吳俊珠，金拓（1.大理學(xué)院藥學(xué)院，大理市671000；2.上海交通大學(xué)藥學(xué)院，上海市200240）

賴諾普利聚乙烯醇微粒的制備及其質(zhì)量評(píng)價(jià)Δ

吳俊珠1，2＊，金拓2#（1.大理學(xué)院藥學(xué)院，大理市671000；2.上海交通大學(xué)藥學(xué)院，上海市200240）

目的：制備賴諾普利聚乙烯醇微粒并評(píng)價(jià)其質(zhì)量。方法：以聚乙烯醇為載體，采用噴霧干燥法制備賴諾普利聚乙烯醇微粒?？疾熘苿┑男螒B(tài)、粒徑、跨度、載藥量、包封率和體外溶出度。結(jié)果：所制賴諾普利聚乙烯醇微粒為近球形，表面有孔，平均粒徑為17.29μm，跨度為0.88，載藥量為31.40%，包封率為94.20%，30min時(shí)體外累積溶出百分率達(dá)90%以上。結(jié)論：該制劑制備工藝簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)合格。

賴諾普利；聚乙烯醇；微粒；噴霧干燥法；制備；質(zhì)量評(píng)價(jià)

賴諾普利（Lisinopril，LIS）是第3代血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI），臨床用于高血壓和心力衰竭的治療。目前，心血管疾病的治療和二級(jí)預(yù)防常常需要多種藥物聯(lián)合使用[1]，但由此可致患者用藥的順應(yīng)性較差，而開發(fā)攜帶、使用方便的復(fù)方劑型可解決此問題。為使LIS與其它活性成分（尤其是液體魚油）制備復(fù)方制劑時(shí)有良好的穩(wěn)定性，筆者以理化性質(zhì)較穩(wěn)定、生物相容性好的聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol，PVA）為載體[2]制備LIS-PVA微粒（LIS-PVA-MP）。PVA-MP的制備有多種方法：以醋酸乙烯為原料，采用乳化-聚合-水解-交聯(lián)的方法制備交聯(lián)度不同雙層結(jié)構(gòu)的小球（PVA beads）[3，4]；或以PVA為原料，采用乳化-物理交聯(lián)法[2]以及乳化-化學(xué)交聯(lián)法[5]制備微球；或采用噴霧干燥法制備載藥微粒[6]。本研究中筆者采用噴霧干燥法制備LIS-PVA-MP，通過正交試驗(yàn)考查處方、工藝對(duì)載藥微粒粒徑、形態(tài)、載藥量、包封率的影響，并進(jìn)行體外溶出試驗(yàn)，為該復(fù)方制劑的研究提供基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

OPDT-8噴霧干燥機(jī)（上海大川原干燥設(shè)備有限公司）；2102PC型紫外可見分光光度計(jì)（美國Unico公司）；高效液相色譜（HPLC）儀，包括LC-10AT VP泵、SPD-10AVP紫外檢測(cè)器（日本島津公司）；pH S-3TC數(shù)顯pH計(jì)（上海天達(dá)儀器有限公司）；KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；S-2150型掃描電鏡（日本Hitachi公司）；CIS 100粒度粒形分析儀（荷蘭Ankersmid儀器有限公司）；RCZ-6B1型藥物溶出度儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）。

1.2 試藥

賴諾普利（批號(hào)：050912，純度：98.2%）及賴諾普利精制品（批號(hào)：050912，純度：99.91%）均由大洋化工有限公司提供；己烷磺酸鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，含量：≥98.0%）；PVA（Mr：13000～23000，醇解度：87%～89%；Mr：31000～50000，醇解度：87%～89%；Mr：85000～124000，醇解度：87%～89%）購自美國Aldrich公司；磷酸二氫鉀、磷酸、氫氧化鈉、鹽酸為分析純，液體石蠟為化學(xué)純，乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 分析方法建立

