盧 夢(mèng)

(長江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025)

楊文祥

(湖北省疾病預(yù)防控制中心，湖北 武漢 430079)

保健品欣源通膠囊安全性的初步評(píng)價(jià)

盧 夢(mèng)

(長江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025)

楊文祥

(湖北省疾病預(yù)防控制中心，湖北 武漢 430079)

采用小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、二項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)(小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn))和30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)，評(píng)價(jià)了欣源通膠囊作為保健品的安全性。結(jié)果表明，欣源通膠囊對(duì)2種性別的SPF級(jí)昆明種小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)，24 h 2次灌胃量達(dá)20.0 g/kgBW，2周觀察期內(nèi)動(dòng)物未見明顯中毒癥狀，亦無動(dòng)物死亡。按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)，該受試樣品屬無毒級(jí)；二項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)結(jié)果均為陰性。30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明受試樣品各劑量組對(duì)Wistar大鼠體重、進(jìn)食量、食物利用率、血液學(xué)、血液生化、臟器重量、臟/體比值以及病理組織學(xué)等指標(biāo)與正常對(duì)照組比較，均無顯著性差異，未發(fā)現(xiàn)該受試物有明顯的毒性作用?？梢姡涝赐z囊作為保健品是安全的，可以通過一、二階段的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)。

欣源通膠囊；安全性評(píng)價(jià)；保健品

欣源通膠囊是由某公司研制的內(nèi)容物為棕色粉末的一種保健品[1]，主要功能是提高缺氧耐受力[2]，主要適用于在高原、高山、高空、井下等缺氧環(huán)境工作或生活的人群[3]，也適用于在缺氧環(huán)境中短期工作或海拔高度一般在3 000 m以上旅游參觀的人員。為確定欣源通膠囊作為保健品的安全性，筆者對(duì)欣源通膠囊進(jìn)行了一、二階段的安全性評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料

受試欣源通膠囊來源于某藥業(yè)公司研制，先將受試樣品粉末用蒸餾水配制成相應(yīng)濃度的均勻混懸液，供試驗(yàn)用。SPF級(jí)昆明種小鼠、Wistar大鼠及飼料均由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(鄂)2003～0005。大、小鼠分別飼養(yǎng)于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心SPF級(jí)大、小鼠實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(鄂)2003～0014。動(dòng)物體重依各項(xiàng)試驗(yàn)要求而定，實(shí)驗(yàn)室溫度20～24 ℃，濕度40%～70%。

1.2 方法

(1)小鼠急性毒性試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[4]選用SPF級(jí)昆明種小鼠，體重為18～22 g，雌雄各10只，灌胃前16 h 動(dòng)物禁食不禁水，將先期配制好的濃度為0.5 g/mL的受試樣品充分搖勻后進(jìn)行灌胃，灌胃容量為0.2 mL/10 gBW，分2次進(jìn)行，間隔4 h，累計(jì)總劑量為20 g/kgBW。灌胃當(dāng)天連續(xù)觀察，以后每天觀察2次直至第14天，并記錄動(dòng)物中毒癥狀及死亡數(shù)，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)未死亡動(dòng)物。

(2)遺傳毒性試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[5]小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)：選用體重為25～30 g的昆明種小鼠，雌雄各25只，隨機(jī)分成5組， 每組雌雄各5只。設(shè)A組為陰性對(duì)照組、E組為環(huán)磷酰胺陽性對(duì)照組，小鼠灌胃劑量為40 mg/kgBW； B、C、D組為受試樣品組，受試樣品劑量分別為2.5、5.0、10.0 g/kgBW。受試樣品采用蒸餾水配制成0.125、 0.250、0.500 g/mL的濃度，環(huán)磷酰胺用蒸餾水配制成0.002 g/mL的濃度，各組小鼠灌胃容量均為0.2 mL/10 gBW，陰性對(duì)照組灌胃給予等容量蒸餾水。各試驗(yàn)組小鼠均采用30 h試驗(yàn)法，即2次給予受試物間隔24 h，于第2次給予受試物后6 h處死動(dòng)物，取股骨骨髓涂片，自然干燥后甲醇固定，Giemsa染色。每只動(dòng)物油鏡下觀察1 000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞(PCE)，記錄出現(xiàn)微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，其微核發(fā)生率以含微核的PCE千分率計(jì)，并用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；計(jì)數(shù)200個(gè)嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，同時(shí)計(jì)數(shù)成熟紅細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算PCE占紅細(xì)胞(RBC)總數(shù)的百分比[PCE個(gè)數(shù)/(PCE個(gè)數(shù)+成熟紅細(xì)胞個(gè)數(shù))]。

