屈金鳳

(中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院藥劑科，重慶 400042)

保濟(jì)膠囊是由連翹、山楂、六神曲、半夏、麥芽等提取制成的中藥制劑，具有消食積、和脾胃功效，臨床用于治療宿食不消、胸膈痞滿(mǎn)、噫氣吞酸、不思飲食等癥，療效較好。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測(cè)定本制劑中連翹苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695/2996型高效液相色譜儀。連翹苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110821－200609);水為純化水;乙腈為色譜純;其余試劑均為分析純;保濟(jì)膠囊(市售品，批號(hào)分別為100501，100502，100601，100602，100603)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters Symmetry C18柱(200 mm × 4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈－水(24∶76);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為 277 nm;柱溫:30℃。理論板數(shù)以連翹苷計(jì)算不低于3000。

2.2 溶液制備

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約 0.5 g，精密稱(chēng)定，加甲醇40 mL，超聲提取30 min，濾過(guò)，殘?jiān)眉状枷礈?次，每次5 mL，合并濾液，回收甲醇至干，殘?jiān)?0 mL水使溶解;以水飽和的正丁醇萃取5次，每次30 mL;合并水飽和的正丁醇提取液，蒸干，殘?jiān)?0%甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，用 0.45 μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱(chēng)取連翹苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含0.074 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按保濟(jì)膠囊制備工藝，制備缺連翹的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性考察:照擬訂的色譜條件，取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀。供試品溶液色譜圖中，在與對(duì)照品溶液色譜圖相應(yīng)位置上有一相同色譜峰，陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間無(wú)吸收峰，表明陰性對(duì)照對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，選擇性較好。色譜圖見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液 2，10，15，20，25，30 μL，注入液相色譜儀，以連翹苷進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程 Y=245103 X－10241，r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，連翹苷進(jìn)樣量在 0.148 ～ 2.220μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果連翹苷峰面積的 RSD為0.57%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于 0，1，3，6，12 h時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果連翹苷峰面積值的 RSD為1.06%(n=5)，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品6份，依法測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算連翹苷的含量。結(jié)果樣品中連翹苷平均含量為0.28 mg/粒，RSD為1.10%(n=6)。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品6份，分別加入連翹苷對(duì)照品，按擬定的供試品溶液制備方法和測(cè)定條件，測(cè)定連翹苷含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 連翹苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

按2.2項(xiàng)下制備方法制備供試品溶液，并按2.1項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定樣品中連翹苷含量。結(jié)果批號(hào)為100501，100502，100601，100602，100603 的 5 批樣品中，連翹苷含量分別為 0.27，0.25，0.28，0.28，0.26 mg/粒。

3 討論

2005年版《中國(guó)藥典(一部)》中，部分連翹制劑中連翹苷含量測(cè)定采用三氯甲烷進(jìn)行萃取，文獻(xiàn)報(bào)道[1－2]關(guān)于連翹苷的提取采用水飽和正丁醇萃取，2010年版《中國(guó)藥典(一部)》連翹藥材中供試品溶液方法采用中性氧化鋁純化制備。為考察不同溶劑提取方法的純化效果，筆者考察了水飽和正丁醇萃取、中性氧化鋁純化提取和三氯甲烷萃取對(duì)含量測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)合本制劑實(shí)際情況，結(jié)果表明正丁醇萃取效果優(yōu)于其他兩種提取方法。還對(duì)供試品制備方法中提取溶劑的次數(shù)、用量進(jìn)行考察，多次試驗(yàn)表明，文中方法重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

[3]選用乙腈－水作為流動(dòng)相。以乙腈－水(24∶76)為流動(dòng)相時(shí)，樣品中連翹苷峰與相鄰色譜峰可達(dá)到基線分離，峰形對(duì)稱(chēng)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。因此，所建立的含量測(cè)定方法可用于保濟(jì)膠囊的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn):

[1]譚喜瑩，趙陸華，王淑云.HPLC法測(cè)定急咳停顆粒中連翹苷的含量[J].中國(guó)藥師，2009，12(11):1569.

[2]李芳美，林朝展，甄松峰.RP－HPLC法測(cè)定抗病毒口服液中芒果苷和連翹苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2009，20(1):47.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:159.