鄭曉冰 趙質(zhì)創(chuàng) 肖曉檳

(汕頭市質(zhì)量計量監(jiān)督檢測所，汕頭 515041)

富馬酸二甲酯(Dimethyl fumarate,簡稱DMF)，又稱反丁烯二酸二甲酯，俗稱霉克星，為白色片狀或粉末狀結(jié)晶，易升華，微溶于水，易溶于乙酸乙酯、氯仿、乙腈、丙酮和醇類，對光熱較穩(wěn)定。富馬酸二甲酯是美國20世紀(jì)80年代開發(fā)出來的一種新型防霉劑，對許多霉菌有特殊的抑制效果，且具有抗真菌能力，廣泛應(yīng)用于食品、飲料、飼料、中藥材、化妝品、魚、肉、蔬菜、水果等防霉、防腐、防蟲、保鮮中。但是富馬酸二甲酯對皮膚產(chǎn)生過敏性傷害(黏膜刺激)，長期接觸會發(fā)生皮膚過敏甚至潰爛，經(jīng)食道吸入可能會對人體腸道、內(nèi)臟產(chǎn)生腐蝕性損害，特別是對兒童的成長發(fā)育造成極大傷害[1]。2009年1月29日歐盟成員國通過了“保證含有富馬酸二甲酯的消費品不會投放歐洲市場”的決議草案，該決議于2009年5月1日正式生效。草案明確規(guī)定，如果消費品或其部件中富馬酸二甲酯的含量超過了0.1 mg/kg，或者產(chǎn)品本身已聲明其富馬酸二甲酯的含量，就將被認(rèn)定為“含有富馬酸二甲酯”的產(chǎn)品而禁止進(jìn)入歐盟市場流通和銷售。我國禁止在食品中添加富馬酸二甲酯作為防腐保鮮劑。目前文獻(xiàn)報道富馬酸二甲酯的常用檢測方法有GC/FID[2，3]、GC/MS[4，5]和HPLC[6]，其中GC/FID和GC/MS方法的檢測限為25 mg/kg，大大超過了歐盟的限量，已經(jīng)不能滿足出口食品的檢測需求。我國關(guān)于食品中富馬酸二甲酯的檢驗標(biāo)準(zhǔn)，僅有農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 1723-2009采用HPLC方法[7]，在此標(biāo)準(zhǔn)中，前處理和流動相的配制相對較為麻煩。筆者以甲醇為提取溶劑，以甲醇-乙酸銨為流動相，實現(xiàn)食品中富馬酸二甲酯的簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確檢測。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent 1200型，配有二極管陣列檢測器(DAD)，美國Agilent公司；

超聲波水浴器：SK2200LHC型，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；

有機相濾膜(尼龍)：13 mm×0.45 μm，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；

甲醇：色譜純；

富馬酸二甲酯：純度不小于99.0%，250 mg，美國Sigma公司；

富馬酸二甲酯儲備液：稱取200 mg富馬酸二甲酯，用甲醇溶解后定容于100 mL的容量瓶中，配制成濃度為2 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，貯存于0～4℃冰箱中，使用時用甲醇稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；

乙酸銨溶液：1.55 g/L，準(zhǔn)確稱取1.55 g乙酸銨，用適量水溶解并定容至1 000 mL。

1.2 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱(250 mm×46 mm，5 μm)；流動相為甲醇-1.55 g/L乙酸銨溶液(體積比為55∶45)；流速：1.0 mL/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量為10 μL。

1.3 樣品前處理方法

稱取2.000～5.000 g粉碎的加標(biāo)面包樣品于50 mL帶刻度具塞比色管中，加入甲醇定容至50 mL，加塞混和后置于超聲波水浴中處理15 min，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后，進(jìn)樣測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長的選擇

取富馬酸二甲酯濃度為8 μg/mL的溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示富馬酸二甲酯在210 nm處有強吸收，故選擇檢測波長為210 nm。

2.2 流動相比例的選擇

改變流動相比例，分別對甲醇-1.55 g/L乙酸銨溶液按不同體積比(35∶65、70∶30、55∶45)進(jìn)行試驗。試驗結(jié)果表明，流動相為甲醇-1.55 g/L乙酸銨溶液體積比為55∶45時峰形對稱，效果最好。

