雷利利，張熙潔，侯林中，劉曉紅（河北唐山市工人醫(yī)院藥學(xué)部，唐山市063000）

中藥制劑是以中藥材為原料，以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，按照一定的處方和制備工藝加工而成的制劑，因其在疑難雜癥方面療效獨特、毒副作用少，越來越受到醫(yī)藥界的廣泛關(guān)注。由于中藥制劑成分復(fù)雜，藥效學(xué)研究滯后，《中國藥典》（一部）收載的中藥含量測定的成分，一種是活性有效成分；一種是指標成分，即可能是活性成分，也可能是非活性成分。為了落實科技部和國家食品藥品監(jiān)督管理局對藥品“安全、有效和質(zhì)量可控”的發(fā)展戰(zhàn)略，全國的藥學(xué)工作者經(jīng)過幾十年不斷努力，使現(xiàn)代色譜技術(shù)成為中藥質(zhì)量控制的主要分析手段。從1985年版《中國藥典》開始引入色譜技術(shù)到2010年版《中國藥典》，在短短的25年時間內(nèi)，現(xiàn)代色譜技術(shù)在中藥質(zhì)量控制方面得到突飛猛進的發(fā)展。2005年版《中國藥典》（一部）中收載564種中藥制劑，其含量測定項中有32種采用薄層色譜（TLC）法，338種采用HPLC法，23種采用氣相色譜（GC）法。而2010年版《中國藥典》（一部）收載中藥制劑有1 063種，其含量測定項中709種采用HPLC法，24種采用GC法，12種采用薄層掃描色譜（TLC-CS）法。可見，2010年版與2005年版《中國藥典》相比，定量分析項中色譜技術(shù)的應(yīng)用明顯增加。因此，本文就目前色譜技術(shù)在中藥制劑多指標成分定量分析方面的應(yīng)用綜述如下。

1 HPLC在中藥制劑多指標成分控制中的應(yīng)用

HPLC法具有分離效能高、分析速度快、重現(xiàn)性好、流動相選擇性廣、色譜柱可反復(fù)使用等特點，因此在中藥制劑質(zhì)量控制中占有非常重要的地位。

在HPLC儀構(gòu)成組件中，檢測器作為核心部件主要包括紫外檢測器（UV）、蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）、質(zhì)譜檢測器（MS）以及熒光檢測器等。二極管陣列檢測器（DAD）也屬于紫外檢測器。在中藥制劑質(zhì)量分析中最為常用的檢測器是UV、DAD、ELSD及MS。徐金鐘等[1]以HPLC-UV檢測法測定清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的含量，結(jié)果在274 nm波長處各成分線性關(guān)系良好，準確性高。紀曉影等[2]以HPLC-UV法測定抗感解毒顆粒中綠原酸、梔子苷和葛根素含量，結(jié)果在238 nm波長處各成分的平均回收率分別為96.6%、97.9%、98.4%。安神補心丸[3]中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹參酮ⅡA的含量測定的反相（RP）-HPLC-UV檢測法的建立，也使該制劑質(zhì)量得到有效控制。此外，HPLC-UV法還可用于腸安康顆粒[4]、退熱解毒注射液[5]、通舒口爽膠囊[6]、銀黃顆粒[7]、桂枝茯芩膠囊[8]等制劑中多指標成分的含量測定。DAD具有快速提供待測物的三維圖譜等特點，近幾年也逐漸用于中藥制劑中多指標成分分析。魯艷柳等[9]采用HPLC-DAD法在276 nm波長處分析了定清肝活血方中葛根素、黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素含量，結(jié)果各指標成分平均回收率均在99.64%～100.83%之間。抗感膠囊中綠原酸、咖啡酸、芍藥苷、木犀草苷和蘆丁同時測定的HPLC-DAD法的建立，也為該制劑質(zhì)量的綜合評價提供了參考[10]。綜上所述，HPLC-UV或HPLC-DAD法為中藥制劑質(zhì)量的有效控制提供了可靠的依據(jù)和保證。

