舒 蕾，任玉鵬，萬 莉，馬 磊，張 琦，謝志勇，楊 映，顏其貴,2*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 雅安 625014；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 雅安 625014）

1 發(fā)病情況和臨床癥狀

四川資陽某規(guī)?；i場(chǎng)采取自繁自養(yǎng)模式，發(fā)展生豬養(yǎng)殖?，F(xiàn)存欄母豬500余頭，2011年4月開始發(fā)病，全場(chǎng)妊娠母豬、泌乳母豬、育肥豬及小豬均發(fā)生腹瀉，其中尤以產(chǎn)房哺乳仔豬最為嚴(yán)重。仔豬發(fā)病率為90%，發(fā)病1周左右死亡較多，也有出生后整窩死亡，該場(chǎng)發(fā)病1個(gè)月以來死亡上千頭，死亡率高達(dá)65%。臨床癥狀主要為2日齡仔豬嘔吐、噴射狀水樣腹瀉、糞便含未消化凝乳片狀物，4～5日齡精神委頓、嚴(yán)重脫水、排黃色稀便，四肢乏力，發(fā)病1周左右仔豬死亡，給豬場(chǎng)造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大。該場(chǎng)發(fā)生疫情后使用氟苯尼考、阿莫西林、泰樂菌素、甲氧嘧啶和頭孢噻呋鈉等藥物對(duì)患豬進(jìn)行治療，均無效果。

2 剖檢病變

剖檢4頭病死仔豬，病死仔豬尸體臟、臭，消瘦，腹部脹滿。發(fā)現(xiàn)尸體明顯脫水，哺乳仔豬胃腸脹滿，胃內(nèi)充滿酸臭的凝乳塊；小腸壁變薄、脹氣、半透明、輕度出血，小腸內(nèi)可見凝乳塊及泡沫樣液體；空腸、回腸絨毛萎縮，腸系膜充血，腸系膜淋巴結(jié)腫大；胃底黏膜輕度充血、出血；病死豬肝、腎臟渾濁腫脹、脂肪變性，有輕微出血點(diǎn)。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病毒檢測(cè)

采取適量病變肺臟組織和淋巴結(jié)，研磨成懸濁液后利用酚氯仿法對(duì)送檢組織總RNA進(jìn)行抽提，利用本實(shí)驗(yàn)室已建立的RT-PCR診斷方法，進(jìn)行PCR檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒及豬輪狀病毒。將產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳。

圖1 病毒RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果

從圖1條帶大小分析檢測(cè)結(jié)果為TGEV陽性，PEDV、豬輪狀病毒陰性。

3.2 細(xì)菌鑒定

將病豬的心、肝、脾、肺、腎臟等組織病料無菌接種到普通瓊脂平板、血清瓊脂平板、兔血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板及伊紅美藍(lán)瓊脂平板，置37℃培養(yǎng)。18～24h后，普通瓊脂平板及血瓊脂平板均長出均一的、表面隆起、圓滑、半透明菌落；在兔血瓊脂平板上呈明顯溶血；麥康凱平板上的菌落呈紅色、有金屬光澤；伊紅美藍(lán)瓊脂平板上形成黑色、具金屬光澤菌落。挑取單個(gè)菌落經(jīng)革蘭氏染色呈陰性，生化鑒定結(jié)果符合大腸桿菌特性，綜合判定優(yōu)勢(shì)菌為大腸桿菌。

3.3 細(xì)菌致病試驗(yàn)及藥敏實(shí)驗(yàn)

挑取典型大腸桿菌單個(gè)菌落于LB肉湯，37℃振蕩培養(yǎng)10h，取培養(yǎng)產(chǎn)物0.2mL接種小鼠，24h后試驗(yàn)5只小鼠均死亡；另取培養(yǎng)產(chǎn)物經(jīng)3倍稀釋后吸0.2mL涂布于LB瓊脂平板，待其干后，用無菌鑷子將藥敏紙片等距貼在培養(yǎng)基表面，倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h，觀察記錄抑菌圈大小。結(jié)果見表1。

以上結(jié)果表明：該大腸桿菌對(duì)林可霉素、氧氟沙星高度敏感，對(duì)磺胺間甲氧芐啶、氟苯尼考、強(qiáng)力霉素、環(huán)丙沙星、痢特靈、頭孢噻呋鈉、復(fù)方新諾明等低敏或不敏感。

4 防治措施

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀觀察、病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室診斷得出結(jié)果后對(duì)該場(chǎng)采取以下病情控制措施：

1）加強(qiáng)對(duì)全場(chǎng)豬舍、環(huán)境的衛(wèi)生及消毒工作，特別是產(chǎn)房及母豬的清潔衛(wèi)生和護(hù)理，消毒藥物可采用0.3%～0.5%過氧乙酸等。

