魏述永 史麗娟 吳俊偉 蔣智鋼 喬培紅

（西南大學榮昌校區(qū)動物醫(yī)學系 重 慶 402460）

雞大腸桿菌病是由禽致病性大腸桿菌(avian pathgenicity Escherichia coli，APEC)引起的急性或慢性細菌性傳染病，對養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展構成了越來越嚴重的威脅[1]。禽致病性大腸桿菌的血清型復雜，僅國內(nèi)報道的就有80余種之多，尚無理想的疫苗預防，臨床多采用有效的抗菌藥物進行防治。由于抗菌藥物特別是飼料藥物添加劑的持續(xù)、廣泛及不合理使用，雞源大腸桿菌耐藥現(xiàn)象已十分嚴重[2-5]。本試驗進行飼料添加金霉素預混劑對雞源大腸桿菌金霉素敏感性影響的監(jiān)測，為雞源大腸桿菌耐藥性控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

選擇隔離飼養(yǎng)1周后的健康榮昌本地土雞9只（11日齡），編號，依據(jù)隨機區(qū)組設計隨機分為無藥對照組、正常劑量組和高劑量組，每組3只。根據(jù)《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》規(guī)定的使用劑量，以每10kg飼料中添加金霉素預混劑（以金霉素含量計算）2.5g為正常組劑量、5g為高劑量組，充分混勻飼喂動物。

1.2 主要試劑

麥康凱瓊脂、營養(yǎng)肉湯為杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品；金霉素為浦城正大生化有限公司產(chǎn)品；金霉素預混劑為文登市雨澤銀豐動物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。

1.3 大腸桿菌分離與鑒定

按微生物學常規(guī)方法進行[6]。分別于飼喂后 0、1、5、10、15、20、25、30、35、40 和45天無菌操作采集雞泄殖腔糞便，進行大腸桿菌分離鑒定。

1.4 金霉素敏感性測定

采用試管二倍稀釋法，每個樣品取3株細菌進行金霉素敏感性測定。

2 試驗結果

不同飼喂時間金霉素對雞源大腸桿菌MIC值測定結果見表1。

3 分析與討論

3.1 用藥時間對藥物敏感性的影響

從結果上可以看出，隨著飼喂時間的延長，用藥組雞源大腸桿菌的耐藥性從第20天開始呈現(xiàn)不同程度的上升趨勢，對照組無明顯變化。曾有專家懷疑國內(nèi)動物源細菌耐藥性的泛濫與飼料藥物添加劑不合理使用有關，但迄今為止仍未見相關研究報道。從本研究結果來看，當按金霉素預混劑規(guī)定使用的正常劑量及高劑量添加飼喂后，20天內(nèi)，雞源大腸桿菌對金霉素的敏感性無明顯變化，說明20天內(nèi)，如果臨床嚴格遵守《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》的要求使用，使用金霉素預混劑引起大腸桿菌耐藥性的風險較小，而如果延長使用時間，耐藥性風險就會加大。臨床和實驗室標準協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）規(guī)定的耐藥性產(chǎn)生標準為MIC值升高4倍。從本研究結果來看，從飼喂后第25天開始，每次采樣受試的18株細菌中約有10株MIC值升高4倍，當然，由于樣本數(shù)量較小，還不足以判定大多數(shù)細菌已經(jīng)產(chǎn)生耐藥性，但已經(jīng)可以說明隨著金霉素預混劑的使用，大腸桿菌對金霉素的敏感性有降低的趨勢，應當引起有關部門重視。

3.2 使用劑量對敏感性的影響

本試驗設定預混劑使用劑量分別為正常劑量及加倍劑量。從試驗結果來看，對于無藥對照組和正常劑量組，給定假設平均差為0（即H。：μ1=μ2）t=-6.838236697，P 雙尾 （T≤t）=6.91839×10-10＜0.01，表明無藥對照組與正常劑量組差異極顯著；對于無藥對照組和高劑量組，給定假設平均差為0（即H。：μ1=μ2）t=-6.118523741，P 雙尾（T≤t）=1.94435×10-8＜0.01，表明無藥對照組與高劑量組差異極顯著；對于正常劑量組和高劑量組，給定假設平均差為0（即 H。：μ1=μ2）t=0.474462701，P 雙尾 （T≤t）=0.636225527＞0.05，差異不顯著。說明金霉素預混劑使用后，與對照組相比，無論是正常劑量還是加倍劑量，都會導致大腸桿菌對金霉素的敏感性顯著降低，而兩個劑量組之間沒有顯著差異，說明用藥劑量的多少與細菌對金霉素敏感性的變化沒有密切的關系。加大劑量使用飼料藥物添加劑不是導致細菌敏感性降低的主要原因，而延長使用時間引起耐藥性的風險更大。

表1 受試菌MIC值結果

[1]師福山,趙德明.禽大腸桿菌的分離與16S rRNA的鑒定[J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36(2):1l1-l13.

[2]羅玲,楊峻,艾地云,等.湖北省部分肉雞場致病性大腸埃希菌的分離鑒定及耐藥性分析[J].動物醫(yī)學進展,2011,32(3):128-131.

[3]何敏,陳敏,黃立,等.河南信陽地區(qū)集約化雞場大腸桿菌耐藥性調(diào)查[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2010,12:2-4.

[4]孟志敏,李連缺.河北省雞源大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗分析[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2010,10:7-9.

[5]王春光,蔣桂娥,劉廷玉,等.雞源大腸桿菌對24種抗菌藥的藥敏監(jiān)測 [J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2008,7:84-84.

[6]姚火春.獸醫(yī)微生物學實驗指導[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006:36-42.