周燕園，梁臣艷，陸海林，朱小勇(1.桂林醫(yī)學(xué)院，桂林市541004；.廣西中醫(yī)學(xué)院，南寧市530001)

細葉桉果實為桃金娘科植物桉樹屬細葉桉Eucalyptus tereticornisSmith.的果實。細葉桉又名小葉桉、柳葉桉[1]、褐桉樹[2]、羊草果樹[3]，原產(chǎn)澳大利亞，我國福建、廣東、廣西有栽培[4，5]。細葉桉始載于《陸川本草》，藥用部位為其葉子和果實，辛，微苦，溫。具有宣肺利氣、止咳平喘、活血散瘀、清熱解毒、消炎殺菌、收斂殺蟲之功效，用于治療感冒發(fā)熱、咳喘痰嗽、脘腹脹痛、瀉痢、鉤端螺旋體病、跌打損傷、瘡瘍、丹毒、乳癰、疥瘡、癬癢等病[3]。

超臨界流體萃取(Supercritical fluid extraction，SFE)技術(shù)是近年發(fā)展起來的一種分離新技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和香料等行業(yè)。CO2超臨界流體萃取(SFE-CO2)法應(yīng)用于中藥領(lǐng)域，與傳統(tǒng)方法比較，有操作溫度低、分離效率高且無溶劑殘留等優(yōu)點，尤其適用于熱不穩(wěn)定性天然產(chǎn)物的分離精制，是目前研究中草藥等天然產(chǎn)物成分的重要方法之一[6，7]。目前，國內(nèi)、外對SFE-CO2法提取細葉桉果實化學(xué)成分的研究尚未見報道。故筆者采用SFE-CO2法萃取細葉桉果實的有效成分，并用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法進行分析鑒定。

1 儀器與試藥

HL-(5+1)/50 MPa-ⅡAQ型SFE-CO2萃取儀(杭州華黎公司)；Agilent 5973N-6890型GC-MS儀(美國Agilent公司)；LG16-W型高速微量離心機(北京醫(yī)用離心機廠)。

二氧化碳(≥99.5%，廣西南寧藍天醫(yī)用氣體有限責(zé)任公司)；乙醚、無水硫酸鈉均為分析純；細葉桉果實采自廣西南寧市郊外，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院劉壽養(yǎng)副教授鑒定為桃金娘科植物細葉桉E.tereticornisSmith.的果實，樣品經(jīng)自然陰干備用，標本存于廣西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)中心實驗室。

2 方法與結(jié)果

2.1 細葉桉果實SFE-CO2提取方法及條件

取細葉桉果實適量，粉碎，過10目篩，取120 g，采用SFE-CO2技術(shù)萃取揮發(fā)油成分。以揮發(fā)油得率為指標，考察不同萃取釜、分離釜1、分離釜2的壓力和溫度及萃取時間、CO2流量對揮發(fā)油得率的影響，比較最佳提取條件，篩選并確定SFE-CO2法提取細葉桉果實揮發(fā)油的最優(yōu)化工藝條件:萃取釜壓力20～30 MPa反復(fù)升降(溫度40～46℃，1℃·min-1)；分離釜1壓力5 MPa(溫度45℃)；分離釜2壓力6 MPa(溫度35℃)；CO2流量12.0 kg·h-1；萃取時間60 min。從分離釜收集得棕黃色的萃取物共0.56 g，得率為0.47%。取適量萃取物，滴加重蒸乙醚溶解并稀釋10倍，用無水硫酸鈉除去水分，離心后取上清液1 μL注入GC-MS儀進行分析。

2.2 細葉桉果實萃取物GC-MS分析

2.2.1 GC-MS分析條件(1)GC條件:采用HP-5MS毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；柱溫:程序升溫，初始溫度60℃保持1 min，以5℃·min-1升至120℃，保持2 min，再以10℃·min-1升至135℃，保持3 min，以5℃·min-1升至210℃，保持3 min，以2℃·min-1升至230℃，保持1 min，以5℃·min-1升至280℃，保持10 min，最后升溫至280℃，溶劑延遲3.0 min；進樣口溫度:250℃；載氣:高純He；載氣流量:0.8 mL·min-1；進樣量:1 μL；無分流比。(2)MS條件:接口溫度:280℃；電離方式:EI；電子能量:70 eV；離子源溫度:230℃；四極桿溫度:150℃；倍增器電壓:1247 V；掃描范圍:45～550 amu；掃描間歇:2.94次·s-1。

