(山東省疾病控制中心，濟(jì)南 250014)

五氯硝基苯(PCNB，Quintozene)是一種專(zhuān)用于種子、土壤消毒的有機(jī)氯殺菌劑,其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,高殘留性和脂溶性嚴(yán)重污染環(huán)境并危害人類(lèi)的健康。美國(guó)和日本對(duì)該農(nóng)藥在食品中殘留均規(guī)定了限量標(biāo)準(zhǔn)。歐盟規(guī)定中藥材中的最大殘留限量為0.6 mg/kg,中國(guó)為0.1 mg/kg。我國(guó)現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16341-1996[1]和GB/T 5009.136-2003[2]使用填充柱色譜分離五氯硝基苯，受六六六等組分干擾嚴(yán)重，現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.19-2008[3]使用凝膠柱層析法凈化樣液有操作繁瑣、成本高等問(wèn)題。筆者參照文獻(xiàn)[4-6]及利用現(xiàn)成的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法建立了保健食品、中藥材中的五氯硝基苯殘留分析的毛細(xì)管氣相色譜測(cè)定方法，并用此方法對(duì)2009年6月至2010年7月間部分保健食品及中藥材進(jìn)行了五氯硝基苯殘留分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：CP3800型，包括63Ni電子捕獲檢測(cè)器，STAR V6.2色譜工作站，美國(guó)Varian公司；

超聲波清洗儀：AS3120A型，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：SENCO-R型，上海申生科技有限公司；

高速均質(zhì)器：IKA-T18 BS型,德國(guó)IKA公司；

離心機(jī)：80-2型,上海醫(yī)療器械手術(shù)離心機(jī)廠；

正己烷：經(jīng)氣相色譜確認(rèn)符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求；

丙酮、異辛烷、無(wú)水硫酸鈉、氯化鈉：分析純；

濃硫酸：優(yōu)級(jí)純；

五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)品：含量大于99%，美國(guó)Accustandard公司；

五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取五氯硝基苯0.010 0 g，用異辛烷溶解，轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中并用異辛烷定容，得到濃度為100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將儲(chǔ)備液稀釋100倍，配成濃度為1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；

1.2 實(shí)驗(yàn)樣品

樣品為2009、2010年本實(shí)驗(yàn)室日常檢測(cè)的部分保健食品及中藥材，其中保健食品36份、中藥材20份。

1.3 樣品處理和樣液凈化

試樣處理:取試樣置于組織搗碎機(jī)杯中粉碎過(guò)380 μm(40目)篩，精密稱(chēng)取 5 g，加入正己烷30 mL，放置30 min后超聲提取10 min，過(guò)濾，濾液移入250 mL分液漏斗中，殘?jiān)谜和樘崛?次，每次15 mL，合并有機(jī)相液，加入20 g/L硫酸鈉水溶液50 mL，充分振搖，靜止分層，棄下層液水相。上層溶液通過(guò)無(wú)水硫酸鈉，濾于梨形瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮后定容至5.0 mL。

樣液凈化:準(zhǔn)確吸取樣品提取液5.0 mL，加入1.0 mL濃硫酸，振搖1 min，以2 500 r/min離心15 min，取上清液，供氣相色譜分析用。

1.4 色譜條件與色譜圖

色譜柱:HP-5型毛細(xì)柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm，美國(guó)安捷倫公司)；柱溫程序：初溫90℃保持2 min，以40℃/min升溫至170℃，保持1 min，以5℃/min升溫至230℃保持9 min；進(jìn)樣口溫度：260℃，檢測(cè)器溫度：300℃；載氣：高純氮，流量2.0 mL/min，尾吹28 mL/min；進(jìn)樣量為1.0 μL，分流不分流進(jìn)樣，分流比1∶100；保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量；組分峰保留時(shí)間9.36 min。五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖、檢出五氯硝基苯殘留樣品色譜圖分別見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 檢出五氯硝基苯殘留樣品色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱的選擇

本研究綜合了文獻(xiàn)[1-3，7]的技術(shù)特點(diǎn)，參照文獻(xiàn)[4-6],利用山東省疾病控制中心實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行的六六六和DDT農(nóng)藥殘留分析條件及弱極性毛細(xì)管柱HP-5與文獻(xiàn)[1，2]國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)使用的填充柱相比分離效率、排除雜質(zhì)干擾能力明顯提高,可解決五氯硝基苯與γ-666用填充柱難以分離的問(wèn)題。五氯硝基苯、六六六、滴滴涕農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)樣色譜圖見(jiàn)圖3。由圖3可知，HP-5毛細(xì)管柱能滿(mǎn)足同時(shí)檢測(cè)保健食品、中藥材中五氯硝基苯、六六六、DDT殘留的分析要求。

