魏 燕，周京京，張利萍，李 茜，楊 晶，張 翼

(河北醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)教研室，河北石家莊050017)

研究表明，白藜蘆醇苷(Polydatin)可對(duì)抗大鼠心肌缺血/再灌所致心臟功能損傷和細(xì)胞凋亡，以及抗心律失常［1］。其心臟保護(hù)作用與心肌細(xì)胞ATP敏感鉀通道開放、Bcl-2蛋白表達(dá)增加和 Bax蛋白表達(dá)減少、NO含量增加有關(guān)［2－3］。我們近來的電生理學(xué)研究顯示，Polydatin可縮短大鼠乳頭肌動(dòng)作電位復(fù)極化過程，并可抑制部分去極化乳頭肌動(dòng)作電位，其作用與心肌細(xì)胞ATP敏感鉀通道激活和L型鈣通道抑制有關(guān)［4］。本研究旨在應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗方法探討Polydatin對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞L型Ca2+電流(ICa-L)及其通道動(dòng)力學(xué)的影響。

1 材料與方法

1.1 心室肌細(xì)胞的分離 成年♂SD大鼠，通過Langendorff離體心臟灌流及酶分解法得到單個(gè)心室肌細(xì)胞。細(xì)胞于KB液中保存?zhèn)溆茫?］。

1.2 ICa-L的記錄 細(xì)胞置于倒置顯微鏡工作臺(tái)浴槽內(nèi)，給予恒溫、恒速灌流液灌流。經(jīng)微操縱器，使玻璃微電極與細(xì)胞形成高阻抗封接和全細(xì)胞記錄模式。采用電壓鉗方式、通過運(yùn)行Pclamp程序完成電流的激發(fā)和采集。觀察不同濃度Polydatin對(duì)ICa-L的作用。通過不同的刺激方式［6］，觀察Polydatin對(duì)L型Ca2+通道電流－電壓關(guān)系、激活過程、失活過程以及失活后恢復(fù)過程的影響。

1.3 藥品及溶液 Polydatin購自 Neptunus Pharmaceutical Co.Ltd(Shenzhen，China)。細(xì)胞外液(mmol·L－1):TEACl 140，MgCl22.0，CaCl21.5，Glucose 10，HEPES 10，TTX 0.01，用TEA-OH調(diào)pH值至7.3～7.4并以純氧飽和。電極內(nèi)液(mmol·L－1):Mg-ATP 3，CsCl 140，HEPES 10，EGTA 10，用CsOH 調(diào)pH值至7.2。

2 結(jié)果

2.1 Polydatin對(duì)峰值ICa-L的影響 Polydatin可濃度依賴性的降低 ICa-L電流密度。在 Polydatin 25、50、75和100 μmol·L－1濃度下，ICa-L峰值電流密度降低分別達(dá)17%、32%、41%和53%(P＜0.05)。

2.2 Polydatin對(duì)ICa-L電流-電壓關(guān)系的影響 Polydatin

可濃度依賴性導(dǎo)致ICa-L關(guān)系曲線上移，而其關(guān)系無明顯變化。

2.3 Polydatin對(duì)ICa-L激活、失活以及失活后恢復(fù)動(dòng)力學(xué)的影響 Polydatin對(duì)ICa-L激活曲線無影響。Polydatin(50μmol·L－1)使ICa-L失活曲線向負(fù)電壓方向移位，穩(wěn)態(tài)半激活電壓(V1/2)負(fù)值增加(－7 mV)，斜率因子(S)增大(P＜0.05，Tab 1)。Polydatin對(duì)失活后恢復(fù)曲線無影響。

Tab 1 Effect of Polydatin on activation kinetics and inactivation kinetics of L type Ca2+channel in rat ventricular myocytes(±s，n=6)

*P ＜0.05 vs 0 μmol·L－1

S/mV 0 μmol·L －1 Polydatin concentration Activation V1/2/mV S/mV Inactivation V1/2/mV－16.7 ±4.7 5.6 ±0.6 －22.6 ±0.9 4.0 ±0.4 50 μmol·L－1 －19.3 ±4.4 5.6 ±0.9 －30.2 ±2.6*4.8 ±0.1*

