李 沅，姜 熙，樊 鉑，崔 紅，李 波

(1.天津市醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，天津 300191； 2.天津市腎友達醫(yī)療設備技術(shù)開發(fā)有限公司，天津 300384)

血液透析作為慢性腎衰竭患者的重要腎臟替代治療手段，臨床應用已有40余年的歷史。通過血液透析，可以改善腎功能衰竭、尿毒癥患者體內(nèi)積累的高毒素狀態(tài)。但由于血液透析是一項特殊的治療技術(shù),應加強血液透析治療質(zhì)量的規(guī)范化管理,保證血液透析治療質(zhì)量。

我國于2006年6月正式實施了醫(yī)藥行業(yè)標準YY 0598-2006《血液透析及相關治療用濃縮物》，該行業(yè)標準對最終透析液的溶質(zhì)濃度提出了嚴格的要求，并提供了相應的試驗方法。通過在配方中加入有機酸的方式調(diào)節(jié)最終透析液的pH值。過去常用的有機酸主要為醋酸，隨著透析技術(shù)的發(fā)展，近年來越來越多的企業(yè)選擇固態(tài)的枸櫞酸替代液態(tài)的醋酸來調(diào)節(jié)pH值，方便運輸?shù)耐瑫r還能解決高危出血病人血液透析中的抗凝難題，起到局部抗凝的作用[1]。然而目前的行業(yè)標準YY 0598-2006僅適用于醋酸型碳酸氫鹽透析液，并不適用于枸櫞酸型碳酸氫鹽透析液，加之國內(nèi)目前一直缺乏對枸櫞酸根離子特異性較高的定量測試方法，這就給該類產(chǎn)品的質(zhì)量控制和市場監(jiān)管帶來了許多實際困難。本試驗采用了高效液相色譜法測定枸櫞酸根的含量，區(qū)別于以往酸堿滴定、分光光度法測定枸櫞酸根的方法，達到定性定量測定的要求。結(jié)果表明，此方法簡便、準確，測量結(jié)果滿意，有一定的行業(yè)推廣價值。

1 儀器與試藥

1200型高效液相色譜儀(美國安捷倫)，UV紫外檢測器，G1316A型色譜工作站。枸櫞酸三鈉·2H2O對照品(天津市福晨化學試劑廠，批號20100822)。血液透析干粉(批號為10071504由天津市摯信鴻達醫(yī)療器械開發(fā)有限公司提供，批號為1008601、1008602、1008603由天津市腎友達醫(yī)療設備技術(shù)開發(fā)有限公司提供)。硫酸為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：phenomenex Rezex ROA-Organic Acid(300 mm×7.8 mm,8 μm)；流動相：0.002 5 mol/L硫酸溶液；柱溫：室溫；檢測波長：220 nm；流速：0.6 ml/min；進樣量：20 μl。

2.2溶液配制

2.2.1供試品溶液 按使用說明書的要求將A、B透析粉分別溶解成A、B濃縮液，并按照使用說明書規(guī)定的稀釋比例將A濃縮液、B濃縮液和透析用水混合并搖勻，成為最終透析液。精密量取最終透析液1 ml置10 ml量瓶中，加透析用水稀釋至刻度，取適量經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.2對照品溶液 精密稱取枸櫞酸三鈉對照品139.4 mg，用透析用水定容至1 000 ml量瓶，做為標準儲備液。用移液管精密量取10、15、20、25和30 ml儲備液至100 ml量瓶，并用透析用水稀釋至刻度，搖勻，制得4.74×10-2、7.11×10-2、9.48×10-2、11.85×10-2和14.22×10-2mmol /L對照品溶液。

2.2.3空白溶液 透析用水作為空白溶液。

2.3方法適用性試驗 依給定的色譜條件，分別取供試品溶液、對照品溶液和空白溶液各20 μl，進樣，記錄色譜圖，見圖1。枸櫞酸根的保留時間約為9 min,與其他組分峰的分離度>1.5，理論塔板數(shù)為5 466。

1.枸櫞酸根

2.4線性關系 分別取 “2.2.2”項下方法配制的對照品溶液，按給定的色譜條件進行測定，記錄各濃度的色譜峰面積，以峰面積(Y)對溶液濃度(X)求得回歸方程為Y=288.955 95X-0.583 503(r=0.998 80)，在4.74×10-2～14.22×10-2mmol /L范圍內(nèi),峰面積與濃度呈良好的線性關系。

2.5精密度試驗 取濃度為9.48×10-2mmol /L的對照品溶液連續(xù)進樣5次，RSD為0.67%，表明所選定的色譜條件系統(tǒng)穩(wěn)定。

2.6重現(xiàn)性試驗 取同一批樣品(批號1008603)按“2.2.1”項下方法配制供試品溶液，連續(xù)進樣5次，平均含量為標示含量的98.6%，RSD為0.79%(n=5),表明方法重現(xiàn)性好。

2.7穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，按給定的色譜條件在0、2、4、6和8 h分別進樣測定峰面積，RSD為1.2%，表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8回收率試驗 取6份已知含量的樣品，分成3組，每組分別加入對照品溶液(14.22×10-2mmol /L)14.35、16.74和19.13 ml，測定峰面積，計算回收率，結(jié)果見表1。測得平均回收率為102.52%，RSD為1.31%(n=6)。

2.9樣品含量測定 取批號10071504(標示含量1.01 mmol /L)、批號1008601(標示含量0.88 mmol/L)、批號1008602(標示含量1.03 mmol /L)、批號1008603(標示含量1.02 mmol /L)樣品各1份，分別按供試品溶液的制備方法，制備待測溶液。取20 μl對照品溶液、空白溶液和供試品溶液進樣。分別進樣3次，測定峰面積，計算含量，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1針對枸櫞酸三鈉的不穩(wěn)定性及其對照品濃度較低，不宜儲存過久的特點，故建議使用對照品時最好當日配制，盡量在8 h內(nèi)使用。

3.2在樣品處理過程中，要嚴格按照使用說明書配制最終透析液，供試品做稀釋10倍處理。這主要是考慮到最終透析液中除含有少量枸櫞酸根離子外，還含有大量的鈉離子、氯離子及碳酸氫根離子等，這些離子的含量都要遠大于枸櫞酸根的含量，在使用離子排阻色譜柱進行分離時，這些干擾物都會因含量較高而嚴重影響色譜峰的判定。因此對供試品作適當比例的稀釋，既能確保枸櫞酸根的準確檢出，又能有效避免其他干擾物對主峰的干擾。

3.3本試驗待測組分主要有兩個色譜峰，分別是干擾峰和枸櫞酸根色譜峰，通過與對照品的對比，可以確定枸櫞酸根的出峰時間約為9 min。

3.4通過對枸櫞酸含量的測定表明，該方法操作簡單，重現(xiàn)性好，結(jié)果穩(wěn)定。由于透析液中枸櫞酸根含量測定方法國內(nèi)未見相關報道，故此研究為保證該產(chǎn)品的質(zhì)量提供了參考。

1 桂保松,呂星，高衛(wèi)華，等.新型枸櫞酸鹽濃縮抗凝血液透析液的實驗研究. 中國血液凈化,2002,1(3):36