圖3 五氯硝基苯、六六六、滴滴涕農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

2.2 樣品處理、凈化方法選擇

基于五氯硝基苯不溶于水,溶于有機(jī)溶劑,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,不易揮發(fā)、氧化和分解,也不易受陽(yáng)光和酸堿影響的特點(diǎn),采用具有強(qiáng)氧化性的濃硫酸進(jìn)行凈化,以排除大量雜質(zhì)對(duì)檢測(cè)的影響，解決了文獻(xiàn)[3]使用的凝膠柱層析法凈化樣液操作繁瑣的問(wèn)題,同時(shí)節(jié)省了成本。用硫酸凈化在離心管中進(jìn)行，樣品損失少，凈化簡(jiǎn)便、高效。當(dāng)樣液成分復(fù)雜、顏色較深、色素和雜質(zhì)不易去除時(shí)可重復(fù)磺化一次。樣液曾嘗試用過(guò)Florisil硅藻土小柱凈化，回收率為89%～96.7%與硫酸處理相近，但因小柱成本較高、來(lái)源困難而棄用。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)與檢出限

精密稱(chēng)取一定量的五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)品，用異辛烷溶解并逐步稀釋成0.005、0.010、0.020、0.050、0.100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按1.4色譜條件分析，測(cè)定峰面積Y，對(duì)峰面積和五氯硝基苯濃度X進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得線(xiàn)性方程為Y=2 081.1X-1.58，r=0.999 6，線(xiàn)性范圍為0.005～0.10 μg/mL。以陰性樣品北沙參中添加五氯硝基苯0.005、0.002、0.001、0.000 6 mg/kg,按1.3方法提取、凈化，按1.4色譜條件進(jìn)樣分析。以取5 g樣品定容5 mL計(jì)，五氯硝基苯的檢出限為0.000 6 mg/kg(S/N=3)。

2.4 回收試驗(yàn)

采用標(biāo)準(zhǔn)添加法分別進(jìn)行回收試驗(yàn)。取適量陰性北沙參樣品加標(biāo)0.02 mg/kg和0.05 mg/kg兩個(gè)水平，混勻后稱(chēng)取5 g左右，按1.3提取、凈化,在1.4色譜條件下進(jìn)樣分析,計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

0.05 mg/kg和0.02 mg/kg兩水平回收率范圍分別為93.0%和94.5%。

2.5 精密度試驗(yàn)

取陰性樣品搗碎加標(biāo)配成濃度為0.020、0.10 mg/kg的樣品，混勻后取5 g左右，按1.3處理、凈化，按1.4條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 方法應(yīng)用

用本方法分別對(duì)2009年、2010年山東省內(nèi)日常檢測(cè)的部分保健食品及中藥材進(jìn)行五氯硝基苯殘留分析，56份樣品有10份檢出，五氯硝基苯殘留最高的一份樣品為人參海狗丸(0.066 mg/kg)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 部分保健食品及中藥材五氯硝基苯檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)語(yǔ)

毛細(xì)管氣相色譜法可對(duì)保健食品、中藥材中五氯硝基苯殘留進(jìn)行檢測(cè),其分析的科學(xué)性和可操作性均優(yōu)于國(guó)內(nèi)外現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法,體現(xiàn)了簡(jiǎn)便，高效，靈敏度高，準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，方法具有較高的實(shí)用價(jià)值。

[1] GB/T 16341-1996 食品中五氯硝基苯殘留量的測(cè)定[S].

[2] GB/T 5009.136-2003 植物性食品中五氯硝基苯殘留量的測(cè)定[S].

[3] GB/T 5009.19-2008 食品中有機(jī)氯農(nóng)藥多組分殘留量的測(cè)定[S].

[4] 李晶，李晶，董豐收，等.基質(zhì)固相分散萃取-氣相色譜法同時(shí)檢測(cè)人參中五氯硝基苯及其代謝物殘留[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2009,28(1):216-220.

[5] 宋家玉，李澤國(guó)，王大衛(wèi)，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定食品、中藥中的有機(jī)氯農(nóng)藥[J].化學(xué)分析計(jì)量，2006,15(6):8-10.

[6] 黃衛(wèi)平,唐紅芳，阮征.GC法檢測(cè)浙八味藥材中有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留[J].華西藥學(xué)雜志，2008,23(5)：590-591.

[7] GB/T 5009.146-2003 植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥多種殘留的測(cè)定[S].