2.2.2 細葉桉果實萃取物分析經(jīng)GC-MS分析后，得到細葉桉果實SFE-CO2提取物的化學(xué)成分總離子流色譜圖，見圖1。對總離子流圖中的各峰經(jīng)MS掃描后得MS圖，經(jīng)過NIST02/WILEY275標準譜圖庫進行檢索，人工譜圖解析，并查對有關(guān)MS資料，從基峰相對豐度等幾個方面進行比較，從而確定出細葉桉果實中的化學(xué)成分，并按照峰面積歸一化法計算各成分的相對含量。

圖1 細葉桉果實SFE-CO2提取物化學(xué)成分總離子流色譜圖Fig 1Total ion current chromatograms of chemical components from the fruits of E.tereticornis extracted by SFE-CO2

按“2.2.1”項下條件對廣西細葉桉果實的SFE-CO2提取物進行成分分析，鑒定出34個化合物，占色譜峰總面積的80.26%，其中以二十九烷(10.36%)、1，1'-(1，2-乙基)二十氫萘(8.20%)、3-(1-甲?；?3，4-亞甲二氧基苯基)苯甲酸甲酯(5.04%)、二十七烷(5.04%)、十五烷(4.84%)、甲氧基肉桂酸乙酯(4.33%)、9-甲基十九烷(4.24%)為主。細葉桉果實SFE-CO2提取物的化學(xué)成分分析結(jié)果見表1。

表1 細葉桉果實SFE-CO2提取物的化學(xué)成分分析結(jié)果Tab 1Analysis of chemical components from the fruits of E.tereticornis extracted by SFE-CO2

續(xù)表1Subtab 1

3 討論

在本文試驗條件下，采用SFE-CO2技術(shù)，所得萃取物的揮發(fā)油成分主要為烷烴、單萜、倍半萜化合物及其衍生物。其中α-水芹烯(3.64%)、左旋樟腦(1.20%)、薄荷酮(0.83%)、(1S)-(-)-冰片(2.27%)、α-松油醇(0.73%)、茴香腦(1.13%)等單萜類總量占相對含量的9.80%；α-蓽澄茄油烯(2.12%)、香樹烯(1.13%)、α-石竹烯(0.95%)等倍半萜類化合物總量占相對含量的4.20%。這些萜類化合物具有止血、抗炎、止痛、消腫、健胃、清熱解毒等多種功效，這與細葉桉果實的藥效基本一致；而且多數(shù)具有較強的香氣和生物活性，是醫(yī)藥、食品、化妝品工業(yè)的重要原料。

SFE-CO2法具有萃取過程短、操作溫度低、有效成分不易被分解破壞、提取收率高、無溶劑殘留等優(yōu)點，在萃取過程中排除了一些化學(xué)成分遇氧氧化及見光反應(yīng)的可能性，既可以提取低沸點的易揮發(fā)性成分，避免破壞具有植物特征的香味成分，使萜烯類組分不易損失；又可以提取出較多的醇、酯、不飽和脂肪酸、長鏈烷烴和熱不穩(wěn)定組分及易氧化的成分，更能真實、全面地反映藥材中的化學(xué)組分，從而可使各組分相對含量的數(shù)值直接用于鑒定藥材質(zhì)量的真假與優(yōu)劣。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，相信這種新技術(shù)在中草藥的研究與新藥開發(fā)中會開辟出更加廣闊的應(yīng)用領(lǐng)域。

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草(第五冊)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999:638-639.

[2]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1977:1482.

[3]《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編(下)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1978:753.

[4]中國科學(xué)院植物研究所.中國高等植物圖鑒(第二冊)[M].北京:科學(xué)出版社，1972:998.

[5]劉玉明，李素芳，吳玉田.桉屬藥用植物資源調(diào)查[J].中草藥，2003，34(10):957.

[6]陳振德，李澎灝，謝立，等.超臨界CO2流體萃取榧樹假種皮揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J].中國藥房，2003，14(9):525.

[7]張建超，方穎，劉焱文，等.正交法優(yōu)化纈草揮發(fā)油超臨界CO2流體提取工藝[J].中成藥，2008，30(2):202.