柴 漫

(鄂爾多斯市中心醫(yī)院,內(nèi)蒙古鄂爾多斯 017000)

惡性腫瘤的發(fā)生是由于異常細(xì)胞的凋亡受到抑制,呈無(wú)限制的惡性生長(zhǎng)趨勢(shì)所致,凋亡抑制是腫瘤的重要發(fā)病機(jī)制。核因子κB(NF-κB)是一種快反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子,近年發(fā)現(xiàn),其與細(xì)胞凋亡、腫瘤形成以及細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞分化等有關(guān)[1～3]。Livin是凋亡蛋白抑制因子,在多數(shù)惡性腫瘤中高表達(dá)[4～7]。NF-κB和Livin的關(guān)系及二者對(duì)細(xì)胞凋亡的影響國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道少見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)NF-κB和Livin在大腸癌及癌旁組織中的表達(dá)情況及細(xì)胞凋亡情況,以探討其與大腸癌發(fā)病的關(guān)系。

1 資料與方法

1 臨床資料 選擇 2007年3月 ～2009年 4月在我院住院治療的 68例大腸癌患者的手術(shù)標(biāo)本,并取距癌組織5 cm以外的癌旁組織作為對(duì)照?；颊吣?38例、女 30例,年齡 28～72歲、平均 56.6歲?；颊咝g(shù)前均未接受放化療。

1.2 方法 兔抗人Livin單克隆抗體購(gòu)自博士德生物制劑有限公司。鼠抗人NF-κB單克隆抗體、山羊抗兔、山羊抗鼠IgG抗體-HRP多聚體、辣根過(guò)氧化物酶顯色劑DAB、DNA末端原位檢測(cè)(TUNEL)試劑盒均購(gòu)自北京中杉生物制劑有限公司。TUNEL法檢測(cè)大腸癌及癌旁組織的細(xì)胞凋亡,免疫組化SP法檢測(cè)NF-κB和Livin蛋白的表達(dá)。

結(jié)果判定：TUNEL標(biāo)記陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色,位于細(xì)胞核內(nèi),光鏡下計(jì)算凋亡指數(shù)(AI)。AI=凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。NF-κB胞質(zhì)、胞核均著色,Livin為胞質(zhì)著色,出現(xiàn)棕色或棕褐色顆粒判斷為陽(yáng)性。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野,每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù) 100個(gè)細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。將陽(yáng)性細(xì)胞按照其數(shù)量及顯色程度分為 3級(jí)：表達(dá)陰性(-),即陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%,顯色強(qiáng)度為淡黃色;表達(dá)弱陽(yáng)性(+),即陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在10%～25%,顯色強(qiáng)度為黃色至棕色;表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性為(+++),即陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)﹥ 50%,顯色強(qiáng)度為棕黃色至棕褐色;陽(yáng)性表達(dá)介于二者之間的為(++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件,AI的比較采用t檢驗(yàn);NF-κB及Livin基因表達(dá)的比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn),二者表達(dá)的相關(guān)性采用Kendall等級(jí)相關(guān)分析。P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 NF-κB、Livin及AI在大腸癌及癌旁組織中的表達(dá) 見(jiàn)表1。

表1 大腸癌及癌旁組織中NF-κB、Livin的表達(dá)及AI比較

2.2 大腸癌及癌旁組織中NF-κB及Livin的表達(dá)與AI的關(guān)系 癌組織中NF-κB陽(yáng)性與陰性的AI分別為(6.48±5.19)%、(10.87±5.34)%,Livin陽(yáng)性與陰性的AI分別為(5.87±4.38)%、(12.32± 1.95)%。癌旁組織中NF-κB陽(yáng)性與陰性的AI分別為(12.88±4.83)%、(17.16±5.76)%,Livin陽(yáng)性與陰性的AI分別為(3.12±1.04)%、(18.24± 3.45)%。癌組織及癌旁組織NF-κB及Livin陽(yáng)性的AI值均低于陰性者(P均＜0.05)。

2.3 大腸癌中NF-κB、Livin表達(dá)的關(guān)系 NF-κB和Livin表達(dá)共同陽(yáng)性者30例,共同陰性者15例, NF-κB陽(yáng)性而Livin陰性者10例,NF-κB陰性而Livin陽(yáng)性者13例。大腸癌組織中NF-κB、Livin表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.292,P＜0.05)。

3 討論

大腸癌的發(fā)生是環(huán)境因素與遺傳因素相互作用的結(jié)果,是多基因參與,多途徑、多步驟的過(guò)程,其中細(xì)胞增殖與凋亡平衡失調(diào)起著重要作用。細(xì)胞凋亡受凋亡促進(jìn)因子和抑制因子的共同調(diào)節(jié)。如凋亡調(diào)控的相關(guān)基因表達(dá)異常,將引起細(xì)胞凋亡障礙,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。

NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,廣泛存在于靜止期細(xì)胞的胞質(zhì)中,能與多種細(xì)胞基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子序列位點(diǎn)發(fā)生特異性結(jié)合,從而參與細(xì)胞分化、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡、腫瘤的發(fā)生發(fā)展等多種生物學(xué)功能,其活性的失控與部分腫瘤密切相關(guān),在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用[8,9]。凋亡蛋白抑制因子(IAP)是一類(lèi)高度保守的內(nèi)源性抗凋亡基因家族表達(dá)產(chǎn)物,廣泛存在于許多物種如病毒、真核生物、哺乳動(dòng)物中,有抑制細(xì)胞凋亡的作用,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。Livin是IAP家族的新成員,在正常成人的大多數(shù)終末組織中(除胎盤(pán))低表達(dá)或不表達(dá),而在多數(shù)惡性腫瘤中高表達(dá)。Livin特異地高表達(dá)于腫瘤組織的特性有可能為腫瘤的早期診斷、基因和細(xì)胞治療提供新的方向。

本研究采用免疫組化方法檢測(cè)了大腸癌癌組織及癌旁組織中NF-κB及Livin蛋白的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)NF-κB及Livin在大腸癌組織中的表達(dá)率均高于癌旁組織,提示NF-κB及Livin在大腸癌的發(fā)生過(guò)程中均發(fā)揮了作用。NF-κB及Livin的過(guò)表達(dá)使細(xì)胞凋亡受到抑制,從而使細(xì)胞的增殖和凋亡失衡,導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。

TUNEL法是細(xì)胞凋亡的檢測(cè)手段之一,可準(zhǔn)確地反映凋亡發(fā)生的程度。本研究采用此方法發(fā)現(xiàn),癌旁組織的細(xì)胞凋亡率明顯高于大腸癌組織,且NF-κB和Livin蛋白表達(dá)陽(yáng)性或陰性組間AI有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示NF-κB和Livin蛋白表達(dá)上調(diào)抑制了細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致細(xì)胞惡性無(wú)限制生長(zhǎng),進(jìn)而促使腫瘤發(fā)生。進(jìn)一步研究表明,NF-κB和Livin在大腸癌中的表達(dá)具有相關(guān)性,提示二者表達(dá)具有相互協(xié)同或相互誘導(dǎo)作用,也證實(shí)了腫瘤的發(fā)生是多種基因及其表達(dá)產(chǎn)物協(xié)同作用的結(jié)果。

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