朱曉冬，曹艷麗，毛翔，蔣希成

(1.牡丹江醫(yī)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

阿爾茨海默病(Alzheimer＇s disease，AD)即所謂的老年癡呆癥，是老年人一種常見的以學(xué)習(xí)記憶能力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。目前，AD的發(fā)病病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明［1］。隨著社會(huì)老齡化的加劇，阿爾茨海默病的發(fā)病率呈升高趨勢［2］。筆者采用D－半乳糖(D－galactose，D－gal)建立AD動(dòng)物模型，觀察針刺對阿爾茨海默病模型大鼠認(rèn)知功能干預(yù)作用，為針刺治療AD的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 健康成年Wistar大鼠，清潔級，雄性，體質(zhì)量(250±20)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，自由飲食水。

1.2 主要儀器 G6805電針儀(濟(jì)南宏興達(dá)經(jīng)貿(mào)有限公司);跳臺實(shí)驗(yàn)儀(按照金杰等［3］的設(shè)計(jì)方法制作);華佗牌無菌針灸針(0.40mm×25mm不銹鋼毫針，蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)。

1.3 藥物 D－半乳糖(Galactose，C6H12O6，相對分子量:180.16，24g/瓶，批號 010524，由北京化學(xué)試劑公司提供);注射用東莨菪堿(SCOP，河南竹林眾生制藥有限股份公司);胃飼用AlCl3(河南南宮益達(dá)化工廠)。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及模型復(fù)制 將篩選出具有學(xué)習(xí)和記憶能力的大鼠24只，隨機(jī)分為對照組、模型組和針刺組各8只。對照組:觀察3天，常規(guī)飲水和飼料，胃飼及頸項(xiàng)背部皮下注射與模型組等容量的生理鹽水，連續(xù)42天，并于實(shí)驗(yàn)觀察前10min給予腹腔注射SCOPmg/kg。模型組和針刺組:應(yīng)用 3.0%D－gal(150.0mg/Kg/d)進(jìn)行頸項(xiàng)背部皮下注射，每日胃飼20mg/ml的AlCl3水溶液2ml，余同對照組。

2.2 治療方法 針刺組用華佗牌無菌針灸針0.40mm×25mm不銹鋼毫針，于大鼠“百會(huì)”、“大椎”、“腎俞”、“太溪”、“足三里”穴捻入0.5寸，取穴參照林文注主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》。并用平補(bǔ)平瀉手法持續(xù)捻針2min，得氣后接通G6805電針儀刺激20min，施以連續(xù)波，頻率為lHz，強(qiáng)度以大鼠肢體輕度抖動(dòng)為度。每日1次，時(shí)間30min。10天為1個(gè)療程，療程間休息1天，共治療3個(gè)療程。

2.3 認(rèn)知功能測試 采用跳臺實(shí)驗(yàn)(SteP－down avoidance test)。訓(xùn)練及測試時(shí)將大鼠置于實(shí)驗(yàn)裝置內(nèi)，適應(yīng)3min，熟悉環(huán)境，然后通以36V的交流電，持續(xù)5min，記錄動(dòng)物首次跳到安全區(qū)所需時(shí)間(即潛伏期)、5min內(nèi)大鼠跳下平臺的次數(shù)(錯(cuò)誤次數(shù))、受電擊總時(shí)間，作為學(xué)習(xí)測試成績;24h后重復(fù)試驗(yàn)，記錄大鼠第一次跳下平臺時(shí)間、5min內(nèi)的錯(cuò)誤次數(shù)及受電擊總時(shí)間，作為記憶保持測試成績。按上述方法訓(xùn)練5天后，于第6日測試大鼠學(xué)習(xí)成績，第7天測試大鼠記憶成績，然后進(jìn)行AD模型復(fù)制，于模型復(fù)制后第4天、第5天和治療后再次測試學(xué)習(xí)成績和記憶成績。

3 結(jié)果

3.1 針刺對AD模型大鼠學(xué)習(xí)能力的干預(yù)作用 結(jié)果見表1。

3.2 針刺對AD模型大鼠記憶能力的干預(yù)作用 結(jié)果見表2。

表1 針刺對AD模型大鼠學(xué)習(xí)能力的干預(yù)作用(±s)

表1 針刺對AD模型大鼠學(xué)習(xí)能力的干預(yù)作用(±s)

注:與對照組比較，△P ＜0.01，*P ＜0.05;與模型組比較，▲P ＜0.01，#P ＜0.05。

對照組 10 6.85 ±1.53 7.78 ±4.64 7.53 ±4.86 17.94 ±8.12 0.58 ±0.45模型組 10 7.02 ±1.66 30.23 ±8.10△ 28.05 ±7.42△ 30.36 ±14.65* 1.27 ±0.94*針刺組 10 6.94 ±1.57 30.47 ±8.29△ 8.15 ±4.94▲ 19.28 ±8.86# 0.64 ±0.52#

