王 偉,許 祺,杜秀芳,王春英,劉西哲,張小幸

(河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,河北石家莊 050017)

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定安神補(bǔ)腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量

王 偉,許 祺,杜秀芳,王春英,劉西哲,張小幸

(河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,河北石家莊 050017)

建立了同時(shí)測(cè)定安神補(bǔ)腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷含量的方法。采用高效液相色譜法(HPLC),迪馬DiamonsilTMC18色譜柱(4.5 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水為流動(dòng)相,梯度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm,流速為1.0 m L/min,柱溫為30℃。淫羊藿苷質(zhì)量濃度為1.07～9.63μg/m L范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.999 5);平均加樣回收率為102.2%,RSD為2.7%。二苯乙烯苷質(zhì)量濃度為10～90μg/m L時(shí)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.999 8);平均加樣回收率為99.72%,RSD為2.3%。該方法精密度高,重復(fù)性好,可用于安神補(bǔ)腦液的質(zhì)量控制。

安神補(bǔ)腦液;淫羊藿苷;二苯乙烯苷;高效液相色譜法

安神補(bǔ)腦液是由鹿茸、何首烏、干姜、甘草、大棗、淫羊藿苷6味中藥和維生素B1組成的復(fù)方制劑,具有生精補(bǔ)髓、增強(qiáng)腦力的功效,用于神經(jīng)衰弱、失眠、健忘、頭痛等癥的治療[1-2]。《中華人民共和國(guó)藥典》(2005年版)以淫羊藿苷含量作為安神補(bǔ)腦液的定量質(zhì)控指標(biāo),以二苯乙烯苷作為定性鑒別指標(biāo)[3]。相關(guān)文獻(xiàn)[4-6]也主要是以淫羊藿苷、大黃素、維生素B1等單一化學(xué)成分作為該藥的質(zhì)控指標(biāo)。為了能更有效地對(duì)安神補(bǔ)腦液進(jìn)行質(zhì)量控制,筆者把單一指標(biāo)定量控制提高到同時(shí)控制多個(gè)有效成分的含量,建立了用HPLC同時(shí)測(cè)定安神補(bǔ)腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷含量的方法。

1 儀器與材料

Agilent Technologies 1200 series高效液相色譜儀,DAD檢測(cè)器。

淫羊藿苷和二苯乙烯苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,批號(hào)分別為0737-9709和0844-200003,供含量測(cè)定用);乙腈(色譜純,美國(guó)迪馬公司提供);安神補(bǔ)腦液(吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司提供,批號(hào)分別為0808113,0806125,0902326);水為二次重蒸水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

迪馬DiamonsilTMC18色譜柱(4.5 mm×250 mm,5μm);乙腈-水為流動(dòng)相,梯度洗脫(0～10 m in,乙腈體積分?jǐn)?shù)為30%～50%;10～11 min,乙腈體積分?jǐn)?shù)為50%～80%;11～15 min,乙腈體積分?jǐn)?shù)為80%～100%;15～20 min,乙腈體積分?jǐn)?shù)為100%);流速為1.0 m L/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為350 nm;柱溫為30℃;進(jìn)樣量為25μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取淫羊藿苷和二苯乙烯苷對(duì)照品適量,加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為10.74μg/m L和100μg/m L的溶液,即得。

2.2.2 樣品溶液的制備

精密量取本品1 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至10 mL刻度線(xiàn),搖勻,離心(12 000 r/min)20 min,取上清液,即得。

2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

按處方量分別制備不含淫羊藿苷和何首烏藥材的陰性樣品,按2.2.2所述方法制成淫羊藿苷陰性對(duì)照溶液和何首烏陰性對(duì)照溶液進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明,在淫羊藿苷和二苯乙烯苷相應(yīng)的保留時(shí)間范圍內(nèi)無(wú)干擾色譜峰出現(xiàn)。HPLC色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系

精密量取淫羊藿苷和二苯乙烯苷對(duì)照品溶液適量,加甲醇制成含淫羊藿苷質(zhì)量濃度分別為1.07,3. 21,5.37,7.49,9.63μg/m L及二苯乙烯苷質(zhì)量濃度分別為10,30,50,70,90μg/m L的混合對(duì)照品溶液,搖勻。在上述色譜條件下,分別進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜圖,以對(duì)照品質(zhì)量濃度與其對(duì)應(yīng)的峰面積進(jìn)行線(xiàn)性回歸。淫羊藿苷的回歸方程為y=23 934 x+ 1.975 2,r=0.999 5,表明淫羊藿苷在1.07～9.63 μg/m L范圍內(nèi)與峰面積的線(xiàn)性關(guān)系良好;二苯乙烯苷的回歸方程為y=15 149x+131.7,r=0.999 8,表明二苯乙烯苷在10～90μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.5 回收率試驗(yàn)

精密量取含淫羊藿苷、二苯乙烯苷質(zhì)量濃度分別為62.2μg/m L和388μg/mL的樣品(批號(hào)為0808113)0.5 mL,置于10 mL量瓶中,分別加入10.74μg/mL的淫羊藿苷對(duì)照品溶液3.0 mL及100μg/mL的二苯乙烯苷對(duì)照品溶液2.0 m L。加甲醇稀釋到刻度,搖勻,離心分離(12 000 r/m in)20 m in。取上清液進(jìn)行測(cè)定,平行測(cè)定6次,計(jì)算加樣回收率。淫羊藿苷的平均加樣回收率為102.2%,RSD值為2.7%;二苯乙烯苷的平均加樣回收率為99.72%,RSD值為2.3%。

