王 軍,張嘉保,呂文發(fā)

(1.遼寧醫(yī)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院,遼寧 錦州 121001;2.吉林大學(xué)農(nóng)學(xué)部實驗動物中心,吉林 長春 130062;3.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,吉林長春130118)

利木贊牛自從1974年引入中國后,其以難產(chǎn)率低、后期生長快和產(chǎn)肉量大等優(yōu)點備受歡迎。近年來通過雜交改良當(dāng)?shù)攸S牛獲得了很大的效益,但是所引進的母牛絕大多數(shù)通過自然繁殖擴大純種群,純繁效率低,使得利木贊種牛存留的數(shù)量少,并且分布也很分散[1]。因此,快速擴大純種利木贊牛數(shù)量是當(dāng)前肉牛業(yè)發(fā)展亟待解決的問題之一。胚胎移植技術(shù)是目前加快良種繁育的最有效手段。超數(shù)排卵技術(shù)是胚胎移植的關(guān)鍵技術(shù)之一,超數(shù)排卵效果的好壞直接影響著獲得胚胎的質(zhì)量和數(shù)量。目前,有關(guān)利木贊牛超數(shù)排卵的報道較少,本試驗研究了激素劑量和季節(jié)對利木贊牛超數(shù)排卵效果的影響,為獲得高效穩(wěn)定的利木贊牛超數(shù)排卵技術(shù)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 選擇體質(zhì)健康、發(fā)情周期正常的利木贊母牛。

1.2 主要藥品 Folltropin-v:加拿大生產(chǎn)的FSH產(chǎn)品,400 mg/支,20 mL配比液;氯前列烯醇(PGF2α):上海計劃生育科學(xué)研究所生產(chǎn);杜氏磷酸鹽緩沖溶液(本實驗室自制)。

1.3 超數(shù)排卵方案 在母牛發(fā)情周期第8天通過直腸檢查法確定供體牛卵巢上確有黃體存在,在母牛發(fā)情周期的第9天開始分別肌肉注射總劑量為340 mg(n=9)、300 mg(n=9)和 260 mg(n=7)的Folltropin-v,每天上午、下午各注射 1次,連續(xù)4 d采用劑量遞減法注射,注射FSH的第3天(第5、6次)同時注射 PGF2α,上午、下午各注射 0.4 mg,發(fā)情10～12 h后給母牛進行第一次人工授精,間隔12 h進行第2次人工授精。

第1次超數(shù)排卵43 d后,用總劑量為300 mg的Folltropin-v對所有的供體牛進行第2次超數(shù)排卵,超數(shù)排卵程序與第1次相同。

1.4 胚胎采集 以發(fā)情當(dāng)天為第0天,在發(fā)情AI后第7天用非手術(shù)法進行采卵,利用德式兩通沖卵管插入一側(cè)子宮角并固定氣囊開始沖洗,每次用25～35 mL,分多次沖洗子宮角,同時手通過直腸按摩子宮角,每側(cè)子宮角總用量為250 mL,沖完一側(cè)后換到另一側(cè)沖洗,兩側(cè)沖洗完畢后,向子宮內(nèi)投入一定量的抗生素和PGF2α。

1.5 胚胎質(zhì)量評定 將回收的沖卵液放到培養(yǎng)皿中,在體視顯微鏡下找到胚胎后,轉(zhuǎn)移到小培養(yǎng)皿中,并根據(jù)形態(tài)學(xué)標(biāo)準評定胚胎質(zhì)量。將胚胎分為A、B、C、D級,其中A 、B、C 級為可用胚胎 。

1.6 統(tǒng)計分析 試驗結(jié)果采用SPSS 16.0進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果

2.1 激素劑量對超數(shù)排卵效果的影響 挑選25頭利木贊供體母牛,隨機分為A、B、C三組,分別注射總劑量為340 mg(n=9)、300 mg(n=9)和260 mg(n=7)的Folltropin-v進行超數(shù)排卵,第1次超數(shù)排卵結(jié)束43 d后采用300 mg的總劑量對所有供體牛進行第2次超數(shù)排卵,超數(shù)排卵結(jié)果見表1。從表1可以看出,對于第1次超數(shù)排卵的結(jié)果,A組和B組獲得的可用胚數(shù)顯著高于C組(P＜0.05),而A組和B組之間差異不顯著,說明340 mg和300 mg的Folltropin-v能獲得相同的超數(shù)排卵效果,且明顯比300 mg效果好。對于兩次超數(shù)排卵,A組第2次超數(shù)排卵獲得的可用胚數(shù)明顯低于第1次(P＜0.05),B組兩次超數(shù)排卵之間差異不顯著,C組第2次超數(shù)排卵獲得的可用胚數(shù)顯著高于第1次(P＜0.05)。對于A、B組和C三組,兩次超數(shù)排卵獲得可用胚總數(shù),A組與B組差異不顯著,C組顯著低于A組和B組(P＜0.05)。

2.2 季節(jié)對超數(shù)排卵效果的影響 對75頭供體牛在春季、秋季和冬季以總劑量為300 mg的 Folltropin-v進行超數(shù)排卵,超數(shù)排卵結(jié)果見表2。從表2可以看出,春季超數(shù)排卵效果明顯低于秋季和冬季(P＜0.05),而秋季和冬季之間差異不顯著。