UV作為專屬型檢測器，只針對有紫外吸收的成分進行檢測，而對于紫外吸收弱的化合物成分，往往采用ELSD分析，不但避免了其他紫外吸收成分的干擾，且提高了靈敏度。段瑞等[11]用HPLC-ELSD法測定紅藥片中三七皂苷R1及人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量，與該制劑用RP-HPLC法分析比較，前者準確、分離效果好、無干擾，且節(jié)省了分析時間。李春英等[12]建立了四君子丸中黨參炔苷、茯苓酸、甘草酸、蒼術(shù)內(nèi)酯Ⅲ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量分析的HPLC-ELSD法，結(jié)果待測組分質(zhì)量濃度的對數(shù)值與色譜峰面積的對數(shù)值有良好的線性關(guān)系。此外，Wei YJ等[13]采用HPLC-DAD-ELSD法測定復(fù)方丹參制劑中的酚酸、皂苷和二萜醌類成分的含量，方法新穎。2010年版《中國藥典》（一部）中采用HPLC-ELSD法測定品種已達到41種，可見HPLC-ELSD法將成為中藥制劑的主要分析手段。

HPLC-MS法則是將HPLC的高分離效能和MS的高靈敏度、高專屬性及較強的結(jié)構(gòu)解析能力相結(jié)合，成為中藥制劑復(fù)雜系統(tǒng)質(zhì)量研究的有力手段。許海棠等[14]采用HPLC-MS法，選擇電噴霧（ESI）為電離源，通過待測組分的保留時間和質(zhì)譜信息，對桂林西瓜霜噴劑中苦參堿、小檗堿、黃芩苷和靛玉紅等有效成分同時進行了快速靈敏的定性定量分析。HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)是根據(jù)特征碎片離子（子離子）的峰面積進行定量，專一性強，不要求各成分色譜峰完全分離，分析快速。張新峰等[15]采用HPLC-MS/MS法，在11 min內(nèi)完成了左金丸和香蓮?fù)柚兴幐鶋A、黃連堿、巴馬汀、小檗堿、吳茱萸堿和吳茱萸次堿的含量測定，且6種成分的最低定量濃度為0.5 ng·mL-1。HPLC-MS（MS/MS）的聯(lián)用還可用于四物湯[16]中有機酸類和內(nèi)酯類成分等檢測。此外，MS與其他檢測器聯(lián)用（如HPLC-DAD-MS/MS[17]）還可用于分析制劑中糖類、萜類及苷類化合物。

多波長HPLC法的出現(xiàn)，為中藥制劑多指標成分定量分析提供了另一新途徑。多波長的選擇一般是建立在指標成分最大吸收波長基礎(chǔ)上，不但增加方法的靈敏度和準確度，而且降低了其他成分的干擾。曾俊芬等[18]在280、320 nm波長處采用HPLC-DAD法實現(xiàn)了通脈口服液中咖啡酸、葛根素、阿魏酸、隱丹參酮、丹參酮ⅡA等成分的良好分離。柏冬等[19]采用多波長HPLC-DAD法同時測定桂枝湯中芍藥苷、甘草酸、肉桂酸、桂皮醛及甘草苷的含量，結(jié)果在230、250、280 nm波長處，60 min內(nèi)5種有效成分被完全分離。此外，多波長HPLC法還可用于抗感寧合劑[20]、雙黃連口服液[21]、益宮膠囊[22]等制劑中多指標成分分析。

2 GC在中藥制劑多指標成分控制中的應(yīng)用

GC法分離效能高、靈敏度高、分析速度快，廣泛用于一些揮發(fā)性成分的測定，如暑濕感冒靈[23]中麝香草酚和香荊芥酚，傷濕止痛膏[24]中樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯，以及六味安消膠囊[25]中對甲氧基桂皮酸乙酯、土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯等含量分析。