小鼠精子畸形試驗(yàn):參照文獻(xiàn)[6]選用體重為25～30 g的雄性昆明種小鼠25只，隨機(jī)分成5組，每組5只。設(shè)A組為陰性對(duì)照組，E組為環(huán)磷酰胺陽性對(duì)照組，小鼠灌胃劑量為40 mg/kgBW；B、C、D組為受試樣品組，受試樣品的劑量分別為2.5、5.0、10.0 g/kg BW。受試樣品采用蒸餾水配制成0.125、0.250、0.500 g/mL的濃度，環(huán)磷酰胺用蒸餾水配制成0.002 g/mL的濃度，按0.2 mL/10 gBW灌胃給予，陰性對(duì)照組小鼠灌胃給予等容量蒸餾水。各試驗(yàn)組小鼠均連續(xù)5 d給予相應(yīng)的受試物后再繼續(xù)喂養(yǎng)30 d。在首次給受試物后的第35天處死動(dòng)物，取兩側(cè)附睪置于0.5 mL生理鹽水中，用眼科剪將附睪縱向剪1～2刀，用4層擦鏡紙過濾后涂片，空氣干燥后，甲醇固定，再用1%伊紅染色。每只動(dòng)物高倍鏡下觀察1 000個(gè)精子，記錄畸形精子數(shù)，計(jì)算畸形精子發(fā)生率(以千分率計(jì))，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

(3)30 d喂養(yǎng)試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[4]選體重65～85 g Wistar大鼠共80只，雌雄各半，隨機(jī)分成1個(gè)陰性對(duì)照組和3個(gè)劑量組，每組雌雄各10只大鼠，飼養(yǎng)方法為單籠喂養(yǎng)。各組受試樣品劑量分別為0.0、1.5、3.0、6.0 g/kgBW(其中，低、中、高劑量組分別相當(dāng)于人群推薦日攝入量0.03 g/kgBW的50、100、200倍)。受試樣品先配制為0.1、0.2、0.4 g/mL的濃度，再按1.5 mL/100 gBW經(jīng)口灌胃給予，連續(xù)飼喂30 d。

試驗(yàn)前后測(cè)量體重、記錄進(jìn)食量，并計(jì)算總食物利用率，測(cè)量臟器重量，計(jì)算臟/體比值。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)定血紅蛋白(HB)，計(jì)數(shù)紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)，并測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶 (AST)、血清尿素氮(BUN)、總膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、肌酐(Cr)、血糖(GLu)、血清白蛋白(Alb)、總蛋白(TP)等指標(biāo)[7]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel 2003進(jìn)行處理，其中計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)法，并按動(dòng)物性別分別統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

在2周觀察期內(nèi)，動(dòng)物未見明顯中毒癥狀，亦無動(dòng)物死亡，按急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[4]評(píng)價(jià)，該受試樣品屬無毒級(jí)。

2.2 遺傳毒性試驗(yàn)

(1)小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 由表1可知，陽性對(duì)照組雌雄小鼠微核率與陰性對(duì)照組比較有極顯著差異(Plt;0.01)，而受試樣品各劑量組雌雄小鼠微核率與之比較均無顯著性差異(Pgt;0.05)，表明在本實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)，該受試樣品對(duì)骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性[5]。受試物各組未成熟紅細(xì)胞占紅細(xì)胞總數(shù)的比例(PCE/RBC總數(shù))均不少于陰性對(duì)照組的20%。

(2)小鼠精子畸形試驗(yàn) 由表2可知，陽性對(duì)照組小鼠精子畸形發(fā)生率與陰性對(duì)照組比較有極顯著差異(Plt;0.01),而受試樣品各劑量組與之比較均無顯著性差異(Pgt;0.05)，表明在本試驗(yàn)劑量范圍內(nèi),該受試樣品精子畸形試驗(yàn)結(jié)果為陰性[6]。

