劉長(zhǎng)勇 羅小玲 郝家勇 羅瑞峰

(農(nóng)業(yè)部食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，石河子 832000)

玉米面饅頭是時(shí)下較為流行的粗糧食品，深受廣大消費(fèi)者喜愛(ài)。據(jù)報(bào)道，一些地區(qū)不法商販為了牟利，在加工玉米面饅頭時(shí)，非法添加合成著色劑檸檬黃。人體食用過(guò)量的檸檬黃可造成危害[1-3]。測(cè)定檸檬黃的檢測(cè)方法主要有薄層色譜法、高效液相色譜、液相色譜-質(zhì)譜法、滴定法[4-6]，在這些方法中沒(méi)有說(shuō)明發(fā)酵面食制品饅頭中檸檬黃的測(cè)定方法，且國(guó)標(biāo)方法中聚酰胺粉難以將檸檬黃完全吸附，樣品回收率較低[3]。為此筆者做了多次實(shí)驗(yàn)建立了玉米面饅頭中檸檬黃含量的測(cè)定方法。該方法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確，可滿(mǎn)足檢測(cè)要求。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Waters 2695型，配Waters 2487型紫外檢測(cè)器，美國(guó)Waters公司；

甲醇：色譜純;

乙酸銨溶液：0.02 mol/L，稱(chēng)取乙酸銨0.770 8 g，加水定容至 500 mL，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，再用微波除氣泡后備用；

檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：1 000 μg/mL，準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥的檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)品0.100 0 g，加甲醇-乙酸銨(體積比18∶72)使之溶解，定容至100 mL，混勻；

檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)使用液：20 μg/mL，準(zhǔn)確吸取1 mL檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液加流動(dòng)相定容到50 mL，混勻。

1.2 色譜條件

色譜柱：Symmetry Shield RP18(3.9 mm×150 mm, 5 μm) ；柱溫：室溫；流動(dòng)相：甲醇-乙酸銨 (體積比18∶72)，流速為0.6 mL/ min；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm 。

1.3 樣品處理

稱(chēng)取制備好樣品5 g(準(zhǔn)確到0.01 g)于高型燒杯中，準(zhǔn)確加入50 mL流動(dòng)相，勻漿均質(zhì)2 min，保鮮膜封口超聲萃取10 min，使色素充分溶出，靜置沉淀，取上層提取液適量離心。取離心上清液過(guò) 0.45 μm濾膜。

1.4 測(cè)定方法

檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣量為4、8、12、16、20 μL，以檸檬黃濃度X為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性擬合。樣品提取液進(jìn)樣量為20 μL。外標(biāo)法保留時(shí)間定性，峰面積定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶劑、流動(dòng)相比例、樣品提取液的選擇

樣品溶液pH值過(guò)高或過(guò)低都會(huì)降低色譜柱使用壽命并對(duì)儀器流動(dòng)相通道有腐蝕作用[7]。試驗(yàn)證明，甲醇-乙酸銨(體積比18∶72)對(duì)檸檬黃的溶解性可滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求，且標(biāo)準(zhǔn)品的峰型和保留時(shí)間達(dá)到了理想的效果。選擇流動(dòng)相為樣品提取液直接提取目標(biāo)物上機(jī)測(cè)定，達(dá)到了雜質(zhì)與目標(biāo)組分的良好分離，且避免了提取液與流動(dòng)相成分不同可能造成的目標(biāo)物與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的差異，以便更好地定性。該法與國(guó)標(biāo)方法相比更省時(shí)、便捷，提高了工作效率。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

按1.4方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)圖1。檸檬黃的線(xiàn)性回歸方程為Y=1.79×105X-1.66×105，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 964。結(jié)果表明，檸檬黃在4～20 μg/mL濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，不排除適量延伸后仍表現(xiàn)出良好線(xiàn)性的可能。

2.3 精密度與加標(biāo)回收率

按1.2色譜條件對(duì)同一玉米面饅頭樣品平行測(cè)定7次，得出測(cè)定結(jié)果平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，見(jiàn)表1。結(jié)果表明，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于 5%，滿(mǎn)足分析化學(xué)要求。對(duì)不含目標(biāo)物樣品加標(biāo)，加標(biāo)量分別為0.05、0.10、0.20 μg/g，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表 2。由表2可見(jiàn)，回收率在95%～100%之間。

圖1 檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)液色譜圖

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=7)

表2 回收試驗(yàn)結(jié)果

2.4 樣品測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)點(diǎn)為4、8、12、16、 20 μL時(shí)，對(duì)樣品中目標(biāo)物含量在40～200 μg/g范圍內(nèi)，稱(chēng)樣量為5 g，樣品溶液測(cè)定濃度在曲線(xiàn)內(nèi)；當(dāng)樣品中目標(biāo)物含量在小于40 μg/g或大于200 μg/g時(shí)，可增減稱(chēng)樣量、減增定容體積或延伸曲線(xiàn)。樣品色譜圖見(jiàn)圖2。

圖2 樣品色譜圖

3 結(jié)語(yǔ)

在筆者實(shí)驗(yàn)室條件下，通過(guò)對(duì)樣品前處理、色譜條件選擇的探討，建立了高效液相色譜測(cè)定玉米面饅頭中檸檬黃的方法。本方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確，測(cè)定結(jié)果令人滿(mǎn)意。

[1] 丁呈華，曹豐璞，楊浩，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定梔子黃、檸檬黃和日落黃色素[J]. 許昌學(xué)院學(xué)報(bào), 2010,29(9)：101-102.

[2] 王冬妍，楊書(shū)寧.高效液相色譜法測(cè)定杏罐頭中的檸檬黃、日落黃[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2010,31(9)：134-135.

[3] 程小會(huì),鄧敬頌.液相色譜法測(cè)定果蔬汁中檸檬黃和日落黃方法優(yōu)化[J].化學(xué)分析計(jì)量, 2010,19(2)：70-71.

[4] GB/T 5009.35-2003 食品中合成著色劑的測(cè)定[S].

[5] SN/T 2105-2008 化妝品中檸檬黃和桔黃等乙酸銨溶性色素的測(cè)定方法[S].

[6] GB 4481.1-2010 食品添加劑檸檬黃[S].

[7] 陳偉東，王荔，孫冬梅.HPLC法測(cè)定肉制品中檸檬黃和胭脂紅含量[J].肉品衛(wèi)生，2000(3):13-14.