金東嶺 席 豐 王 蕾 王廣邑 時(shí)志民

雌激素對(duì)靶組織的調(diào)節(jié)是通過雌激素受體（es?trogen receptor，ER）的介導(dǎo)完成已得到業(yè)界共識(shí)。ER分為α受體（ERα）和β受體（ERβ），但ERα與甲狀腺癌之間的關(guān)系尚未明確。有研究發(fā)現(xiàn)ERα和ERβ在多個(gè)器官的血管存在并對(duì)血管有廣泛的影響[1]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）作為腫瘤血管生成中最重要的刺激因子,已被證實(shí)是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素。本研究旨在應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)部分甲狀腺乳頭狀腺癌（PTC）及甲狀腺腺瘤標(biāo)本中ERα和VEGF的表達(dá)情況及其關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 資料 選取2004年1月—2009年12月河北工程大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室資料完整的甲狀腺腫瘤石蠟包埋標(biāo)本115例。其中PTC組59例，伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，男13例，女46例，年齡24～69歲，平均（40.55±7.89）歲；甲狀腺腺瘤組（腺瘤組）56例，男15例，女41例，年齡23～72歲，平均（39.64±6.46）歲。標(biāo)本常規(guī)石蠟切片，HE染色，由兩位高年資病理醫(yī)師明確診斷并按照WHO甲狀腺腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)做組織病理分型[2]，患者主要有典型PTC、濾泡亞型、彌漫硬化型、高細(xì)胞型、透明細(xì)胞型、嗜酸細(xì)胞型、乳頭狀微癌及實(shí)性型。全部患者術(shù)前均無化療、放療及免疫治療史。另取腺瘤旁經(jīng)病理證實(shí)的正常甲狀腺組織30例為對(duì)照組，男10例，女20例，年齡25～65歲，平均（37.24±5.52）歲。3組年齡（F=1.724）和性別（χ2=1.333）差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法 所有標(biāo)本均經(jīng)4%的中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，連續(xù)4 μm切片，分別做HE和鏈酶親和素-過氧化物酶（streptavidin-peroxidase，SP）染色。兔源性ERα單克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz公司（濃度1∶100）。兔抗人VEGF單抗、SP檢測(cè)試劑盒以及DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。SP染色按試劑盒說明操作，以3%H2O2室溫孵育5～10 min除去內(nèi)源性過氧化物酶的活性，抗原熱修復(fù)，常規(guī)免疫組化標(biāo)記，DAB顯色，蘇木素襯染，中性樹膠封片，顯微鏡觀察。用已知ERα、VEGF陽性的人乳腺導(dǎo)管浸潤(rùn)癌標(biāo)本作為陽性對(duì)照；用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 在細(xì)胞膜、細(xì)胞漿或細(xì)胞核有棕黃色顆粒分布即為ERβ陽性細(xì)胞。定性觀察按細(xì)胞有無顯色及染色強(qiáng)度記分（a）：細(xì)胞無顯色為0分；淺黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。按顯色細(xì)胞的比例記分(b):0分為顯色細(xì)胞<10%；1分為10%～30%細(xì)胞顯色；2分為31%～60%顯色；3分為≥61%以上顯色。每例積分=a×b。按積分高低判定：陰性積分為0分；陽性積分≥1分。由2名高年資病理醫(yī)師逐一觀察同一切片以減少人為因素造成的判斷誤差，以2人觀察結(jié)果一致作為最終評(píng)定結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，組間比較用F檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ERα和VEGF的表達(dá) ERα主要表達(dá)于部分正常甲狀腺腺上皮細(xì)胞、甲狀腺腺瘤和PTC的腫瘤細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，VEGF陽性物質(zhì)主要表達(dá)于甲狀腺腺瘤和PTC的腫瘤細(xì)胞及其間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，正常甲狀腺組織無VEGF表達(dá)，見圖1～3。3組間ERα和VEGF陽性表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01），組間兩兩比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），見表1。

2.2 ERα和VEGF在PTC各組織類型中的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 PTC中的彌漫硬化型、高細(xì)胞型ERα和VEGF的陽性表達(dá)較高，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較低，乳頭狀微癌陽性表達(dá)較低，見表2。

表1 各組甲狀腺組織中ERα和VEGF的表達(dá) 例（%）

2.3 甲狀腺癌中ERα和VEGF表達(dá)的相關(guān)性 PTC組ERα和VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)（rs=0.514，P=0.033）。

3 討論

雌激素具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，其功能是通過其受體介導(dǎo)特定的靶基因轉(zhuǎn)錄以促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成和器官的發(fā)育。有研究表明，ERα和ERβ在雌激素敏感器官可以對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞增殖發(fā)揮不同的影響[3-4]。雖然甲狀腺并非雌激素經(jīng)典的靶器官，但有研究表明ER與甲狀腺細(xì)胞的增殖有關(guān)[5]。本研究結(jié)果顯示，ERα表達(dá)主要定位于甲狀腺腺上皮或腺上皮起源的腫瘤細(xì)胞，其在正常甲狀腺、甲狀腺腺瘤和PTC中的表達(dá)率逐漸增高,表明在甲狀腺上皮細(xì)胞的增生乃至于癌變過程中，雌激素可能通過ERα的表達(dá)發(fā)揮著重要作用；轉(zhuǎn)移率較高的彌漫硬化型和高細(xì)胞型PTC中ERα陽性表達(dá)率顯著高于轉(zhuǎn)移率相對(duì)較低的乳頭狀微癌，表明ERα的過度表達(dá)可能與甲狀腺癌的演進(jìn)和轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，這與最近報(bào)道的人乳腺癌的研究相似[6]。

表2 ERα和VEGF在PTC組織類型的陽性表達(dá)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況 例（%）

有研究認(rèn)為，雌激素有調(diào)節(jié)雌激素靶組織血管生成的作用[7]。Hyder等[8]研究表明ER與VEGF基因結(jié)合可激活其轉(zhuǎn)錄作用。雖然雌激素是否能夠調(diào)節(jié)甲狀腺組織的血管生成尚不能完全確定，但本研究表明PTC組VEGF高表達(dá)，其陽性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組和腺瘤組，而且其在高細(xì)胞型和彌漫硬化型中的陽性表達(dá)也較高，PTC中ERα的表達(dá)與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)，提示雌激素可能通過ERα調(diào)節(jié)VEGF基因轉(zhuǎn)錄，從而對(duì)良性和惡性甲狀腺腫瘤的血管的生成發(fā)揮一定的促進(jìn)作用。

綜上所述，ERα的過度表達(dá)可促進(jìn)甲狀腺上皮細(xì)胞的增生和分化及其甲狀腺腫瘤的血管生成，從而與甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移有關(guān)。

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