表2 針刺對AD模型大鼠記憶能力的干預(yù)作用(±s)

表2 針刺對AD模型大鼠記憶能力的干預(yù)作用(±s)

注:與對照組比較，△P ＜0.01，*P＜0.05;與模型組比較，▲P ＜0.01，#P ＜0.05。

對照組 10 5.92 ±3.58 6.24 ±3.61 5.83 ±3.19 10.48 ±5.25 0.52 ±0.41模型組 10 6.04 ±3.73 28.45 ±7.26△ 14.14 ±5.62△ 26.27 ±9.62* 1.05 ±0.82*針刺組 10 5.96 ±3.67 27.89 ±7.15△ 6.25 ±3.46▲ 17.52 ±6.93# 0.61 ±0.64#

4 討論

本組研究過程中模型組大鼠出現(xiàn)典型D－半乳糖衰老模型的病理特征，包括出現(xiàn)活動(dòng)減少、反應(yīng)性降低、飲食減少、行動(dòng)遲緩、精神萎靡及體重減輕;在跳臺試驗(yàn)中，表現(xiàn)學(xué)習(xí)和記憶成績下降，潛伏期和受電擊時(shí)間延長，錯(cuò)誤次數(shù)增加。這些變化能夠判斷AD模型成功與否。這與以往文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［4］。

本病屬于中醫(yī)學(xué)的“癡證”、“呆病”等范疇。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，引起本病的基本原因是肝腎虧虛、氣血不足、經(jīng)脈失養(yǎng)、髓海不充，此外還有痰濁瘀血阻滯經(jīng)絡(luò)等繼發(fā)因素。確以補(bǔ)腎填精、健腦益智為其治法。根據(jù)中醫(yī)學(xué)經(jīng)絡(luò)腧穴理論，結(jié)合臨床治療經(jīng)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)選用百會(huì)、大椎、腎俞、太溪、足三里組方。百會(huì)在于巔頂，通過督脈內(nèi)入絡(luò)腦。乃局部取穴，以醒神開竅、健腦益智;腎俞屬膀胱經(jīng)，膀胱經(jīng)入絡(luò)腦，腎主骨生髓，補(bǔ)腎即能生髓，腎俞具有益腎添髓充腦之功能;大椎、太溪可補(bǔ)腎養(yǎng)髓;補(bǔ)養(yǎng)腦髓，髓海得充，可健腦益智。足三里為胃經(jīng)合穴，也是胃腑的下合，補(bǔ)益后天、化生氣血以助生髓核之源。諸穴配伍，共奏補(bǔ)腎填精、健腦益智之效，從而達(dá)到防治老年癡呆的目的。

在本組研究中，各組大鼠隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加，潛伏期均有不同程度的縮短。研究結(jié)果顯示，在跳臺實(shí)驗(yàn)中，造模后，模型組學(xué)習(xí)和記憶潛伏期時(shí)間比空白對照組延長(P＜0.01);針刺干預(yù)后，針刺干預(yù)組比模型組學(xué)習(xí)和記憶潛伏期時(shí)間縮短(P＜0.01);模型組學(xué)習(xí)和記憶電擊時(shí)間比空白對照組延長(P＜0.05);針刺干預(yù)組比模型組學(xué)習(xí)和記憶電擊時(shí)間縮短(P＜0.05);模型組學(xué)習(xí)和記憶錯(cuò)誤次數(shù)比空白對照組多(P＜0.05);針刺干預(yù)組學(xué)習(xí)和記憶錯(cuò)誤次數(shù)比模型組少(P＜0.05)?？梢?，與模型組相比，針刺組的學(xué)習(xí)記憶能力顯著提高，說明針刺能明顯改善老年性癡呆大鼠的認(rèn)知和記憶障礙。

［1］田強(qiáng)，孫偉，冷萍，等.肌苷對阿爾茨海默病模型大鼠認(rèn)知功能改善作用及機(jī)制研究［J］.中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志，2010，19(3):234－236.

［2］趙立剛，馬莉，鄭祖艷，等.針刺“百會(huì)”“四神聰”對老年性癡呆大鼠認(rèn)知行為及腦內(nèi)超氧化物歧化酶的影響［J］.針刺研究，2005，30(1):26－28.

［3］金杰，陳海燕，關(guān)明智，等.健腦益智液作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，21(1):49.

［4］李淑蓮，劉睿姝，王振宇.黃芪建中湯對D－半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2011，39(2):56－57.