A—淫羊藿苷和二苯乙烯苷混合溶液;B—樣品溶液;C—樣品溶液加淫羊藿苷和二苯乙烯苷;D—淫羊藿苷陰性對(duì)照溶液;E—何首烏陰性對(duì)照溶液;1—二苯乙烯苷;2—淫羊藿苷

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一樣品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)得淫羊藿苷和二苯乙烯苷峰面積的RSD值分別為0.3%和0.4%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批(批號(hào)為0808113)樣品,按2.2.2所述方法平行制備6份溶液,測(cè)得峰面積,淫羊藿苷和二苯乙烯苷質(zhì)量濃度的RSD值分別為0.6%和0.9%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按2.2.2所述方法制備樣品溶液,分別放置0,1,2,4,6,8 h后進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算得淫羊藿苷和二苯乙烯苷質(zhì)量濃度的RSD值分別為1.1%和1.4%。結(jié)果表明,淫羊藿苷和二苯乙烯苷在樣品溶液中放置8 h穩(wěn)定。

3 樣品測(cè)定

取安神補(bǔ)腦液樣品3批(批號(hào)為0808113,0806125,0902326),分別計(jì)算樣品中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的質(zhì)量濃度。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 淫羊藿苷和二苯乙烯苷的質(zhì)量濃度(n=3)Tab.1 Contents of icariin and stilbene glycoside(n=3)

4 討 論

測(cè)定波長(zhǎng)選擇時(shí)發(fā)現(xiàn),淫羊藿苷和二苯乙烯苷的λmax分別在260 nm和320 nm處,但是在260 nm和320 nm下的色譜圖中二者對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處均有干擾峰存在。試驗(yàn)表明,在350 nm處2種組分均有良好吸收,且相應(yīng)在保留時(shí)間處無(wú)雜質(zhì)峰出現(xiàn),故選擇在350 nm處同時(shí)測(cè)定淫羊藿苷和二苯乙烯苷的質(zhì)量濃度。

樣品前處理采用直接甲醇稀釋、離心后測(cè)定的方法,避免了有可能使待測(cè)成分造成損失的提取和濃縮操作,簡(jiǎn)化了樣品處理過(guò)程,方便快速。結(jié)果表明,該方法靈敏度高,重現(xiàn)性好,能準(zhǔn)確測(cè)定安神補(bǔ)腦液中二苯乙烯苷和淫羊藿苷的質(zhì)量濃度,可用于評(píng)價(jià)該制劑的質(zhì)量。

[1] 魏海峰,葉翠飛,李春陽(yáng),等.安神補(bǔ)腦液對(duì)睡眠剝奪模型大鼠學(xué)習(xí)記憶及腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)的影響[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)(Chinese Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics),2006,11(11):1 230-1 232.

[2] 溫富春,許家潔,王玉紅,等.安神補(bǔ)腦液對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦內(nèi)蛋白質(zhì)合成的影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志(Chinese Journal of Information on Traditional Chinese Medicine),2007,14(8):30-31.

[3] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2005.

[4] 馮勝民,朱山寅.RP-HPLC測(cè)定安神補(bǔ)腦液中淫羊藿苷的含量[J].中國(guó)新藥雜志(Chinese New Drugs Journal),2006,15(7):544-575.

[5] 王傳祥,姜文凱,魏年美.安神補(bǔ)腦液中大黃素含量測(cè)定[J].山東醫(yī)藥工業(yè)(Shandong Medical Industry),2003,22(3):24-25.

[6] 梁麗梅,龐小雄.固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定安神補(bǔ)腦液中維生素B1的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)(Academic Journal of Guangdong College of Pharmacy),2006,22(2):149-173.

[7] 吳雪萍,孫鳳霞,蘇為科,等.截短側(cè)耳素的HPLC測(cè)定[J].河北科技大學(xué)學(xué)報(bào)(Journal of Hebei University of Science and Technology), 2008,29(1):30-32.

[8] 武 彤,李朝陽(yáng),李巧玲,等.三唑類(lèi)手性農(nóng)藥高效液相色譜分離的研究[J].河北科技大學(xué)學(xué)報(bào)(Journal of Hebei University of Science and Technology),2008,29(4):279-291.

Determination of icariin and stilbene glycoside in anshenbunaoye by HPLC

WANGWei,XU Qi,DU Xiu-fang,WANG Chun-ying,L IU Xi-zhe,ZHANG Xiao-xing
(School of Pharmacy,Hebei Medical University,Shijiazhuang Hebei 050017,China)

The method fo r simultaneously determining icariin and stilbene glycoside in anshenbunaoye was established.The method is based on the HPLC separation w ith DAD detection.The chromatography analysis was performed on D IKMA DiamonsilTMC18column(4.5 mm×250 mm,5μm)by gradient elution w ith acetonitrile and water at a flow-rate of 1.0 mL· min-1.Detection was done by spectrophotometry at 350 nm and the column temperature was 30℃.The linear range of icariin was 1.07～9.63μg·m L-1(r=0.999 5),and themean recovery was102.2%w ith RSD of 2.7%.The linear rangeof stilbene glycoside was 10～90μg·mL-1(r=0.999 8),and themean recovery was 99.72%w ith RSD of 2.3%.Themethod was accurate,reliable w ith good repeatability and can be used fo r the quality control of anshenbunaoye.

anshenbunaoye;icariin;stilbene glycoside;HPLC

R917

A

1008-1542(2010)05-0403-03

2010-04-26;

2010-05-27;責(zé)任編輯:張士瑩

河北省教育廳自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2009147)

王 偉(1972-),女,河北新河人,高級(jí)實(shí)驗(yàn)師,主要從事藥物分析方面的研究。

王春英副教授,E-mail:wangcy730301@163.com