楊紹群, 許靜靜, 馬雪, 張善玉＊

(1.長白山生物資源與功能分子教育部重點實驗室(延邊大學),吉林延吉133002;2.延邊大學藥學院藥學系,吉林延吉133002)

關蒼術的TLC-GC-MS和GP-MSE-GC-MS鑒別

楊紹群1, 許靜靜2, 馬雪2, 張善玉1＊

(1.長白山生物資源與功能分子教育部重點實驗室(延邊大學),吉林延吉133002;2.延邊大學藥學院藥學系,吉林延吉133002)

利用薄層色譜-氣質聯(lián)用(TLC-GC-MS)和氣流吹掃微注射器萃取與氣質聯(lián)用(GP-MSE-GC-MS)技術對關蒼術藥材進行鑒別.結果顯示:關蒼術藥材在薄層色譜(TLC)比移值約為0.65處有1個特殊的黃色斑點,經 GC-MS分析,初步鑒定其主要成分為3,8-Dimethyl-4-(1-methylethylidene)-2,4,6,7,8,8a-hexahydro-5(1H)-azulenone(化合物a);關蒼術藥材與易混藥材茅蒼術和白術的 GP-MSE-GC-MS色譜圖比較,關蒼術成分中含有峰面積較大并有利于藥材鑒別的4個特殊峰,其中2個初步鑒定為化合物a和2-(3,7-Dimethyl-octa-2,6-dienyl)-4-methoxy-phenol(化合物b).實驗表明,GP-MSE-GC-MS方法比 TLC-GC-MS方法能夠提供更多的成分信息,且具有樣品用量少、操作簡便、精確度高等優(yōu)勢,是一種新的中藥材鑒別及其主要成分測定的技術.

關蒼術;薄層色譜鑒別;微液萃取;GC-MS

0 引言

關蒼術為多年生草本菊科植物關蒼術 (Atractylodesjaponicakoidz.exkitam)的干燥根,具有健脾燥濕、發(fā)汗解表、明目、祛風、辟穢的功效[1].在中國,以其揮發(fā)性含量低而視作白術偽品,而日本藥典(第15版)和韓國藥典(第9版)中將關蒼術作為白術使用.在朝鮮族民間也經常把關蒼術作為治療胃潰瘍、慢性胃炎及消化系統(tǒng)疾病的藥物[1].為了保護和開發(fā)利用民族藥材資源,不少科研工作者對其化學成分[2-5]和藥理學[6-9]等進行了研究,但對其鑒別方法的研究卻鮮有報道[10].薄層鑒別法具有操作簡便、成本低、快速等優(yōu)點,在1塊薄層板上可同時觀測到斑點的數(shù)量、色澤、位置、面積等多種信息,在中藥質量控制中得到廣泛應用;但 TLC的定性分析時,影響因素較多,專屬性較差.楊翠等最新開發(fā)的氣流吹掃微注射器萃取(GP-MSE-GC-MS)技術[11-12],可用于揮發(fā)性和半揮發(fā)性物質的分析鑒定.本實驗采用TLC-GC-MS和 GP-MSE-GC-MS法研究了關蒼術的鑒別方法,為提高關蒼術的質量控制和 GPMSE-GC-MS技術的推廣應用提供實驗基礎.

1 實驗部分

1.1 儀器

GC-MS 2010(日本島津公司),250 uL微型注射器(美國 HAMIL TON公司);超聲清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司);ME-101多功能微萃取儀(長白山生物資源與功能分子教育部重點實驗室(延邊大學)自制)[8].

1.2 實驗材料

關蒼術藥材(2009年末采集于吉林省延吉市,經延邊大學藥學院藥學系呂惠子副教授鑒定為Atractylodesjaponicakoidz.exkitam的根莖);茅蒼術(中國藥品生物制品鑒定所,批號:120932-200405);白術(中國藥品生物制品鑒定所,批號:120925-200708);高效硅膠 G板、高效硅膠 GF254薄層板(青島海洋化工廠);顯色劑(5%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液);其他試劑均為分析純.

