楊 軍，劉運(yùn)海

(1常寧市人民醫(yī)院，湖南常寧421500;2中南大學(xué)湘雅醫(yī)院)

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)是最常見的顱內(nèi)高度惡性腫瘤。現(xiàn)代分子遺傳學(xué)已經(jīng)證實(shí)，腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與抑癌基因和癌基因的改變密切相關(guān)。MDM2基因定位于人染色體12q13～14，編碼491個(gè)氨基酸，MDM2蛋白的主要功能是p53蛋白酸性活化域直接結(jié)合形成復(fù)合物，從而抑制野生型p53介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活功能，阻斷p53的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，將野生型p53控制在較低無(wú)活性水平。MDM2過度表達(dá)時(shí)會(huì)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，還會(huì)造成腫瘤對(duì)放療、化療的耐受，與腫瘤的不良反應(yīng)有關(guān)［1］;而MDM2啟動(dòng)子區(qū)SNP309(309T＞G)能加強(qiáng)SP1轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合能力，從而使MDM2的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)和表達(dá)增加，直接抑制p53，進(jìn)一步削弱其腫瘤抑制作用［2］。本研究對(duì)MDM2基因啟動(dòng)子309位點(diǎn)多態(tài)性與GBM易感性的關(guān)系進(jìn)行分析?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2007年2月～2010年7月于中南大學(xué)湘雅醫(yī)院就診的GBM患者95例(病例組)，男 55例、女 40例，年齡 32～75(58.56±12.09)歲。均為影像學(xué)資料擬診為GBM，經(jīng)術(shù)后組織病理證實(shí)。對(duì)照組為同期健康體檢者95例，男55例、女40例，年齡27～83(60.56±11.78)歲。兩組年齡、性別具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集患者外周血5 ml，通過酚—氯仿法提取外周血單個(gè)核細(xì)胞基因組DNA。

1.2.2 MDM2基因多態(tài)性檢測(cè) 采用PCR-RFLP方法檢測(cè)MDM2 SNP309基因型，下游引物序列F:5'-GATTTCGGACGGCTCTCGCGGC-3'，R:5'-CATCCGGACCTCCCGCGCTG-3'。PCR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶PstⅠ37℃孵育2 h，2.5%瓊脂糖凝膠觀察酶切結(jié)果，野生型純合子(T/T型)為104、17 bp兩個(gè)片段;突變型純合子(G/G型)為121、17 bp兩個(gè)片段;雜合子(T/G型)為121、104和17 bp三個(gè)片段。同時(shí)隨機(jī)抽取三種基因型的樣本進(jìn)行PCR產(chǎn)物直接測(cè)序驗(yàn)證，結(jié)果與PCR-RFLP方法所得結(jié)果一致。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件。率的比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，用Binary Logistic回歸模型計(jì)算表示相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比(OR)及其95%可信區(qū)間(CI)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組MDM2 SNP309基因頻率分布 SNP309各基因型在病例組的頻率分布為:T/T型29.5%(28/95)、T/G 型 44.2%(42/95)、G/G 型 26.3%(25/95);在對(duì)照組的頻率分布為:T/T型30.5%(29/95)、T/G 型 54.7%(52/95)、G/G 型 14.8%(14/95)。兩組基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。

2.2 MDM2啟動(dòng)子SNP309位點(diǎn)多態(tài)性與GBM發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系 見表1。G/G基因型，而不是T/G基因型對(duì)于T/T來(lái)說能增加GBM的患病風(fēng)險(xiǎn)，即G/G基因型與野生型T/T基因型相比能增加GBM的患病風(fēng)險(xiǎn)，而T/T基因型則不能增加GBM的患病風(fēng)險(xiǎn)。在隱性模型中，G/G基因型的GBM患病風(fēng)險(xiǎn)是T攜帶者的2.04倍(OR=2.04，95%CI=1.51～2.78)，然而顯性模型中G攜帶者基因型(T/G和G/G)與T/T相比，患病風(fēng)險(xiǎn)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

表1 病例組與對(duì)照組MDM2 SNP309基因多態(tài)性與GBM風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系

3 討論

Qiao等［1］在李弗勞民綜合征患者身上發(fā)現(xiàn)了MDM2啟動(dòng)子區(qū)SNP309，發(fā)現(xiàn)這些患者易患腫瘤的原因是生殖細(xì)胞系的p53突變，同時(shí)發(fā)現(xiàn)MDM2 SNP309 G/G基因型與腫瘤發(fā)生的年齡提前有關(guān)，而且使一生中原發(fā)性腫瘤的發(fā)生頻率增加。研究顯示，MDM2啟動(dòng)子區(qū)SNP309(309T＞G)在不同腫瘤中發(fā)揮的作用不同，在散發(fā)性肉瘤［2］、子宮內(nèi)膜癌［3］、胃癌［4］、肝癌［5］、食管鱗癌和膀胱癌中，能增加發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，而在卵巢癌、乳腺癌［6］、頭頸部腫瘤、結(jié)腸直腸癌和中發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與MDM2啟動(dòng)子區(qū)SNP309(309T＞G)無(wú)關(guān)。MDM2作為p53的負(fù)性調(diào)控因子，具有抑制p53信號(hào)途徑的功能，從而削弱其腫瘤抑制作用。目前，關(guān)于MDM SNP309位點(diǎn)多態(tài)性與GBM易感性的研究較少，且存在爭(zhēng)議，國(guó)內(nèi)目前還沒有相關(guān)研究報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，SNP309G/G基因型與GBM的易感性顯著相關(guān)，SNP309G/G基因型的GBM患病風(fēng)險(xiǎn)是T攜帶者的2.04倍，進(jìn)一步證實(shí)了MDM2啟動(dòng)子309位點(diǎn)多態(tài)性與 GBM易感性的關(guān)系。Khatri等［7］研究顯示，MDM2 SNP309 G/G基因型能增加GBM的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，本研究結(jié)果與其一致。同時(shí)，本研究還提示MDM2 SNP309 G/G基因型可使GBM的發(fā)病年齡提前。但在不同基因型GBM發(fā)病年齡差別方面我們未能發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其原因可能是不同人種或民族之間存在差異。

綜上所述，MDM2啟動(dòng)子309位點(diǎn)多態(tài)性與GBM易感性相關(guān)，其中SNP309G等位基因能增加CBM的患病風(fēng)險(xiǎn)。另外，本研究結(jié)果是基于中國(guó)南方漢族人群，是否適用其他民族人群尚需進(jìn)一步證實(shí)。

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