楊志欣，孟永海，楊炳友，王秋紅，匡海學(xué)

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、黑龍江省中藥及天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040)

中藥性味理論指導(dǎo)中醫(yī)臨床用藥幾千年，其成果極為豐厚。然而，由于其理論自身哲學(xué)氣息濃厚，內(nèi)容缺乏客觀、規(guī)范化的評(píng)價(jià)體系，導(dǎo)致性味理論對(duì)現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)的指導(dǎo)意義呈下降趨勢(shì)。因此，如何使深刻而豐富的性味理論得到科學(xué)的詮釋是我們面臨的迫切任務(wù)。遵循中醫(yī)藥學(xué)基本理論，本課題組提出了“中藥一味一性，一藥X味Y性(Y≤X)”的假說和基于中藥性味可拆分性和可組合性的研究思路，并構(gòu)建了中藥性味理論研究的新模式［1，2］。吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth］.、石虎［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinaLis(Dode)Huang］或疏毛吳茱萸［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang］的干燥近成熟果實(shí)。2010版《中國(guó)藥典》收載，吳茱萸:辛、苦，熱。為闡明吳茱萸辛味和苦味的物質(zhì)基礎(chǔ)，我們采用與吳茱萸性味功效相關(guān)的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗胃潰瘍、止嘔、止瀉等復(fù)合藥理學(xué)指標(biāo)作為吳茱萸性味功效評(píng)價(jià)體系，對(duì)吳茱萸的各化學(xué)拆分組分的生物學(xué)效應(yīng)進(jìn)行了研究。本文報(bào)道吳茱萸化學(xué)拆分組分的抗炎作用結(jié)果。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小白鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，合格證號(hào)為P00102007號(hào)，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心提供;Wistar大白鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(180±10)g，合格證號(hào)為P00102007號(hào)，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全性評(píng)價(jià)中心提供。

1.2 藥品與試劑

吳茱萸購(gòu)自哈爾濱市藥材公司(產(chǎn)地:貴州銅仁)，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥資源學(xué)教研室王振月教授鑒定為疏毛吳茱萸［Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.var bodinieri(Dode)Huang］的干燥近成熟果實(shí);藥理實(shí)驗(yàn)樣品(蒸餾水;吳茱萸水煎液;7個(gè)化學(xué)拆分組分由實(shí)驗(yàn)室制備［3］);Evans Blue，Scientific research special exporation06/2009。

2 方法

2.1 對(duì)小鼠耳腫脹的影響［4］

昆明種小鼠90只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機(jī)分為9組，每組10只，分別為蒸餾水空白對(duì)照組、吳茱萸水煎液組、吳茱萸內(nèi)酯組、生物堿1組、生物堿2組、醇沉組、20%乙醇洗脫組、95%乙醇洗脫組和揮發(fā)油組。各組禁食12h后灌胃給藥，按小鼠體重0.2mL/10g－1給藥。給藥每日1次，連續(xù)4天，末次給藥1h后，立即在小鼠左耳前后兩面涂抹二甲苯20μL，2h后，將小鼠脫頸椎處死，用手術(shù)剪齊耳根剪下左右兩耳片，用7mm直徑打孔器，分別在同一部位打下圓耳片，用電子天平分別稱兩耳片的重量，每只鼠的左耳片重量減去右耳片重量作為腫脹度，并按下列公式求出各給藥組的腫脹抑制率。

2.2 對(duì)大鼠足趾腫脹的影響［5］

Wistar大鼠90只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機(jī)分為9組，每組10只，分組同2.1。每日給藥1次，灌胃量2.0mL/100g－1，連續(xù)5天。實(shí)驗(yàn)前在大鼠右后足踝關(guān)節(jié)處作標(biāo)記，用足容積測(cè)定儀測(cè)定各鼠右后肢足容積兩次，取平均值作為正常足容積。給藥后30min，每只大鼠右后足跖部皮下進(jìn)針至踝關(guān)節(jié)附近皮下注射10%新鮮雞蛋清溶液0.1mL致炎，分別于致炎后0.5h、1h、2h、4h、6h 測(cè)定致炎足容積，按下列公式計(jì)算各大鼠致炎前后右后腫脹率變化值。

2.3 對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響［5］

昆明種小鼠90只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機(jī)分為9組，每組10只。分組及給藥同2.1。每日給藥1次，連續(xù)4天，末次給藥30min后，小鼠均經(jīng)尾靜脈注射1%的伊文思藍(lán)溶液0.1mL/10g，隨即腹腔注射0.6%的醋酸溶液0.2mL/只，20min脫頸椎處死，剪開腹腔，用6mL生理鹽水洗滌腹腔，吸出洗滌液，3 000r/min離心15min，取上清液，于590nm測(cè)定各組動(dòng)物腹腔洗滌液染料吸光度A值。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠耳腫脹的影響

