別，包括成年牛和犢牛、屠宰豬、肉雞、產(chǎn)蛋雞和/或其它家禽和魚類。

3.2.2.2 食品和動(dòng)物飼料 被污染的食物常被認(rèn)為是將抗菌藥物耐藥性從動(dòng)物傳遞給人類的主要途徑。不同種類的蔬果可能暴露于家畜的糞尿或污水，污染動(dòng)物源性耐藥菌。動(dòng)物飼料，包括進(jìn)口飼料，也應(yīng)在耐藥性監(jiān)測(cè)及監(jiān)控計(jì)劃范圍內(nèi)。

3.2.3 樣品的收集 家畜采集糞便，家禽采集整個(gè)盲腸內(nèi)容物。牛和豬，應(yīng)采集至少5 g的糞便樣才能保證細(xì)菌的分離。在屠宰場(chǎng)采集屠體樣本，應(yīng)提供屠宰方法，屠宰衛(wèi)生條件和在屠宰過程中肉品污染糞便的程度等信息。在銷售環(huán)節(jié)中采集樣本能為消費(fèi)者提供接觸食品前耐藥率變化的相關(guān)信息?，F(xiàn)有的食品加工過程中微生物監(jiān)測(cè)和“危害性分析及關(guān)鍵控制技術(shù)”（HACCP）計(jì)劃，能為屠宰后對(duì)食物鏈進(jìn)行耐藥性監(jiān)測(cè)及監(jiān)控提供有用的樣本。

3.2.4 細(xì)菌的分離 細(xì)菌菌株的分離和鑒定應(yīng)遵循國(guó)際公認(rèn)的操作規(guī)范。監(jiān)測(cè)細(xì)菌的種類：a）動(dòng)物源病原菌。對(duì)動(dòng)物源性病原菌耐藥性監(jiān)測(cè)能為人類和動(dòng)物健康提供保障，并能指導(dǎo)獸醫(yī)臨床合理使用藥物。動(dòng)物源性病原菌耐藥性信息的獲取，主要來自獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室對(duì)臨床送檢病料的分析。這些樣本通常來源自嚴(yán)重感染或治療失敗導(dǎo)致的反復(fù)感染病例，提供的耐藥信息可能有偏差。b）人獸共患病原菌。?。┥抽T氏菌。采集沙門氏菌樣本包括牛、豬、雞及其他家禽。具有重要流行病學(xué)的血清型，如傷寒和腸炎沙門氏菌，應(yīng)該在監(jiān)測(cè)范圍。對(duì)其它血清型進(jìn)行監(jiān)測(cè)，應(yīng)根據(jù)不同國(guó)家流行病學(xué)情況來選擇。所有沙門氏菌分離菌應(yīng)檢測(cè)其血清型。如有必要，可也做菌株的噬菌體分型，分型應(yīng)按國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。ⅱ）彎曲桿菌?？漳c彎曲桿菌和結(jié)腸彎曲桿菌作為共生菌，可從以上樣本中分離。彎曲桿菌分離菌株應(yīng)鑒定到種。推薦采用瓊脂稀釋法或微量肉湯稀釋法用于彎曲桿菌藥物敏感性檢測(cè)。必須嚴(yán)格執(zhí)行質(zhì)量控制程序。ⅲ）腸出血性大腸埃希氏菌。腸出血性大腸埃希氏菌（EHEC），如O157血清型，對(duì)人有致病性，但對(duì)動(dòng)物無致病性的菌株，也應(yīng)在耐藥性監(jiān)測(cè)及監(jiān)控計(jì)劃范圍內(nèi)。c）共生菌。大腸桿菌和腸球菌是常見的共生菌。這些細(xì)菌常被認(rèn)為是耐藥基因的儲(chǔ)庫(kù)，可能將耐藥基因傳遞給致病菌引起動(dòng)物或人感染。這些菌易從健康動(dòng)物體內(nèi)和屠宰場(chǎng)分離獲得，故對(duì)其進(jìn)行耐藥性監(jiān)測(cè)具有重要意義，具體見表2。

表 2 耐藥性監(jiān)測(cè)和監(jiān)控所涉及的動(dòng)物源病原菌種類

3.2.5 菌株的保存 菌株的保存時(shí)間至少到調(diào)查報(bào)告完成時(shí)，最好能作永久保存。所有收集的菌株應(yīng)按年份保存，以便開展回顧性調(diào)查。

