(浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，浙江 寧波 315100)

補(bǔ)血顆粒由黃芪、延胡索、當(dāng)歸、陳皮組成，其方是由《重訂嚴(yán)氏濟(jì)生方》中古方三神丸衍化而來(lái)[1]。功能為補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛。用于血虛血瘀、月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)。根據(jù)處方中藥材所含有效成分的性質(zhì)，將延胡索單獨(dú)用乙醇回流提取。筆者通過(guò)正交試驗(yàn)篩選，以其所含的主有效成分之一延胡索乙素含量為考察指標(biāo)，用方差分析法進(jìn)行分析，優(yōu)選了補(bǔ)血顆粒提取工藝條件[2]。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

Agilent 1100型高效液相色譜儀、Advantage系列超純水機(jī)(美國(guó)pall)、BS124S電子分析天平(德國(guó)Sartorius)、SB-12DT超聲波清洗儀(寧波新芝生物儀器廠)、延胡索乙素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用，批號(hào)：0726-200208)，投料延胡索經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室鑒定為罌粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang.的干燥塊莖，其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 延胡索乙素的含量測(cè)定[3-4]

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；甲醇-0.1%磷酸溶液(用三乙胺調(diào)至pH至6.0)(60∶40)為流動(dòng)相；流速1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm;理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 稱取延胡索乙素對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密吸取醇提液5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。

2.2 浸出物含量測(cè)定 精密吸取樣品液10 mL，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥5 h，置干燥器中冷卻30 min，精密稱定重量，再在上述溫度下干燥1 h,冷卻、稱重，至連續(xù)2次稱重的差異不超過(guò)5 mg，按下式計(jì)算得膏率(W為浸膏質(zhì)量，M為藥材質(zhì)量，V為樣品溶液體積)。

2.3 醇提工藝正交設(shè)計(jì)[5]準(zhǔn)確稱取延胡索粗粉(過(guò)一號(hào)篩)50 g，加乙醇回流提取，以乙醇濃度、加醇量、提取次數(shù)、提取時(shí)間為考察因素，每個(gè)因素設(shè)計(jì)3個(gè)水平,以延胡索乙素含量為本品提取工藝的評(píng)價(jià)指標(biāo)，以浸出物含量作為本品的參考指標(biāo)，按L9(34)正交表安排試驗(yàn)，平行操作，見(jiàn)表1。

表1 因素水平表

2.4 正交試驗(yàn)及結(jié)果 按醇提正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案安排試驗(yàn)，得濾液,試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。方差分析結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 延胡索乙素含量方差分析

F0.10(2，2)=9.00；F0.05(2，2)=19.00；F0.01(2，2)=99.00

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以延胡索乙素的含量為本品提取工藝的評(píng)價(jià)指標(biāo)，以浸出物含量作為本品的參考指標(biāo)，直觀分析顯示各因素作用主次為C>A>B>D，最佳提取方案為A1B3C3D2。方差分析結(jié)果表明煎煮次數(shù)(A)、加水量(B)、煎煮時(shí)間(C)三因素均對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響，提取時(shí)間(D)因素，由于極差值較小，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著性影響。因此選用A1B3C3D2。

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 為了進(jìn)一步考察優(yōu)選工藝的可靠性及穩(wěn)定性，按2.3項(xiàng)下的提取條件進(jìn)行提取，按優(yōu)選工藝條件進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，結(jié)果表明正交試驗(yàn)優(yōu)選的工藝條件穩(wěn)定、可靠。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

3.1 延胡索的有效成分主要為生物堿，其中又以延胡索乙素為其主要活性成分。因此我們選取延胡索乙素作為本品提取工藝的主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，以浸出物含量作為本品的參考指標(biāo)。

3.2 優(yōu)選后的最佳工藝條件為A1B3C3D2，即醇提最佳工藝條件為加8倍量的60%乙醇回流提取90 min，共提取3次。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:52.

[2]張曉利,孫毅.延胡索的古今應(yīng)用[J].中國(guó)中醫(yī)藥咨訊,2010,2(29):161.

[3]陳瓊,石國(guó)明,孔泉,等.高效液相色譜法測(cè)定結(jié)石康膠囊中延胡索乙素含量[J].中國(guó)藥業(yè),2010,19(10):45-46.

[4]黃明立,黃東萍,蔣貴發(fā),等.RP-HPLC法測(cè)定復(fù)方金蒲片中延胡索乙素的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2010,17(8):45-46.

[5]李強(qiáng),謝揚(yáng),丁宗保,等.正交設(shè)計(jì)優(yōu)選黃石斛多糖提取工藝[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(28):15608-15609.