2 實驗方法

2.1 TLC-GC-MS鑒別

2.1.1 TLC鑒別 精密稱取關蒼術藥材、茅蒼術和白術對照藥材粉末0.5 g,置于50m L具塞錐形瓶中,加正己烷5 m L,超聲提取30 min,靜置,濾過,即得供試液.

分別取各供試品溶液10 uL,分別點于同一高效硅膠 G薄層板上,以石油醚乙酸乙酯(體積比為10∶1)為展開劑展開;取出晾干,噴以5%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液,在105℃下烘烤至顯色清晰,日光下檢視.

2.1.2 GC-MS分析 精密吸取供試品溶液30 μL,條狀點樣于硅膠 G板上,在旁邊同時點關蒼術、蒼術和白術,展開條件同上;將關蒼術條狀點樣部分用干凈玻璃板蓋住后,顯色,檢視,標出特殊斑點位置;仔細刮取與特殊斑點對應處關蒼術特殊成分譜帶和沒有點樣的空白處硅膠 G,分別用正己烷溶解,過濾,按2.3分析條件下進行 GCMS分析.

2.2 GP-MSE-GC-MS鑒別

分別精密稱取關蒼術藥材、茅蒼術和白術對照藥材粉末5 mg,用ME-101多功能微萃取儀進行萃取.萃取劑為正己烷,萃取溫度為250℃,萃取時間為2min,氮氣流速為2m L/m in,冷凝溫度為-4℃.萃取液用正己烷定容至100μL,取2μL按2.3分析條件下進行 GC-MS測定.

2.3 GC-MS分析條件

DB-5 MS毛細石英柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),載氣為氦氣,進樣口溫度為280℃,進樣量為 2μL,不分流進樣,柱流速為 0.98 m L/min.升溫程序:45℃保持1 m in,4℃/min升至250℃,6℃/min升至280℃,保持5min.離子源為 EI,離子源溫度為200℃.

3 結果與討論

3.1 薄層色譜對關蒼術藥材的鑒別

精密稱取關蒼術藥材和茅蒼術、白術對照藥材粉末,按2.1.1方法試驗,結果關蒼術樣品在Rf值約為0.65處檢出特殊黃色斑點,斑點清晰、分離度好,而茅蒼術和白術對照藥材在對應處沒有明顯斑點.經 GC-MS分析,初步鑒定該黃色斑點的主要成分為3,8-Dimethyl-4-(1-methylethylidene)-2,4,6,7,8,8a-hexahydro-5(1H)-azulenone,見圖 1.

圖1 關蒼術藥材特殊斑點主要組分的質譜圖

3.2 GP-MSE-GC-MS技術對關蒼術藥材的鑒別

用 GP-MSE-GC-MS技術分析關蒼術、茅蒼術和白術對照藥材,發(fā)現(xiàn)關蒼術中有4個峰面積明顯高于茅蒼術和白術的成分.關蒼術、茅蒼術和白術中化合物a成分的峰面積積分值分別為:60 206 108、9 090 339和8 756 731;b成分為21 401 170、2 412 127和1 912 143;c成分為23 566 428、1 108 196和1 109 598;d成分為33 081 349、2 631 894和3 185 736.關蒼術的a,b,c和d的成分峰面積分別達到茅蒼術和白術的7倍、9倍、20倍和10倍以上.經初步鑒定,化合物a為3,8-Dimethyl-4-(1-methylethylidene)-2,4,6,7,8a-hexahydro-5(1H)-azulenon,b為2-(3,7-Dimethylocta-2,6-dienyl-4-methoxy-phenol,見圖 2.其中,化合物a成分與薄層鑒別中的特殊成分相一致.

圖2 關蒼術、茅蒼術和白術藥材的GP-MSE-GC-MS色譜圖

4 結論

蒼術、白術和關蒼術均為蒼術屬植物的根莖,是極易混淆的品種.由本實驗結果得出,關蒼術在TLC板中有1個穩(wěn)定的黃色斑點,在 GP-MSEGC-MS色譜圖譜中有4個峰面積較大的色譜峰,而在茅蒼術和白術中沒有或很少.通過 TLC-GCMS和 GP-MSE-GC-MS法鑒別,其特殊成分一致,兩種方法均可用于關蒼術藥材的鑒別,其中GP-MSE-GC-MS法因提供較多的特殊成分信息,能夠更好地把握關蒼術的整體質量,而且還具有樣品用量少、操作簡便、精確度高等優(yōu)勢,可推廣應用于植物藥材的鑒別中.研究結果還表明,利用TLC有利于蒼術、白術和關蒼術的初步鑒別,而GP-MSE-GC-MS有利于精細分析.