3.2.6 藥物敏感性試驗(yàn)抗菌藥物的選擇 人醫(yī)和獸醫(yī)臨床使用的重要抗菌藥物應(yīng)是監(jiān)測(cè)對(duì)象。然而，監(jiān)測(cè)的抗菌藥物種類選擇要取決于該國(guó)的經(jīng)濟(jì)實(shí)力。

3.2.7 數(shù)據(jù)的記錄及保存 定量記錄藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。驗(yàn)證試驗(yàn)應(yīng)按《陸生動(dòng)物手冊(cè)》（Terrestrial Manual）的1.1.6 章中有關(guān)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)方法進(jìn)行。

3.2.8 結(jié)果的記錄、存檔及解釋 a）由于所需保存的信息量大而復(fù)雜，獲取信息時(shí)間不同，故應(yīng)考慮建立數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)相關(guān)資料進(jìn)行保存。b）對(duì)原始數(shù)據(jù)（最初，無法解釋的數(shù)據(jù)）保存是必要的。因?yàn)檫@些數(shù)據(jù)可以對(duì)出現(xiàn)的各種問題，包括將來可能出現(xiàn)的情況作出解釋。c）不同系統(tǒng)（實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)記錄數(shù)據(jù)的比較，以及將數(shù)據(jù)提交給耐藥監(jiān)測(cè)計(jì)劃中心）間數(shù)據(jù)的交換需要有相關(guān)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)的技術(shù)支持。實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)以定量記錄方式收集保存到國(guó)家數(shù)據(jù)庫(kù)。d）記錄的內(nèi)容包括：采樣計(jì)劃；采樣日期；動(dòng)物種類/牲畜分類 ；樣品類型 ；采樣目的；畜禽群或動(dòng)物的地理分布；動(dòng)物年齡。e）實(shí)驗(yàn)室提供的資料應(yīng)包括以下信息：實(shí)驗(yàn)室的屬性；菌株分離日期；出具報(bào)告的日期；細(xì)菌種類和其他相關(guān)的分類特性（如血清型、噬菌體分型、抗菌藥物敏感實(shí)驗(yàn)結(jié)果/耐藥表型）。f）報(bào)告包括耐藥菌株所占的比例，包括藥物敏感性判斷折點(diǎn)值。g）在臨床上，根據(jù)藥敏判斷折點(diǎn)值將細(xì)菌分為敏感、中敏及耐藥菌。這些常被臨床或藥理學(xué)參考的折點(diǎn)值是各國(guó)各自制定的，在國(guó)家間是不同的。h）記錄所使用的參考體系。i）為達(dá)到監(jiān)測(cè)目的，首先要考慮的就是確定微生物敏感性判斷折點(diǎn)值。折點(diǎn)值應(yīng)依據(jù)被監(jiān)測(cè)細(xì)菌MICs的分布范圍或抑菌圈直徑范圍來確定。當(dāng)使用微生物折點(diǎn)值進(jìn)行耐藥性判斷時(shí)，只有確信耐藥的細(xì)菌群是源自正常敏感細(xì)菌群時(shí)才可定義為耐藥。j）必要時(shí)，應(yīng)記錄分離菌株的耐藥表型（耐藥譜）。

3.2.9 標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室和年度報(bào)告 a）各國(guó)應(yīng)設(shè)立國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)中心承擔(dān)以下責(zé)職：協(xié)調(diào)耐藥性監(jiān)測(cè)及監(jiān)控計(jì)劃的相關(guān)事宜；在國(guó)家重要區(qū)域收集信息；撰寫整個(gè)國(guó)家耐藥性情況分析年度報(bào)告。b）國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)中心有權(quán)獲取以下內(nèi)容：原始數(shù)據(jù)；可信和完整的試驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)室間的校正；熟練水平試驗(yàn)結(jié)果；監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)信息；試驗(yàn)方法的相關(guān)信息。

編 譯 自：Harmonisation of national antimicrobial resistance surveillance and monitoring programmes. OIE-Terrestrial Animal Health Code，2011，Chapter6.7.網(wǎng) 址 ：http://www.oie.int/index.php?id=169&L=0&htmfi le=chapitre_1.6.7.htm