2）對(duì)懷孕母豬產(chǎn)前3～4周注射豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)苗，對(duì)未發(fā)病仔豬預(yù)防接種0.5mL/頭。

3）對(duì)仔豬按1mL0.5%樟腦磺胺酸、2mL5%碳酸氫鈉和2mL維生素C及100mL5%葡萄糖生理鹽水進(jìn)行靜脈輸液，2次/d，連續(xù)3d，飲水中加入補(bǔ)液鹽及黃芪多糖。

4）對(duì)患病母豬飼喂黃芪多糖等提高免疫力，促其自然康復(fù)；對(duì)脫水嚴(yán)重的病豬，靜脈注射5%葡萄糖生理鹽水和5%碳酸氫鈉水溶液等。

5）選取在藥敏試驗(yàn)結(jié)果中敏感性高的藥物對(duì)感染豬口服或注射，如林可霉素、氧氟沙星藥物，按說明書方法及劑量給藥。

通過以上措施，患病仔豬病情減輕、精神好轉(zhuǎn)，產(chǎn)房仔豬患病率明顯降低，第3天無仔豬死亡。新生仔豬未再發(fā)病，豬場(chǎng)恢復(fù)生產(chǎn)。

5 小結(jié)與討論

豬傳染性胃腸炎是由冠狀病毒科冠狀病毒屬的豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)引起的一種急性、高度接觸性傳染的病毒性傳染病，以嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、脫水、2周齡內(nèi)仔豬高死亡率為主要特征[1],且常繼發(fā)細(xì)菌感染[2]。本病于1945年在美國由Doyle等[3]首次報(bào)道了本病的發(fā)生。之后，許多國家和地區(qū)也報(bào)道發(fā)生了本病。中國臺(tái)灣地區(qū)1956年首次報(bào)道了本病的發(fā)生，此后全國大部分省份也相繼有本病發(fā)生的報(bào)道。嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的發(fā)展[4]。

表1 分離大腸桿菌對(duì)12種常見藥物的敏感試驗(yàn)mm

豬傳染性胃腸炎和豬流行性腹瀉均是由冠狀病毒引起的以仔豬發(fā)生嘔吐、腹瀉和脫水為顯著臨床癥狀的兩種傳染病[5]，其流行病學(xué)、病理變化極其相似[6]，難于區(qū)分診斷。目前，國內(nèi)對(duì)這兩種病的鑒別診斷方法主要有病毒中和試驗(yàn)、免疫熒光法、免疫電鏡法、ELISA法和RT-PCR法[7-8]。ELISA法和RTPCR法以其敏感性高、特異性強(qiáng)、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)贏得了廣大生產(chǎn)者及科學(xué)工作者的青睞。在本次診斷中正是利用RT-PCR法對(duì)病樣進(jìn)行診斷，快速、準(zhǔn)確、高效，為養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)病情的掌握，及早采取防治措施贏得先機(jī)，減少了經(jīng)濟(jì)損失。

目前針對(duì)豬傳染性胃腸炎的治療尚無特異性療法[9]，且由于病毒感染后常引起免疫抑制病而繼發(fā)感染。在生產(chǎn)中應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理及合理預(yù)防控制，平時(shí)對(duì)豬舍、環(huán)境做好衛(wèi)生及消毒工作，特別是產(chǎn)房及母豬的清潔衛(wèi)生和護(hù)理；預(yù)防接種疫苗，對(duì)群體接種豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)苗進(jìn)行預(yù)防，減少發(fā)?。患訌?qiáng)豬群抗體動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，定期科學(xué)采集血清，進(jìn)行群體抗體水平評(píng)估，指導(dǎo)和調(diào)整免疫程序；積極堅(jiān)持自繁自養(yǎng)模式，嚴(yán)格執(zhí)行全進(jìn)全出飼養(yǎng)方式，減少仔豬感染機(jī)率；發(fā)病后，立即隔離病豬，全場(chǎng)消毒?；謴?fù)發(fā)病仔豬自身機(jī)體免疫力，防寒保溫[10]，及時(shí)補(bǔ)充水分、電解質(zhì)、調(diào)節(jié)酸中毒和補(bǔ)充營養(yǎng)；加強(qiáng)豬場(chǎng)耐藥性監(jiān)測(cè)，定期進(jìn)行藥物篩選，在藥敏試驗(yàn)結(jié)果中選擇高敏感性抗菌性藥物，控制細(xì)菌性繼發(fā)感染疾病。

在本次病例診斷過程中，積極采取上述防治措施，有效地解決了發(fā)病豬場(chǎng)疫情，達(dá)到了挽回經(jīng)濟(jì)損失的目的,也為四川地區(qū)集約化豬場(chǎng)在應(yīng)對(duì)豬傳染性胃腸炎時(shí)提供治療方法及用藥方面提供參考。

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