宋國斌，席國萍

(山西大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山西 大同 037009)

銀杏是世界上珍貴的藥用植物資源[1，2]。銀杏外種皮是銀杏果仁的皮層，即種子硬殼的肉質(zhì)皮層，俗稱白果衣胞[3]。銀杏外種皮的化學(xué)成分主要有黃酮類、銀杏內(nèi)酯類等化合物。其中黃酮類化合物具有擴(kuò)張血管、降低血脂、抗氧自由基等重要作用，已成為當(dāng)前生物制藥的研究熱點(diǎn)，而銀杏藥物中黃酮類化合物含量的高低，直接關(guān)系到藥物的藥效[4]。

作者在此比較了液液萃取法和大孔吸附樹脂法對銀杏外種皮黃酮類化合物的純化效果，擬為銀杏外種皮黃酮類化合物的開發(fā)利用提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

銀杏外種皮采自貴州省貴陽市烏當(dāng)區(qū)楊昌鎮(zhèn)。

蘆丁對照品，中國藥檢所；X-5、AB-8型大孔吸附樹脂，天津南開大學(xué)化工廠；DM-130型大孔吸附樹脂，山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，其它試劑均為分析純。

UNICO UV-2000型紫外可見分光光度計(jì)，上海麗度電子科技發(fā)展有限公司；RE-25型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；METTLER-AE240型電子天平，瑞士梅特勒公司；LABCONCO型冷凍真空干燥器，上海澤權(quán)儀器設(shè)備有限公司。

1.2 銀杏外種皮黃酮類化合物的純化

1.2.1 銀杏外種皮的前處理

將銀杏外種皮自然風(fēng)干，然后放入50 ℃烘箱中烘烤至脆，粉碎，冰箱保存。

1.2.2 銀杏外種皮黃酮提取物的制備

稱取適量處理好的銀杏外種皮，在70 ℃、用7 BV的60%(質(zhì)量濃度，下同)乙醇回流提取4次，每次1 h；合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50 ℃減壓濃縮，冷凍干燥，備用

1.2.3 液液萃取法純化

準(zhǔn)確量取70%乙醇配制5份濃度為2.43 mg·mL-1的銀杏外種皮黃酮提取液，每份100 mL，分別用正己烷、石油醚、環(huán)戊烷、甲苯、氯仿萃取至萃取溶劑無色，將乙醇提取液濃縮至干，冷凍干燥，得產(chǎn)品。

1.2.4 大孔吸附樹脂法純化

將處理好的X-5、AB-8、DM-130大孔吸附樹脂濕法裝柱(層析柱尺寸55 mm×800 mm)，裝柱高度600 mm。準(zhǔn)確量取70%乙醇配制3份濃度為2.45 mg·mL-1的銀杏外種皮黃酮提取液，每份100 mL，上樣。先用水洗至流出液無色，再用4～5 BV 90%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，冷凍干燥，得產(chǎn)品。

1.3 銀杏外種皮黃酮類化合物含量測定

用70%乙醇準(zhǔn)確配制0.13 mg·mL-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精確量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液置10 mL具塞試管中，以蒸餾水為空白，加30%乙醇至5 mL；先加5%NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；再加10%Al(NO3)3溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；最后加4%NaOH溶液4 mL；用蒸餾水稀釋至10 mL，室溫放置15～20 min。在波長510 nm處測定吸光度，由最小二乘法得濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，并根據(jù)此方程計(jì)算黃酮類化合物含量[5]。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

以蘆丁濃度Y(mg·mL-1)對吸光度A作圖，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得線性方程：Y=0.09892A+0.00179，R=0.9994。

2.2 液液萃取法與大孔吸附樹脂法的純化效果比較

將液液萃取和大孔吸附樹脂純化所得產(chǎn)品稱重，稱取相同質(zhì)量的產(chǎn)品，用70%乙醇溶解并定容至25 mL。準(zhǔn)確量取該溶液5 mL，置于10 mL具塞試管中，按1.3方法由吸光度計(jì)算相應(yīng)的黃酮濃度，并計(jì)算產(chǎn)品中黃酮類化合物含量，結(jié)果見表1。

表1 液液萃取法與大孔吸附樹脂法的純化效果比較

由表1可以看出，液液萃取法在產(chǎn)品質(zhì)量和黃酮類化合物含量方面均低于大孔吸附樹脂法；用正己烷和石油醚萃取純化銀杏外種皮黃酮提取液所得產(chǎn)品質(zhì)量和產(chǎn)品中黃酮類化合物含量均高于其它3種萃取溶劑；DM-130大孔吸附樹脂對銀杏外種皮黃酮類化合物的純化效果最好，產(chǎn)品中黃酮類化合物含量達(dá)25.92%。

3 結(jié)論

比較液液萃取法和大孔吸附樹脂法對銀杏外種皮黃酮類化合物的純化效果可以看出：液液萃取法在產(chǎn)品質(zhì)量和黃酮類化合物含量方面均低于大孔吸附樹脂法，而且用于萃取的有機(jī)溶劑多數(shù)有較大的毒性且成本較高。因此，相對于液液萃取法，大孔吸附樹脂法在純化銀杏外種皮黃酮類化合物方面具有一定的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。

[1]李國麗，李春霞，王威強(qiáng).銀杏葉黃酮類化合物提取分離研究現(xiàn)狀和展望[J].山東輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，19(3)：18-22.

[2]朱奕慶.銀杏研究與應(yīng)用[M].貴陽：貴州科技出版社，2000：1.

[3]唐于平，樓鳳昌，王歡，等.銀杏外種皮的化學(xué)成分和藥理作用[J].藥學(xué)進(jìn)展，2000，24(3)：152-155.

[4]李大枝，張長花，黨艷秋，等.從銀杏葉中高效提取分離銀杏黃酮的研究[J].科技信息，2008，(1)：48.

[5]盧錦花，胡小玲，岳紅，等.大孔吸附樹脂對銀杏葉黃酮類化合物吸附及解吸的研究[J].化學(xué)研究與應(yīng)用，2002，14(2)：164-166.