[1]吉林省中醫(yī)藥研究所.長白山植物藥志[M].長春:吉林人民出版社,1980:1140.

[2]金玉蘭,李景道,張永鶴,等.關蒼術極性化學成分的分離及結構鑒定[J].延邊醫(yī)學院學報,1992,15(1):37-38.

[3]吳學,韓榮弼,羅惠善,等.關蒼術化學成分的研究[J].延邊大學學報:自然科學版,2004,30(1):29-34.

[4]玄淑華,張善玉,樸惠善.氣相色譜-質譜法分析關蒼術化學成分[J].延邊大學醫(yī)學學報,2010,33(2):114-117.

[5]李英姬,樸惠善,宋成巖,等.毛細管氣相色譜/質譜法測定關蒼術中的揮發(fā)性成分[J].中國野生植物資源,2002,21(3):50-51.

[6]陳曉光,金正男,黃紅延.關蒼術乙酸乙酯提取物抗炎作用實驗研究[J].延邊大學醫(yī)學學報,1999,22(2):24.

[7]秦孝智,張紅英.關蒼術乙酸乙酯提取物對大鼠缺血再灌注損傷心肌保護作用的研究[J].中國藥房,2007,18(36):2806-2808.

[8]樸世浩,樸惠善,金德男,等.關蒼術正丁醇萃取物的抗?jié)冏饔醚芯縖J].中草藥,1996,27(7):410-412.

[9]劉男,張穎麗,張善玉.朝藥關蒼術提取物對無水乙醇致小鼠胃黏膜損傷的影響[J].中國民族醫(yī)藥雜志,2010(3):41-43.

[10]劉娟,馬克意.關蒼術根與根莖的鑒別[J].特產研究,2010(1):38-40.

[11]Yang Cui,Qiu Jinxue,Ren Chunyan,et al.Gas Flo wHeadspace Liquid Phase Microextraction[J].Journal of Chromatography A,2009,1216:7694-7699.

[12]Yang Cui,Piao Xiangfan,Qiu Jinxue,et al.Gas Purge Microsyringe Extraction fo r Quantitative Direct Gas Chromatographic-mass Spectrometric Analysis of Volatile and Semivolatile Chemicals[J].Journal of Chromatography A,2011,1218:1549-1555.

Identification of A tractylodes Japonica by TLC-GC-MSand GP-MSE-GC-MS

YANG Shao-qun1, XU Jing-jing2, MA Xue2, ZHANG Shan-yu1＊
(1.KeyLaboratoryofNaturalResourceoftheChangbaiMountain&FunctionalMolecules(YanbianUniversity),MinistryofEducation,Yanji133002,China;2.DepartmentofPharmacy,CollegeofPharmacy,YanbianUniversity,Yanji133002,China)

Identification ofAtractylodesjaponicaby thin layer chromatography(TLC)and Gas purgemicrosyringe extraction combined with gas chromatographic-mass spectrometric(GP-MSE-GC-MS)methods.Atractylodesjaponicahas a special yello wspot at 0.65 of the retardation factor on the thin layer chromatography,and it is further identified as(3,8-Dimethyl-4-(1-methylethylidene)-2,4,6,7,8,8 a-hexahydro-5(1H)-azulenone)(compound a)by GC-MS.Compared GP-MSE-GC-MS chromatogram sofAtractylodesjaponicawith the two adulterantsRhizomaatractylodiandAtractylodesmacrocephala,Atractylodesjaponicahas four special components,compound a and 2-(3,7-Dimethyl-octa-2,6-dienyl)-4-methoxy-phenol(compound b)are identified.The GP-MSE-GC-MSmethod not only p rovide more special ingredient information than TLC,but also has a small amount of sample,simple operation,high accuracy and other advantages.GP-MSE-GC-MS method will be a ne wtechnology fo r identification of traditional Chinese medicine and itsmain components.

Atractylodesjaponica;TLC;micro liquid extraction;GC-MS

R284.1

A

1004-4353(2011)02-0124-04

2011-04-27

＊通信作者:張善玉(1959—),女,研究員,研究方向為中藥質量標準研究.