2.3 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

經(jīng)過30 d的飼喂，受試樣品各劑量組大鼠總食物利用率及增重與陰性對(duì)照組比較均無顯著性差異(Pgt;0.05，表3)。各劑量組大鼠血液常規(guī)指標(biāo),血清ALT、AST、BUN、TCH、TG、Cr、GLu、Alb、TP等與陰性對(duì)照組比較也均無顯著性差異(Pgt;0.05)，且均在正常值范圍內(nèi)(表4，表5)。各劑量組大鼠臟器重量及臟/體比值與對(duì)照組比較也無顯著性差異(表5)。

病理組織大體解剖肉眼可見，各劑量組雌雄性大鼠的心、肝、脾、腎、胃腸與正常對(duì)照組比較，其外觀顏色和臟器大小正常，均未見明顯滲出、增生、水腫、萎縮等病變。鏡檢查結(jié)果也表明，與對(duì)照組比較,各劑量組結(jié)果均在正常形態(tài)學(xué)范圍內(nèi),未見明顯中毒性病理改變。

表1 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果Table 1 Micronucleus test results of bone marrow cells in mice

注：**為與陰性對(duì)照組比較結(jié)果(Plt;0.01)，表2同。

表2 小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Sperm deformity test results of mice

表3 各組大鼠增重及總食物利用率Table 3 The weight increase and food utilization ratio of each rat group

3 小結(jié)

本研究結(jié)果表明，欣源通膠囊對(duì)2種性別的SPF級(jí)昆明種小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),累計(jì)2次灌胃劑量達(dá)20 g/kgBW(相當(dāng)于人群推薦日攝入量0.03 g/kgBW的667倍)，在14 d的觀察期內(nèi)動(dòng)物未見明顯中毒癥狀和死亡，依據(jù)急性毒性分級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,該受試樣品屬無毒級(jí)； 二項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)(小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和精子畸形試驗(yàn))結(jié)果均為陰性。將受試樣品按1.5、3.0、6.0 g/kg BW劑量(分別相當(dāng)于人群推薦日攝入量1.8 g/60 kgBW，即0.03 g/kgBW的50、100、200倍)對(duì)SPF級(jí)Wistar大鼠連續(xù)給予30 d，動(dòng)物未見明顯的中毒癥狀和死亡。受試樣品各劑量組大鼠體重、進(jìn)食量、食物利用率、血液學(xué)、血液生化、臟器重量、臟/體比值以及病理組織學(xué)等指標(biāo)與陰性對(duì)照組比較，均無顯著性差異，未發(fā)現(xiàn)該受試樣品有明顯的毒性作用。由此表明，欣源通膠囊作為保健食品是安全的[5],可以進(jìn)行進(jìn)一步的功能研究。

表4 各組大鼠血液常規(guī)檢測(cè)結(jié)果Table 4 The blood tests results of each rat group

表5 各組大鼠血液生化檢測(cè)結(jié)果(n=10)Table 5 The blood biochemical index of each rat group(n=10)

[1]鄭建仙.功能性食品[M].北京:中國輕工業(yè)出版社,1997.261～272.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[3]劉宏雁,趙 宏.性別和環(huán)境溫度對(duì)小鼠急性缺氧耐受性的影響[J].白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2000，26(2)：123～125.

[4]中華人民共和國衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范[M].北京:清華同方電子出版社,2003.

[5]GB15 193.5-94,骨髓微核試驗(yàn)[S]. 北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1995.

[6]GB15 193.7-94,小鼠精子畸形試驗(yàn)[S]. 北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1995.

[7]張之南.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)(第2版)[M].北京:科學(xué)出版社,1998.10～16.

[8]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB15193.1-94,食品安全性評(píng)價(jià)程序[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,1995.

2009-12-03

盧 夢(mèng)(1987-)，女，湖北恩施人，研究方向?yàn)閯?dòng)物醫(yī)學(xué).

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2010.01.017

R994.4

A

1673-1409(2010)01-S067-04