2.3 樣品前處理方法的優(yōu)化

富馬酸二甲酯微溶于水，易溶于醇、醚、丙酮和氯仿，考慮到醚類與乙酸銨流動相不互溶，故分別采用甲醇、氨化甲醇、丙酮和氯仿作為提取溶劑對加標(biāo)樣品進(jìn)行前處理，測定其回收率，結(jié)果見表1。加標(biāo)回收試驗顯示4種溶劑均可較好地提取富馬酸二甲酯，均能滿足檢測要求，以甲醇作為提取溶劑，各組分提取效果最好，同時在液相色譜上也有很好地分離，故實驗選擇甲醇為提取溶劑。

表1 4種不同提取溶劑富馬酸二甲酯的回收率 %

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

將富馬酸二甲酯儲備液用甲醇稀釋配制成濃度為1、2、4、8、16 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.2色譜條件下進(jìn)行測定，對色譜峰面積x和對應(yīng)的富馬酸二甲酯濃度y進(jìn)行線性回歸，得線性方程為y=71 284.817x-5.937(r=0.999 87)。測定結(jié)果表明，在1～16 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈線性關(guān)系，符合定量要求。

2.5 回收試驗與精密度試驗

選取餅干、月餅、蛋糕、面包4類樣品，進(jìn)行3水平添加回收試驗，每個添加水平取6個平行樣，未加標(biāo)的面包樣品色譜圖和對應(yīng)的加標(biāo)色譜圖見圖1和圖2，回收試驗結(jié)果見表2。

圖1 未加標(biāo)的面包樣品色譜圖

圖2 加標(biāo)的面包樣品色譜圖

表2 回收試驗與精密度試驗結(jié)果 %

由表2可知，該方法回收率為85.3%～116.4%，回收率較高，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.54%～2.18%，精密度較好。準(zhǔn)確度和精密度符合富馬酸二甲酯的檢測要求。

2.6 檢出限

選取空白蛋糕樣品添加富馬酸二甲酯，將含量依次降低的富馬酸二甲酯加入到樣品中去，對每個濃度樣品測定3次，記錄每次測得S/N值，結(jié)果顯示，當(dāng)添加0.1 μg/g時，S/N=3.1，因此該方法檢出限為0.1 μg/g。檢出限達(dá)到了2009年1月歐盟草案關(guān)于富馬酸二甲酯規(guī)定的最低添加值，符合新的檢測要求。

3 結(jié)論

采用高效液相色譜法測定食品中的富馬酸二甲酯，具有靈敏度、精密度和準(zhǔn)確度較好的特點，滿足歐盟草案關(guān)于富馬酸二甲酯的檢測要求。與富馬酸二甲酯最新測定標(biāo)準(zhǔn)NY-T 1723-2009相比，本研究采用純甲醇提取樣品中的富馬酸二甲酯，相比標(biāo)準(zhǔn)用氨水甲醇溶液提取，前處理需要調(diào)節(jié)pH等步驟，更為簡便、快速，保證富馬酸二甲酯被最高效率地提取，且在液相色譜上有很好地分離，完全符合檢測要求；采用甲醇-1.55 g/L乙酸銨溶液(體積比為55∶45)作為流動相，相比NY-T 1723-2009的也更為簡便，無需添加帶正電荷的四丁基溴化銨，且峰形完好，峰的保留時間和重現(xiàn)性均良好。試驗證明該方法是一種準(zhǔn)確、方便地測定食品中富馬酸二甲酯的分析方法。

[1] 陳明，梁春穗，黃偉雄.廣式月餅中富馬酸二甲酯殘留量測定方法[J] .中國衛(wèi)生檢驗雜志，2001,11(1):48.

[2] 劉萬山，李青，楊大鵬，等.富馬酸二甲酯食品中殘留檢測方法的研究進(jìn)展[J].中國衛(wèi)生工程學(xué)，2007,6(4):250-251.

[3] DB 43/T 353-2007 食品中富馬酸二甲酯殘留量的測定[S].

[4] 闞周密，王建陽，王戲丹.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定食品中富馬酸二甲酯的含量[J].食品科學(xué)，2007,28(1):247-249.

[5] 曹華娟，馮家力，潘振球，等.食品中富馬酸二甲酯殘留量的GC-MS法測定[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007,12(1):173-174.

[6] 韓惠雯，黃菲菲，趙嘉胤，等.高效液相色譜法測定食品中的富馬酸二甲酯的研究[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009,25(3):72-74.

[7] NY/T 1723-2009 食品中富馬酸二甲酯的測定 高效液相色譜法[S].