3 討論

本研究采用全細(xì)胞膜片鉗探討Polydatin對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞L型鈣電流的影響，結(jié)果再次證實(shí)，Polydatin可濃度依賴性地降低ICa-L，使ICa-L關(guān)系曲線逐漸上移。進(jìn)一步通道動(dòng)力學(xué)結(jié)果表明，Polydatin對(duì)ICa-L激活過程無影響，可使失活過程向負(fù)電壓方向移位，即失活過程加快，而對(duì)ICa-L失活后恢復(fù)過程無影響。結(jié)果提示，Polydatin對(duì)L型鈣通道的抑制與加快通道失活有關(guān)。

L型鈣通道電流是構(gòu)成心室肌工作肌細(xì)胞動(dòng)作電位平臺(tái)期的基礎(chǔ)，決定平臺(tái)期的長短和動(dòng)作電位時(shí)程。L型鈣通道電流參與心臟竇房結(jié)自律細(xì)胞動(dòng)作電位去極化和4期自動(dòng)去極化的形成，是決定心肌自律性的一個(gè)重要因素［7］。病理情況下，多種心律失常如早后除極化和晚后除極化的發(fā)生均與L型鈣電流的異?；顒?dòng)有關(guān)。我們以往研究顯示Polydatin具有抗缺血/再灌注心律失常作用。本研究發(fā)現(xiàn)，Polydatin通過加快L型鈣通道的失活過程而抑制L型鈣電流。此作用可能是Polydatin抗心律失常的電生理學(xué)機(jī)制之一。

本研究根據(jù)Polydatin抑制L型鈣通道電流的結(jié)果，可推斷Polydatin可通過阻斷L型鈣通道，抑制缺血/再灌注心肌細(xì)胞的外鈣內(nèi)流和減輕心肌內(nèi)鈣釋放，從而減輕鈣超載，對(duì)抗心肌缺血/再灌注損傷。

［1］ Zhang L P，Yang C Y，Wang Y P，et al.Protective effect of polydatin against ischemia/reperfusion injury in rat heart［J］.Acta Physiol Sin，2008，60(2):161－8.

［2］ Zhang L P，Yang C Y，Wang Y P，et al.ATP-sensitive potassium channel and mitochondrial permeability transition pore involved in cadioprotection of polydatin［J］.Chin J Phamacol Toxicol，2009，23(2):81－8.

［3］ Zhang L P，Ma H J，Bu H M，et al.Polydatin attenuates ischemia/reperfusion-induced apoptosis in myocardium of rat［J］.Acta Physiol Sin，2009，61(4):367 －72.

［4］ Zhang L P，Wei Y，Song S L，et al.Effect of polydatin on action potential in ventricular papillary muscle of rat and the underlying ionic mechanism［J］.Acta Physiol Sin，2011，63(1):48 －54.

［5］ 劉愛華，張志雄.銀杏酮酯對(duì)缺血豚鼠心室肌細(xì)胞ICa-L和游離鈣的影響［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2010，26(3):329－33.

［5］ Liu A H，Zhang Z X.Effect of GBE50 on L type calcium current and cytosolic［Ca2+］iin ischemic guinea pig ventricular myocytes［J］.Chin Pharmacol Bull，2010，26(3):329 －33.

［6］ 張廣欽，郝雪梅，陳世忠，等.芍藥苷對(duì)大鼠心肌細(xì)胞L鈣通道的阻斷作用［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2003，19(8):863－6.

［6］ Zhang G Q，Hao X M，Chen S Z，et al.Blockade of paeoniflorin on L-type calcium channel in isolated rat ventricular myocytes［J］.Chin Pharmacol Bull，2003，19(8):863 －6.

［7］ McGeown J G.Master Medicine:Physiology［M］.3 ed.Singapore city:Elsevier(Sigapore)Pte Ltd，2007:61 －4.