張淑二 ，林 雪 ，劉 棟 ，胡洪杰 ，尹旭升

（1.山東省畜牧總站，濟南 250022；2.山東省種公牛站有限責任公司，濟南 250300；3.山東省畜牧業(yè)貿易服務中心）

口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是由 FMD 病毒（FMDV）引起的牛、羊、豬等偶蹄動物發(fā)生的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該疫病的平均致死率僅為1%，但其傳播力極高，且可以遠距離傳播［1］。我國部分地區(qū)已先后發(fā)生亞洲Ⅰ型、A型和O型口蹄疫等多次疫情，給我國畜牧業(yè)帶來了巨大損失。當前，許多國家是通過注射口蹄疫疫苗對該病毒流行進行預防與控制，并取得了較好效果。種公牛站作為我國養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展的源頭行業(yè)，為我國的奶牛、肉牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展提供種源保障，這一特點決定了對種公牛進行及時正確的口蹄疫疫苗免疫注射對預防該疫情傳播具有重要意義。目前，山東省種公牛站飼養(yǎng)利木贊種公牛、西門塔爾種公牛與魯西牛種公牛共計50余頭，在年度防疫工作中發(fā)現，各品種種公牛在注射口蹄疫疫苗后一段時間內，其精液品質產生了不同程度的下降?，F將本站2011年度1月份種公牛注射口蹄疫疫苗前后一段時間內的各品種種公牛精液的生產及利用情況進行總結與對比，找出其影響規(guī)律，為進一步提高種公牛精液生產提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 主要儀器 精子密度測定儀（Accucell 1145），電子天平（HR-120），電視顯微可視系統(tǒng)（OPTIPHOT-2），低溫冷凍儀（GCS-300），磁力攪拌器（Jan-78），冷藏箱（BYY-190），恒溫水浴鍋（HH-2），細管精液分裝一體化機（UR.G10），超聲波洗滌器（SK8200H）。

1.2 動物 選擇1.5～5歲的不同品種種公牛20頭，其中西門塔爾牛10頭、魯西牛5頭、利木贊牛5頭，根據其營養(yǎng)需要進行統(tǒng)一分圈飼養(yǎng)，先粗后精，干草、精料補充料日喂量按照體重的1.2%與0.6%補給，青綠飼料每日3kg，自由飲水，適量運動。

1.3 材料 口蹄疫亞洲Ⅰ型與O型雙價滅活苗，新疆天康畜牧生物技術有限公司，生產批號：2010024；口蹄疫A型滅活苗，中農威特生物科技股份有限公司，生產批號：1003022J。

采取頸部肌肉注射，使用4cm長16號針頭，每頭牛一個針頭，頸部三角區(qū)深層肌肉注射，用量為成年牛每頭2mL。

1.4 采精情況 20頭種公牛，由專職采精員負責采精工作，成年牛采精頻率為每周2次，每次分早晚各采1次，青年公牛每周1次，每次于早晨采集。采精期間，臺?；竟潭?，并嚴格執(zhí)行采精操作規(guī)程。

1.5 精液制作方法 采集的原精送入檢測室，專人檢測原精的采精量、活力和精液密度，確定稀釋倍數。稀釋好的精液放入4℃冰箱中平衡3 h，鏡檢活力后用細管精液分裝機進行分裝，利用冷凍儀按設定好的冷凍程序冷凍8 min，最后用附電視顯微攝像系統(tǒng)的生物顯微鏡進行活力評定，鏡檢合格者方可進行包裝［2］。

1.6 統(tǒng)計處理 采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0 OnewayANOVA進行方差分析，各組數據均以平均數±標準差（±S）表示。

2 結果與分析

2.1 注射口蹄疫疫苗對西門塔爾種公牛精液品質的影響 由表1可以看出，注射口蹄疫苗前后西門塔爾種公牛的次均采精量差異并不顯著（P＞0.05），其精液平均密度在注射疫苗后出現增加且差異顯著（P＜0.05），注射疫苗后第3～4周精液平均密度比注射前提高，且差異極顯著（P＜0.01）；精液平均活力則在疫苗注射后出現下降趨勢，且于注射后的3～8周精液活力與注射前相比達到極顯著水平（P＜0.01），第9周精液活力開始逐步恢復正常；伴隨精液活力下降，精液廢棄率增加，注射后第1周精液廢棄率明顯高于疫苗注射前精液廢棄率（P＜0.05），第3～8周精液廢棄率與注射前相比差異極顯著（P＜0.01），第9周后精液利用率開始增加并達到注射前水平（P＞0.05）。其制凍數量在疫苗注射后第9～10周出現顯著增加（P＜0.05）。

2.2 注射口蹄疫疫苗對利木贊種公牛精液品質的影響由表2可以得出，與疫苗注射前相比，疫苗注射后利木贊種公牛精液次均采精量無顯著增加（P＞0.05），而精液密度僅在疫苗注射后的第3～4周顯著高于其他時段（P＜0.05）；疫苗注射后的第3～6周種公牛精液平均活力出現降低且顯著低于疫苗注射前精液活力（P＜0.05）；注射疫苗后的種公牛精液廢棄率有增大趨勢，但差異不顯著（P＞0.05）；其精液制凍數量也僅在疫苗注射后的第3～4周顯著高于疫苗注射前及其他時段（P＜0.05）。