吳茱萸水煎液及各化學(xué)拆分組分對(duì)小鼠耳腫脹的作用結(jié)果見表1。

表1 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(s，n=10)

表1 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響(s，n=10)

注:與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別 劑量(g/kg)腫脹度(mg)腫脹抑制率(%)－ 11.76 ±3.09吳茱萸水煎液組 1.95 8.49 ±2.46* 38.5揮發(fā)油組 1.95 9.24 ±3.06* 21.4吳茱萸內(nèi)酯組 1.95 10.94 ±2.97 7.0生物堿1 組 1.95 9.04 ±1.74* 23.1 95%乙醇洗脫組 1.95 10.45 ±3.25 11.1醇沉組 1.95 10.99 ±2.93 6.55生物堿2 組 1.95 10.27 ±2.10 12.8 20%乙醇洗脫組 1.95 9.23 ±2.85*空白對(duì)照組21.5

由表1可見，各組給藥后吳茱萸水煎液組對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的抗炎作用與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.01)，腫脹抑制率為38.5%。生物堿1組、20%乙醇洗脫組、揮發(fā)油組對(duì)小鼠耳腫脹的抗炎作用與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，抑制率分別為23.1%、21.5%及21.4%。

表2 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對(duì)大鼠足趾腫脹的影響(s，n=10)

表2 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對(duì)大鼠足趾腫脹的影響(s，n=10)

注:與空白對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

空白對(duì)照組 0.974 ±0.139 44.6 ±11.9 46.4 ±10.1 43.0 ±12.1 4*

3.2 對(duì)大鼠足趾腫脹的影響

吳茱萸水煎液及各化學(xué)拆分組分對(duì)大鼠足趾腫脹的作用見表2。10%新鮮雞蛋清致炎的規(guī)律是0.5h就出現(xiàn)明顯的足腫，此后腫脹繼續(xù)加劇，1h達(dá)到最高值，2h后腫脹開始逐漸恢復(fù)。對(duì)大鼠足趾腫脹的抗炎作用，吳茱萸水煎液組與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，給藥后0.5h就有緩解炎癥的表現(xiàn)，但是與空白對(duì)照組比較作用不顯著(P＞0.05)，1h與空白對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.05)，該作用與空白對(duì)照組比較一直持續(xù)到6h(P＜0.01)。吳茱萸生物堿1組及20%乙醇洗脫組與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。其余各化學(xué)拆分組與空白對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。

3.3 對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

吳茱萸水煎液組及各拆分組分對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的抗炎作用結(jié)果見表3。可見，吳茱萸水煎液組、生物堿1組和20%乙醇洗脫組的抗炎作用與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05);其余各組與空白對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。

表3 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響(s，n=10)

表3 吳茱萸及各化學(xué)拆分組分對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響(s，n=10)

注:與空白對(duì)照組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

空白對(duì)照組 0.753±0.160 95%乙醇洗脫組0.687 ±0.114吳茱萸水煎液組 0.380 ±0.125＊＊醇沉組 0.682 ±0.161揮發(fā)油組 0.709±0.201 生物堿2組 0.628±0.212吳茱萸內(nèi)酯組 0.665±0.095 20%乙醇洗脫組 0.408±0.103＊＊生物堿1組 0.559 ±0.152*

4 討論

吳茱萸生物堿1組、20%乙醇洗脫組對(duì)三種炎癥模型均顯示較強(qiáng)的抗炎作用，此外揮發(fā)油組對(duì)小鼠耳腫脹模型也顯示抗炎作用，故吳茱萸抗炎物質(zhì)基礎(chǔ)為生物堿1組分、20%乙醇洗脫組分、揮發(fā)油組分。

［1］匡海學(xué)，程偉.中藥性味的可拆分、可組合性研究［J］.世界科學(xué)技術(shù) －中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2009，11(6):768－771.

［2］匡海學(xué)，王艷宏，王秋紅，等.基于中藥性味可拆分性和可組合性的中藥性味理論研究新模式［J］.世界科學(xué)技術(shù)－中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2010，12(6):1 －5.

［3］楊志欣，孟永海，王秋紅，等.吳茱萸化學(xué)拆分組分的性味藥理學(xué)評(píng)價(jià)－化學(xué)拆分組分的制備及其鎮(zhèn)痛作用的研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39(4):11 －14.

［4］李宗鐸，趙君枚，李建生，等.毒素清顆?？寡鬃饔玫膶?shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥科技，2006，13(1):42.

［5］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［J］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:305，308.