錢文軍，紀(jì) 勇，茅衛(wèi)東，劉少平，沈 東，林 峰，陸向東

(東南大學(xué)附屬江陰醫(yī)院，江蘇江陰214400)

腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移必須依賴于血管生成［1］，抑制其血管生成能夠控制其生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移［2］。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)可與血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性結(jié)合，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，并促進(jìn)血管內(nèi)物質(zhì)滲出，為腫瘤細(xì)胞的遷徙和轉(zhuǎn)移提供條件［3］。內(nèi)皮抑素(Endostatin)被認(rèn)為是最有效的內(nèi)源性血管生長(zhǎng)抑制因子之一，其表達(dá)水平與多種惡性腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)［4］。本研究采用 ELISA法對(duì)126例食管鱗癌患者血清中的VEGF和Endostatin進(jìn)行了檢測(cè)，觀察其水平變化并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1．1 臨床資料 2006年8月～2009年6月收治的食管癌患者126例，男86例，女40例;年齡45～74歲。本組符合以下標(biāo)準(zhǔn):病理學(xué)檢查診斷為食管鱗癌，患者術(shù)前未接受放療、化療及其他任何針對(duì)癌的治療。腫瘤位置:食管上段16例，食管中段68例，食管下段42例。腫瘤T分期:T1期24例，T2期35例，T3期44例，T4期23例。腫瘤長(zhǎng)度(以切除后測(cè)量腫瘤侵犯食管縱軸長(zhǎng)度為標(biāo)準(zhǔn))3～12 cm。腫瘤組織分化程度:高分化42例，中分化36例，低分化48例。選擇體檢健康者14例作對(duì)照，男10例，女4例;年齡40～70歲。

1．2 VEGF、Endostatin檢測(cè)方法 采用非抗凝管抽取食管鱗癌患者及健康對(duì)照者的外周靜脈血5 ml，室溫放置30～60 min，5 000 r/min離心10 min，分離血清。將血清置2 ml的 Eppendorf管中，-20℃冷凍。采用ELISA法檢測(cè)血清VEGF、Endostatin。按試劑盒說明書操作，于450 nm處檢測(cè)VEGF的光密度值(OD值)，于490 nm處檢測(cè)Endostatin的OD值。結(jié)果判斷:①VEGF:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)、VEGF的OD值作縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出VEGF濃度。②Endostatin:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)(橫軸為對(duì)數(shù)刻度)、Endostatin的OD值作縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出Endostatin濃度。所有標(biāo)本重復(fù)檢測(cè)2次，取均值。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)軟件。組內(nèi)及組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，多組均數(shù)比較用單因素方差分析，方差不齊或非正態(tài)分布資料的比較用秩和檢驗(yàn)，VEGF與Endostatin的相關(guān)性予直線回歸分析。P≤0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

食管鱗癌患者和健康對(duì)照者血清VEGF水平分別為(20．68 ± 3．09)μg/L、(3．82 ± 6．28)μg/L，Endostatin分別為(4．96 ± 1．72)μg/L、(1．60 ±0．37)μg/L，VEGF/Endostatin 分別為 4．17 ± 0．28、2．38 ±0．75，各指標(biāo)相比，P 均 ＜0．05。血清 VEGF、Endostatin水平與食管鱗癌腫瘤分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑、TNM分期有關(guān)(P均＜0．05)，詳見表1。食管鱗癌患者血清VEGF與Endostatin水平呈正相關(guān)(r=0．594，P ＜ 0．01)，回歸方程:Y=0．065 8X+90．463。

3 討論

研究表明，VEGF和Endostatin分別是目前已知的作用最強(qiáng)、特異性最高的血管生成促進(jìn)因子和抑制因子。由于基因表達(dá)的剪切方式不同，VEGF形成5 種不同異構(gòu)體，即 VEGF121、145、165、189、206，5種異構(gòu)體均能誘導(dǎo)體內(nèi)血管生成［5］。Endostatin為膠原XⅧC-末端非膠原蛋白特征結(jié)構(gòu)域(NC1)中的一內(nèi)源性片段，大多分布在血管的基底膜上［6］，可抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，并誘導(dǎo)其凋亡。

表1 血清VEGF、Endostatin水平與食管鱗癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(μg/L，ˉx ±s)

Kuroi等［7］檢測(cè)了多種癌癥患者血漿中的VEGF和Endostatin，發(fā)現(xiàn)其水平及二者比值明顯高于健康對(duì)照組。本研究觀察到，食管鱗癌患者血清中VEGF和Endostatin水平較健康對(duì)照者顯著升高，且兩者表達(dá)呈正相關(guān)。說明在食管鱗癌發(fā)生過程中，血管生成促進(jìn)因子和抑制因子水平失衡，腫瘤通過分泌大量VEGF，促進(jìn)血管生成，為腫瘤轉(zhuǎn)移打下基礎(chǔ);同時(shí)，腫瘤細(xì)胞可能刺激包括Endostatin在內(nèi)的多種血管形成抑制因子的合成，并通過血循環(huán)到達(dá)腫瘤部位，抑制腫瘤血管生成，與腫瘤血管生成促進(jìn)因子相互拮抗［8］。

本研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌患者血清 VEGF和Endostatin水平與腫瘤病變長(zhǎng)度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及分化程度等密切相關(guān)，食管鱗癌患者病變?cè)介L(zhǎng)、細(xì)胞分化程度越低、TNM分期越晚，其血清VEGF和 Endostatin水平越高，且 VEGF/Endostatin增大。說明在食管鱗癌的發(fā)展進(jìn)程中，VEGF和Endostatin相對(duì)性失衡表達(dá)，最終表現(xiàn)為促血管生成作用，導(dǎo)致腫瘤無限制生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，本研究結(jié)果進(jìn)一步證明了VEGF、Endostatin表達(dá)失衡在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移中均起重要作用。血清VEGF、Endostatin水平可作為預(yù)測(cè)食管鱗癌預(yù)后、惡性行為的指標(biāo)。

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