李 凡 何 亮 龔 敏 李樹清

昆明醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，昆明650500

ATP與Kv1.2相互作用在HIE后阿米巴樣小膠質(zhì)細(xì)胞活化中的機(jī)制研究

李 凡 何 亮 龔 敏 李樹清

昆明醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，昆明650500

目的：以炎癥介質(zhì)的生成作為阿米巴樣小膠質(zhì)細(xì)胞（Amoeboid microglial cells，AMC）活化的指標(biāo)，重點(diǎn)觀察缺血缺氧性腦病（Hypoxia Ischemia encephilopathy，HIE）后 Kv1.2與三磷酸腺苷（Adenosine 5'-triphosphate，ATP）誘導(dǎo)的AMC活化間的關(guān)系，進(jìn)一步探索HIE后AMC活化與ATP之間可能存在的分子機(jī)制。方法：通過熒光雙重標(biāo)記，觀察大鼠出生后1天、3天、5天、10天、14天AMC表達(dá)Kv1.2和ATP受體P2X4的改變；建立新生大鼠HIE動物模型，觀察Kv1.2和ATP受體P2X4表達(dá)的時(shí)間消長變化。體外采用缺氧和ATP誘導(dǎo)激活A(yù)MC，通過Real-time PCR和 Western Blotting技術(shù)，分別從mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測缺氧和ATP誘導(dǎo)AMC后，AMC表達(dá)Kv1.2、P2X4、白細(xì)胞介素1-β（Interleukin-1β，IL-1β）和腫瘤壞死因子—α（Tumor necrosis factor，TNF-α）的改變；以PBFI為熒光指示劑，觀察缺氧及ATP誘導(dǎo)后AMC胞內(nèi)K＋濃度的變化；最后，使用Kv1.2通道的特異性阻斷劑Ts Tx，觀察阻斷Kv1.2通道對缺氧和ATP誘導(dǎo)AMC活化后，AMC胞內(nèi)K＋濃度及表達(dá)IL-1β、TNF-α的影響。結(jié)果：HIE后Kv1.2、P2X4表達(dá)出現(xiàn)增加；體外缺氧和ATP誘導(dǎo)AMC活化后，Kv1.2、P2X4、IL-1β和TNF-α在mRNA和蛋白質(zhì)水平表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)；ATP激活A(yù)MC后，Kv1.2表達(dá)的上調(diào)，呈現(xiàn)濃度和劑量依賴效應(yīng)，同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)K＋濃度降低，利用Ts Tx阻斷Kv1.2通道，發(fā)現(xiàn)AMC胞內(nèi)K＋濃度有所恢復(fù)，IL-1β和TNF-α的表達(dá)亦出現(xiàn)下調(diào)。結(jié)論：Kv1.2與HIE誘導(dǎo)的AMC活化釋放炎癥介質(zhì)相關(guān)。