劉振玉 劉升 黃亮

南昌大學第一附屬醫(yī)院急診科，△胸心外科，江西 南昌 330006

尾加壓素Ⅱ在非小細胞肺癌中的表達及其意義的探討

劉振玉 劉升△黃亮

南昌大學第一附屬醫(yī)院急診科，△胸心外科，江西 南昌 330006

尾加壓素Ⅱ； 非小細胞肺癌； 酶聯(lián)免疫吸附試驗

尾加壓素Ⅱ(urotensin-Ⅱ，U-Ⅱ)，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強縮血管活性肽，其縮血管效應比內(nèi)皮素強16倍之多。U-Ⅱ在動脈硬化、心力衰竭等心血管疾病、腎臟及糖尿病等疾病過程中發(fā)揮重要作用［1-2］。除縮血管活性外，U-Ⅱ還是一種具有絲裂原樣作用的自分泌/旁分泌生長因子［3］，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著一定的作用。有關U-Ⅱ基因及其表達產(chǎn)物在肺癌中的表達及其臨床意義的研究，雖有國外少數(shù)報道，但尚無定論［4］。本實驗采用酶聯(lián)免疫吸附試驗，以非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)手術切除標本、正常肺組織為研究對象，探討U-Ⅱ在NSCLC中的表達狀況，及U-Ⅱ的表達水平與肺癌發(fā)生、發(fā)展和病理類型及臨床分期的關系。

1 資料和方法

1.1 標本與試劑

肺癌標本取自南昌大學第一附屬醫(yī)院肺癌手術切除患者63例，其中男性50例，女性13例，年齡33～72歲，平均50.5歲；經(jīng)病理證實鱗癌33例，腺癌30例，其中高分化鱗癌8例，中分化鱗癌13例，低分化鱗癌12例，高分化腺癌7例，中分化腺癌14例，低分化腺癌9例；臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期35例，Ⅲ+Ⅳ期28例；無遠處轉(zhuǎn)移35例，有遠處轉(zhuǎn)移28例。另取離腫瘤組織5 cm以上的肺組織作為對照的正常肺組織，共31例；每份標本均取3份，放入液氮中保存。主要試劑：U-Ⅱ ELISA試劑盒購自上海繼錦化學科技有限公司。

1.2 方法

酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測NSCLC、正常肺組織中U-Ⅱ的含量(ng/mL)。操作步驟如下：標本收集及處理：新鮮取的肺癌、正常肺組織用PBS洗3次，1 g腫瘤或1 g正常組織放入1 mL PBS中，并在小玻璃皿中勻漿，組織勻漿后12 000 r/min離心1 min，離心后收集上清液備檢查，于-20 ℃保存。

檢測準備工作：⑴提前20 min從冰箱中取出試劑以平衡至室溫。將20倍的濃縮洗滌液放至37 ℃溫箱，30 min，用雙蒸水稀釋。⑵用標準品稀釋液根據(jù)標準品的初始濃度進行系列稀釋，每一稀釋要混勻，未用完的標準品立即放入-20 ℃保存，已稀釋的標準品未用完的丟棄。⑶U-Ⅱ檢測，從已平衡至室溫的密封袋中取出所需板條，其他板條密封放回2～8℃。加入標本和已稀釋的不同濃度的標準品各100 μL至相應孔中，振蕩混均后置于37 ℃水浴中溫育60 min。洗板，甩盡孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液350 μL，靜止30 s后甩盡液體，在厚迭吸水紙上拍干，重復5次。⑷加入100 μL辣根過氧化酶標記的二抗于各孔，37 ℃溫育，60 min。洗板同⑶。⑸每孔加底物OPD各50 μL，避光37 ℃，15 min。⑹每孔加終止液1 N HCL 50 μL。⑺在Vmax 酶聯(lián)分析儀檢測各孔400 nm處的D值標準曲線由儀器完成。

1.3 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)均以表示，組間對比進行方差分析或四方格表精確概略法，數(shù)據(jù)處理由第三軍醫(yī)大學統(tǒng)計教研室《數(shù)理統(tǒng)計程序包》處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 NSCLC組織及正常肺組織U-Ⅱ含量比較

NSCLC組織U-Ⅱ含量(542.40±41.81)ng/mL，明顯高于正常肺組織(17.13±3.21)ng/mL，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。

2.2 肺癌組織類型U-Ⅱ含量比較

鱗癌患者U-Ⅱ含量(498.50±39.81)ng/mL與腺癌患者(562.00±42.20)ng/mL比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.3 臨床病期與U-II表達水平的關系

Ⅰ+Ⅱ期患者U-Ⅱ含量為(256.00±7.65)ng/mL，明顯低于Ⅲ+Ⅳ期患者的(372.50±19.74)ng/mL，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.4 肺癌組織U-II含量與肺癌轉(zhuǎn)移的關系