3 討論

3.1 激素劑量對利木贊牛超數(shù)排卵效果的影響激素的劑量對于超數(shù)排卵效果具有很大的影響,激素劑量過高會對胚胎和卵子有毒害作用,反之,劑量過低,不能有效地促進較多量的卵母細胞同時發(fā)育,也就達不到好的超數(shù)排卵效果。因此想要獲得良好的超數(shù)排卵效果,必須選擇合適的激素劑量。本試驗對A、B組和C三組供體牛的第1次超數(shù)排卵研究表明,340 mg和300 mg的Folltropin-v能獲得相同的超數(shù)排卵效果,且明顯比260 mg效果好,這說明260 mg的劑量偏低,不能充分發(fā)揮超數(shù)排卵的優(yōu)越性。而43 d后,用總劑量為300 mg的Folltropin-v對A、B、C三組供體牛進行第2次超數(shù)排卵時,發(fā)現(xiàn)兩次超數(shù)排卵獲得可用胚胎總數(shù),A組和B組差異不顯著,但明顯高于C組。這表明300 mg的Folltropin-v是利木贊牛超數(shù)排卵的最佳劑量,且這個劑量不影響重復(fù)超數(shù)排卵(第2次)的效果;而A組的供體牛用340 mg超數(shù)排卵后,再用300 mg的劑量進行超數(shù)排卵,反而降低了超數(shù)排卵效果,這說明340 mg的劑量雖然不影響第1次超數(shù)排卵的效果,但是可能會影響緊接著的下一次超數(shù)排卵效果,其原因還有待于深入研究。對于本研究,雖然A組(340 mg)和B組(300 mg)兩次超數(shù)排卵獲得的可用胚胎總數(shù)差異不顯著,但從實際應(yīng)用角度來講,在不影響超數(shù)排卵效果的情況下,減少用藥量對于降低胚胎成本是有益的,有利于胚胎移植的推廣和應(yīng)用。國外學(xué)者的一些研究也表明適當(dāng)降低激素劑量不會影響超數(shù)排卵效果,Martens等報道適當(dāng)減少 FSH產(chǎn)品的劑量,不影響超數(shù)排卵效果[2],Sugano等的研究也發(fā)現(xiàn)注射16 mg和24 mg的FSH產(chǎn)品獲得的可用胚數(shù)差異不顯著[3]。

表1 激素劑量對利木贊牛超數(shù)排卵效果的影響

表2 季節(jié)對利木贊牛超數(shù)排卵效果的影響

3.2 季節(jié)對利木贊牛超數(shù)排卵效果的影響 關(guān)于季節(jié)對牛超數(shù)排卵效果影響的研究,目前結(jié)果不一。和占星認為季節(jié)對可用胚數(shù)的影響不顯著[4],王木等研究表明季節(jié)對南陽牛超數(shù)排卵效果無明顯影響[5]。Barati等研究也發(fā)現(xiàn)不同季節(jié)對牛超數(shù)排卵獲得的可用胚胎數(shù)差異不顯著[6]。而吳亦方等報道季節(jié)對超數(shù)排卵效果有顯著影響,且春季獲得的可用胚數(shù)明顯低于秋季和冬季[7]。徐照學(xué)等也認為秋、冬季超數(shù)排卵效果好于春季[8]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)季節(jié)對利木贊牛超數(shù)排卵效果有顯著影響,春季超數(shù)排卵效果顯著低于秋季和冬季,這些研究結(jié)果的差異可能是由品種、飼養(yǎng)管理條件和超數(shù)排卵方案等因素造成的。

4 結(jié)語

4.1 激素劑量對利木贊牛超數(shù)排卵效果有顯著影響,劑量過高可能會影響下次超數(shù)排卵效果,使用Folltropin-v對利木贊牛超數(shù)排卵的最佳劑量為300 mg。

4.2 季節(jié)對利木贊牛超數(shù)排卵效果有顯著影響,且春季獲得的可用胚數(shù)顯著低于秋季和冬季,秋季和冬季之間差異不顯著。

[1]張國坪,何志軍,王統(tǒng)一,等.建立中國西部利木贊肉牛擴繁育肥基地及產(chǎn)業(yè)開發(fā)的可行性分析[J].中國牛業(yè)科學(xué),2007,33(4):42-45.

[2]Martens G,Nohner H,Leiding C,et al.Optimizing frequency of FSH application for superovulatory treatment in cattle[J].Reproduction,Fertility and Development,2005,17(2):313-314.

[3]Sugano M,Watanabe S.Use of highly purified porcine FSH preparation for superovulation in Japanese black cattle[J].T he Journal of Veterinary Medical Science,1997,59(3):223-225.

[4]和占星,松崎伸生.不同超排處理的效果及可用胚數(shù)的影響因素分析[J].黃牛雜志,2000,26(5):12-15.

[5]王木,王新莊,牛暉,等.南陽牛超數(shù)排卵研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2006,22(8):47-49.

[6]Barati F,Niasari-Naslaji A,Bolourchi M,et al.Superovulatory response of Sistani cattle to three different doses of FSH during winter and summer[J].Theriogenology,2006,66(5):1149-1155.

[7]吳亦方,高紅梅,王海,等.多種因素對奶牛超數(shù)排卵效果影響的研究[J].中國畜牧雜志,2007,43(7):10-12.

[8]徐照學(xué),李峰,王二耀,等.牛超數(shù)排卵技術(shù)的研究[J].黃牛雜志,1999,25(3):17-18.