GC-MS聯(lián)用技術(shù)可對復(fù)雜的中藥制劑揮發(fā)性成分進行分離和定性、定量分析。魏立新等[26]采用超臨界CO2萃取法提取帕朱膠囊的可溶性成分，并用GC-MS法對提取部位進行分析，結(jié)果共分離鑒定22種化合物，主要成分含量為胡椒堿44.2%、亞油酸21.1%、甲基-甲撐基奧-異丙烯內(nèi)酯10.5%、棕櫚酸4.8%和γ-羥基-欖香烯酸內(nèi)酯3.5%等。

3 指紋圖譜法在中藥制劑多指標成分控制中的應(yīng)用

多指標定量指紋圖譜具有數(shù)據(jù)全面、圖譜優(yōu)質(zhì)、與化學(xué)計量學(xué)緊密結(jié)合等優(yōu)點，能對中藥復(fù)雜體系進行多變量整體評價，體現(xiàn)中藥制劑療效的綜合性，在中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。夏華玲等[27]采用GC-MS法，建立了筋骨痛消丸中揮發(fā)性成分的指紋圖譜法，為其質(zhì)量控制提供了更全面的信息。馬曉紅等[28]研究了復(fù)方丹參片乙醇提取物ESI-MS和HPLC-MS特征圖譜。劉征輝等[29]采用TLC建立了六味地黃丸（膠囊）的指紋圖譜，收集不同廠家的27批產(chǎn)品，并使用聚類分析法和主成分分析法對其指紋圖譜進行了模式識別研究。

4 TLC和TLCS在中藥制劑多指標成分控制中的應(yīng)用

TLC和TLCS操作簡便，具有分離和鑒別雙重功能，但定量分析誤差較大，因此多用于中藥制劑的定性鑒別。2010年版《中國藥典》（一部）與2005年版比較，含量測定項下采用該法的中藥制劑品種明顯下降，而且該法局限于紫外吸收較弱或無紫外吸收成分的分析，如皂苷類[30]。

5 毛細管電泳（CE）在中藥制劑多指標成分控制中的應(yīng)用

CE法是以高電場為驅(qū)動，毛細管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的技術(shù)，適用于中藥制劑中帶電荷化合物的分離分析。生物堿類成分[31]如小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、延胡索乙素等在緩沖體系中帶有正電荷，可采用CE法分析。此外，該法還可用于有機酸類、皂苷類或苷類[32]及黃酮類[33]等成分分析。膠束掃集CE法應(yīng)用于雙黃連口服液[34]中綠原酸和咖啡酸的含量測定，結(jié)果二者的檢出限分別達到1.02和0.168 μg·mL-1。CE場放大富集技術(shù)用于中藥制劑中含量較少的毒性成分測定，可有效改善其檢測靈敏度，如骨筋丸膠囊中有效毒性成分士的寧和馬錢子堿的含量采用該法測定，其檢測靈敏度相對于毛細管區(qū)帶電泳分別提高了400倍和600倍[35]。CE與電化學(xué)檢測（ED）聯(lián)用，對電化學(xué)活性物質(zhì)具有更高的靈敏度和選擇性，如復(fù)方羅布麻片中兒茶素、蘆丁、金絲桃苷、綠原酸和槲皮素等成分分析[36]。

6 結(jié)論

隨著現(xiàn)代色譜技術(shù)的不斷發(fā)展，中藥制劑的質(zhì)量控制模式逐漸從單一成分的鑒別和評價向多指標成分分析邁進。多指標分析不僅能全面反映中藥整體質(zhì)量的信息，且能確保臨床用藥的安全、有效。因此，建立多指標分析方法對中藥制劑質(zhì)量控制意義重大。但是，伴隨中藥制劑品種的推陳出新，其質(zhì)量的全面控制還有待于加強。因此，在不斷實踐的基礎(chǔ)上，要求廣大研究者結(jié)合現(xiàn)代分析手段，提高中藥復(fù)雜成分的分析水平，并在中藥制劑安全、有效的前提下，確保其質(zhì)量可控，進一步實現(xiàn)中藥的現(xiàn)代化。

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