2.3 注射口蹄疫疫苗對魯西牛種公牛精液品質的影響 由表3可以看出，疫苗注射后魯西牛種公牛的次均采精量、平均密度、精液廢棄率及制凍數量與注射前相比差異均不顯著（P＞0.05）；精液平均活力在疫苗注射后的第5～6周與注射前相比差異顯著（P＜0.05），其它時段無明顯差異（P＞0.05）。

表1 口蹄疫疫苗對西門塔爾種公牛精液品質的影響

表2 口蹄疫疫苗對利木贊種公牛精液品質的影響

表3 口蹄疫疫苗對魯西牛種公牛精液品質的影響

3 討論

近年來，我國多地發(fā)生各種類型的口蹄疫疫情，給我國畜牧業(yè)生產帶來了重大損失。種公牛站作為牛冷凍精液供應單位，對疫情的防控意義要遠大于一般商品場，所以，利用口蹄疫疫苗對種公牛進行多次免疫是各種公牛站年度防疫工作的重點。但在生產實踐中發(fā)現，種公牛注射口蹄疫疫苗后會出現精液活力下降、精子畸形率增加及死精現象，其原因可能與疫苗的注射應激及疫苗中氫氧化鋁或雙相礦物油等佐劑對動物細胞具有毒性作用有關［3］。這給凍精生產帶來了一定的不利影響，本試驗通過分析口蹄疫疫苗對不同品種種公牛的精液生產的影響，為種公牛站減少因疫苗注射造成的精液生產損失提供數據參考。

采精量與精液密度均是評價種公牛精液品質的重要指標。由本試驗的注射免疫情況可以看出，口蹄疫疫苗注射對3個品種種公牛的次均采精量影響不大，注射前后采精量表現平穩(wěn)，這說明注射該疫苗對種公牛采精量沒有影響。但對種公牛的精液密度有一定影響，西門塔爾種公牛在免疫后的第3～10周精液密度顯著增加，利木贊種公牛在疫苗注射后的第3～4周精液密度有大幅增加，但魯西牛種公牛精液密度變化不大。這有可能與精液密度隨著氣溫升高逐步提高有關［4］，1月底山東地區(qū)氣溫回升較快，在疫苗注射后的近兩個月試驗期間，適宜的氣溫對提高精液密度也起到了積極作用。而魯西牛作為山東地方良種肉牛對山東地區(qū)環(huán)境氣候較為適應，氣溫對其影響不大。

根據GB4143—2008《牛冷凍精液》國家標準的要求，種公牛鮮精活力須≥65%，凍后活力≥35%，不符合該標準的精液均要廢棄，鮮精活力大小與精液廢棄率高低可以更好地說明口蹄疫疫苗對種公牛精液生產的影響。由本試驗結果可以看出，各品種種公牛鮮精活力及精液廢棄率均有一定變化，但影響程度不一。其中西門塔爾牛與利木贊牛的精液出現變化的時間較早，且幅度明顯、影響期較長。2個指標相伴而行，影響期在4～6周不等。相比而言，疫苗對魯西牛精液活力的影響時間出現的較晚，幅度也比較小，影響期也僅有1周左右，且恢復較快。同時，魯西牛精液的廢棄率變化也不明顯，這在精液生產上具有重要意義，表現出我國地方品種牛比外來品種牛對疫苗應激具有更好的抵抗與適應能力，但其機理尚不明確，這可能與疫苗生產及動物對環(huán)境的適應性有關。

精液的制凍數量是體現種公牛精液品質的決定性指標，在本試驗中，口蹄疫疫苗注射前后3個品種種公牛精液的制凍數量變化較小。僅在疫苗注射后的第9周開始，西門塔爾牛精液制凍數量比之前顯著增加，疫苗注射后的第3～4周，利木贊牛精液制凍數量顯著高于其他時段，這都與其同時段精液密度升高有關。

就上述幾個指標的影響情況來看，口蹄疫疫苗注射對種公牛精液的平均活力及廢棄率均起到負面影響，而對種公牛精液密度影響不顯著，精液密度的提高則與疫苗注射對精液生產的其他指標造成的負面影響起到了良好的拮抗作用。

綜上所述，口蹄疫疫苗注射對種公牛產生較大應激，對種公牛精液品質有一定的負面影響。所以，合理安排種公牛的免疫時間可以較好地緩解因疫苗應激引起的精液產量下降，比如采取在每年的停采期進行疫苗注射或減少疫苗注射次數等措施，都可以減少種公牛站的生產損失。

［1］Mahy B W，Sobrino F，Domingo E.Overview of foot-and-mouth disease and its impact as a reemergent viral infection.In：Foot-and-Mouth Disease，Current Perspectives［J］.Horizon Bioscience，2004：437-446.

［2］楊庫，李聚才，張巧娥，等.不同品種種公牛采精量、精液密度及制凍數量的比較［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2003（12）：25-26.

［3］蔣文俊，李華春，李樂，等.口蹄疫疫苗研究進展［J］.畜牧與獸醫(yī)，2004，36（5）：42-43.

［4］李杰，楊立峰，李恒帥，等.不同季節(jié)種公牛精液各項指標分析［J］.中國畜牧雜志，2008，44（24）：61-64.