33例鱗癌患者有21例發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，U-Ⅱ含量為(569.50±70.36) ng/mL，12例無遠處轉(zhuǎn)移U-Ⅱ含量為(252.50±17.39) ng/mL；30例腺癌患者有22例發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，U-Ⅱ含量為(596.50±42.30) ng/mL，8例無遠處轉(zhuǎn)移U-Ⅱ含量為(283.40±18.48) ng/mL，可見有遠處轉(zhuǎn)移的肺癌患者U-Ⅱ含量明顯高于無遠處轉(zhuǎn)移的肺癌患者，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

3 討 論

U-Ⅱ是一種強大的細胞有絲分裂促進劑，像其他促有絲分裂的肽類激素一樣，如腎上腺髓質(zhì)素和內(nèi)皮素-1，能夠以自分泌/旁分泌的方式，促進腫瘤細胞異常增殖、血管生成、抑制腫瘤細胞分化，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移中起重要作用。有關U-Ⅱ在腫瘤中的表達，國內(nèi)外近年陸續(xù)有報道［5-7］。有學者用反向PCR方法研究發(fā)現(xiàn)人類多種腫瘤細胞中均有U-Ⅱ及其受體mPNA的表達，如T98G惡性膠質(zhì)細胞瘤、EMR-32成神經(jīng)細胞瘤、NB69成神經(jīng)細胞瘤、BeWO絨毛膜上皮癌、SW-13腎上腺皮質(zhì)腫瘤、DLD-結(jié)腸腺癌及子宮頸細胞癌。除NB69成神經(jīng)細胞瘤外，其余9種瘤細胞株均表達U-Ⅱ mRNA，而U-Ⅱ受體mRNA在7種腫瘤細胞均有表達。通過放射免疫分析法證實，在上述7種腫瘤細胞中SW-13腎上腺皮質(zhì)腫瘤細胞培養(yǎng)的上清液中存在U-Ⅱ的免疫反應。Eddahibi等［8］研究發(fā)現(xiàn)U-Ⅱ在腎癌細胞中的免疫活性呈中度表達。在腎透明細胞癌組織及血管中也有中等量U-Ⅱ表達，而癌周炎性細胞中幾乎無表達，據(jù)此推測腎腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與U-Ⅱ有關。Takahashi等［9］檢測出U-Ⅱ受體在橫紋肌肉瘤中的表達，人類U-Ⅱ可抑制去除血清和腫瘤壞死因子誘導的內(nèi)皮凋亡。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗，對63例肺癌手術切除標本及31例離肺癌組織邊緣5 cm以上的肺組織U-Ⅱ的含量進行了檢測。結(jié)果顯示，U-Ⅱ在肺癌組織中含量明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。同時還發(fā)現(xiàn)各病理類型肺癌U-Ⅱ含量差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，故肺癌組織中U-Ⅱ水平與肺癌病理類型無關。本研究還顯示Ⅰ～Ⅱ期肺癌組織中U-Ⅱ含量明顯低于Ⅲ～Ⅳ期肺癌組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。另外，有遠處轉(zhuǎn)移的晚期肺癌患者U-Ⅱ含量明顯高于沒有遠處轉(zhuǎn)移的肺癌患者，提示肺癌組織中U-Ⅱ水平的增高與肺癌的惡性程度及臨床預后有關。在惡性腫瘤的生長過程中，由于組織生長過快，必然造成組織嚴重缺氧。有研究報道，低氧可以促使肺組織中多種細胞合成分泌U-Ⅱ，低氧后血管巨噬細胞數(shù)量明顯增多，且細胞內(nèi)U-Ⅱ陽性反應明顯增強，其分泌的U-Ⅱ亦可直接釋放入血，因此血管巨噬細胞合成的U-Ⅱ是循環(huán)中U-Ⅱ的重要來源［10］。而肺癌本身屬于缺氧腫瘤，隨著惡性程度的增高及病情進展其缺氧程度加重，U-Ⅱ合成分泌亦增多，并可能通過旁分泌或自分泌的方式，作用于腫瘤細胞，直接或間接地維持和促進腫瘤細胞的生長，使癌細胞更有利于逃避免疫監(jiān)視，從而使腫瘤更具侵襲性，更容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。但是U-Ⅱ在腫瘤的血管發(fā)生、發(fā)展過程中的機制，及其與其他影響因子之間的相互作用及具體作用機制尚需要進一步的研究探討。

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10.3969/j.issn.1007-3969.2011.06.016

R734.2

A

1007-3639(2011)06-0499-02

劉振玉 E-mail:lzylzy660314@163.com

2011-03-03

2011-06-01）