劉 波，邱 萌

湖北省孝感市中心醫(yī)院檢驗科，湖北孝感 432000

強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一種以脊柱病變?yōu)橹鞯穆悦庖咝约膊?，病變主要累及骶髂關(guān)節(jié)和周圍關(guān)節(jié)，引起脊柱強直和纖維化，最終導致關(guān)節(jié)功能障礙，關(guān)節(jié)畸形，該病的病因至今尚未完全明確。目前我國大約有400萬患者[1]。多數(shù)學者認為，本病是在遺傳因素的基礎(chǔ)上，受到外傷、感染、勞累等因素的刺激而引發(fā)自身免疫性炎癥反應(yīng)。國內(nèi)外有許多實驗研究證明人類白細胞抗原B27（human leukocyte antigen B27，HLA-B27）表達陽性與AS高度相關(guān)，＞90%的AS患者HLA-B27抗原陽性而正常人群只有8%表達，是對疑似患者進行HLA-B27檢測成為臨床診斷與鑒別診斷AS的重要輔助手段[2-5]。

2007年9 月～2011年2月筆者對來我院就診的早中期疑似AS患者進行了HLA-B27的檢測，采用磁性酶聯(lián)免疫分析試劑盒和流式細胞儀兩種檢測方法分別進行檢測，并對這兩種檢測方法的敏感性、特異性和適用性進行比較和分析，為臨床實驗室選擇合適的HLA-B27檢測方法提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

361例早中期AS疑似患者均來源于2007年9月～2011年2月我院門診和住院患者，其中，男260例，女101例，男女比例約為2.6∶1；年齡6～75歲。所有患者檢測前均未接受柳氮磺胺嘧啶、甲氨蝶呤和益賽普等藥物的治療。

1.2 診斷標準

參照1984年修訂的紐約標準[6]。臨床標準：①下腰背痛至少持續(xù)3個月，疼痛隨活動改善，但休息不減輕；②腰椎在前后和側(cè)屈方向活動受限；③胸廓擴展范圍小于同年齡和性別的正常值。放射學標準：雙側(cè)骶髂關(guān)節(jié)炎Ⅱ～Ⅳ 級，或單側(cè)骶髂關(guān)節(jié)炎Ⅲ～Ⅳ級。如果患者符合放射學標準并分別附加①～③條中的任何1條臨床標準可確診為AS。排除標準：①晚期強直性脊柱炎患者（X線顯示關(guān)節(jié)出現(xiàn)骨性融合）；②惡性腫瘤患者；③妊娠期或哺乳期女性患者；④精神病患者。最后確診AS患者151例，排除AS患者210例。

1.3 標本準備

患者晨起空腹抽取靜脈血4 ml分裝在兩支美國BD公司專用EDTA抗凝管中，每管約 2 ml，編號并注明性別、年齡。24 h內(nèi)分別用于磁珠酶聯(lián)免疫分析和流式細胞儀檢測。

1.4 試劑與方法

1.4.1 磁珠酶聯(lián)免疫分析法 采用美國Goldsign公司的HLAB27抗原磁酶免試劑盒，嚴格按試劑盒說明書進行操作，以國產(chǎn)KHB st-360酶免疫檢測儀，在主波長450 nm、副波長630 nm下讀取其吸光度值（OD），OD＜0.7判定為結(jié)果陰性，OD≥0.7判定為結(jié)果陽性。

1.4.2 流式細胞儀檢測 采用美國BD公司的FACSCalibur流式細胞儀，HLA-B27試劑盒采用BD公司專用試劑盒，嚴格按試劑盒說明書進行操作，并采用其專用軟件進行樣品分析和結(jié)果計算，結(jié)果與定界值（decision maker）進行比較，大于或等于定界值判斷為陽性，否則為陰性。

1.5 數(shù)據(jù)分析方法

敏感性=真陽性/（真陽性+假陰性），特異性=真陰性/（真陰性+假陰性），陽性預(yù)測價值=真陽性/（真陽性+假陽性），陰性預(yù)測值=真陰性/（真陰性+假陰性）。

1.6 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)按要求輸入SPSS 11.5統(tǒng)計軟件表格進行計算、繪圖和數(shù)據(jù)統(tǒng)計，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

以臨床確診AS病例為標準，兩種檢測方法的結(jié)果見表1。流式細胞術(shù)檢測148例陽性患者中有2例磁性酶聯(lián)免疫法檢測為陰性，其余檢測結(jié)果相同，兩法結(jié)果符合率為98.0%，兩種檢測方法比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表1 兩種檢測方法的檢測結(jié)果（例）

表2 兩種檢測方法比較（%）

3 討論

臨床研究顯示，AS主要侵害青壯年，對青壯年（特別是男性）勞動力身體健康的危害很大。由于最初起病隱匿，病程進展緩慢，早期癥狀與腰椎間盤突出癥、骶髂關(guān)節(jié)炎、腰背肌筋膜炎等相似，初發(fā)者在X線片上沒有骶髂關(guān)節(jié)炎的明確表現(xiàn)，因此在臨床診斷中容易誤診和漏診，延誤患者的早期治療，導致患者出現(xiàn)中、晚期不可逆癥狀，最終發(fā)生關(guān)節(jié)強直甚至致殘。同時，賴建銘等[7]通過對AS家系調(diào)查發(fā)現(xiàn)，HLAB27陽性的幼年強直性脊柱炎患者中69%有脊柱關(guān)節(jié)病家族史，其中90%為一級親屬，說明AS有明顯的家族聚集性。AS早期診斷的研究方向，應(yīng)該是盡可能在肯定的放射學骶髂關(guān)節(jié)炎出現(xiàn)之前進行診斷[8]。因此，HLA-B27實驗室篩查對AS患者的早期診斷和控制住病情的進展、減輕畸形、維持和改善功能，具有相當重要的意義。

實驗研究已證實流式細胞術(shù)是臨床檢測HLA-B27抗原表達的理想方法[9-11]。但由于流式細胞儀和其耗材價格昂貴，人員需要專門培訓后才能上崗，因而只適合在大型醫(yī)院使用，不適合在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。

磁性酶免疫分析法是近年推出用于檢測HLA-B27的新方法[12]，利用免疫磁珠技術(shù)和ELISA法相結(jié)合，通過經(jīng)HLAB27抗體包被的磁珠分離全血中帶有HLA-B27抗原的白細胞，經(jīng)酶底物液顯色而測定其結(jié)果。實驗表明，使用磁性酶疫分析法與使用流式細胞儀檢測的結(jié)果符合率很高，兩種方法的陽性預(yù)測價值和陰性預(yù)測價值差異無統(tǒng)計學意義，磁性酶免疫分析法還具有較高的敏感性和特異性。同時由于此法具有操作簡便、反應(yīng)時間短（1 h內(nèi)即可完成）、標本用量少（僅需抗凝全血50 μl）、結(jié)果穩(wěn)定客觀易判斷（通過酶聯(lián)免疫檢測儀判讀結(jié)果）、不需特殊設(shè)備、影響因素少、不需要細胞、價格合理、適合批量測定等優(yōu)點，因而對基層醫(yī)院來說，磁性酶免疫分析法是適合AS患者早期診斷和鑒別診斷的一種實用而可靠的檢測方法，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

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