2.1.1 檢測(cè)波長的選擇。以0.1mol·L－1鹽酸（以下簡(jiǎn)稱溶劑）為溶劑，制備濃度為100μg·mL－1的LIS溶液及400μg·mL－1的PVA溶液，以溶劑為空白，在紫外可見分光光度計(jì)上200～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果LIS在215nm波長附近處有最大吸收峰，而PVA在此波長處幾乎無吸收，故選擇215nm為檢測(cè)波長。

2.1.2 色譜條件。色譜柱：Shim-Pack VP-ODS（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-pH 2.5磷酸鹽緩沖液（含0.0053mol·L－1己烷磺酸鈉）＝20∶80；流速：0.5mL·min－1；檢測(cè)波長：215nm ；柱溫：55℃；進(jìn)樣量：20μL。

2.1.3 系統(tǒng)適用性。在上述色譜條件下，以0.1mol·L－1鹽酸為溶劑，制備LIS精制品溶液、供試品溶液（按“2.3.4”項(xiàng)下方法制備），分別取上述2種溶液及空白樣品溶液（取微粒處方用量的PVA，按供試品溶液制備方法制備）各20μL進(jìn)樣，記錄色譜。結(jié)果，PVA對(duì)主藥測(cè)定無干擾。3種溶液色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.精制品溶液；B.供試品溶液；C.空白樣品溶液Fig 2 HPLC chromatographyA.reference substance solution；B.samples solution；C.blank sample solution

2.1.4 線性范圍與最低檢測(cè)限。精密稱定LIS精制品10mg，用溶劑約50mL溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，得精制品貯備液a。精密吸取50mL貯備液a置于100mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，得貯備液b。分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL貯備液b置于10mL容量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，配制一系列不同濃度的LIS溶液。在上述色譜條件下，分別取20μL進(jìn)樣，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣3次，以LIS峰面積平均值（A）對(duì)其濃度（C）回歸，得回歸方程：A＝30217C+13774（r＝0.9998），結(jié)果，LIS檢測(cè)濃度在5～100μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為8ng（信噪比S/N＝3）。

2.1.5 精密度試驗(yàn)。日內(nèi)精密度：取20μg·mL－1精制品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，其峰面積RSD＝0.84%。日間精密度：3d內(nèi)分別制備20μg·mL－1精制品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，其峰面積RSD＝1.36%。

2.1.6 回收率試驗(yàn)。分別精密稱取LIS精制品10.0、11.0、10.4mg，按1∶3配比精密加入PVA，混勻，得3份模擬微粒，分別置于燒杯中，加入溶劑約50mL，60℃水浴加熱5min，完全溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻。再對(duì)每份溶液繼續(xù)分別精密吸取0.5、5.0mL置于10mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，共制備低、中、高濃度的9份溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果樣品的平均回收率為100.3%，RSD＝1.0%（n＝9），符合含量測(cè)定要求。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批號(hào)的LIS-PVA-MP，分別精密稱定5份，按“2.3.4”項(xiàng)下操作制備供試品溶液及對(duì)照液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算微粒含藥量及載藥量（%），結(jié)果微粒中LIS平均載藥量為39.62%，RSD＝1.56%。

2.1.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)。將供試品溶液置于冰箱中4℃保存，分別于0、2、6、8、12、24h 取樣，按上述色譜條件進(jìn)樣，6次所得峰面積的RSD＝0.66%，表明樣品溶液于4℃保存在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2 LIS-PVA-MP制備工藝

稱取PVA加入適量去離子水，水浴加熱溶解，放冷后加入LIS，攪拌使之溶解制備含藥料液，采用進(jìn)風(fēng)溫度185℃、出風(fēng)溫度95℃，旋風(fēng)分離器壓力0.65kPa，噴霧干燥法制備LISPVA-MP。

2.3 正交試驗(yàn)優(yōu)化LIS-PVA-MP的處方與工藝

2.3.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)。據(jù)初步試驗(yàn)結(jié)果，選擇對(duì)微粒粒徑、分布、形態(tài)、載藥量和包封率有影響的4個(gè)因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)表安排試驗(yàn)，因素及水平見表1。

表1 因素水平表Tab 1Factors and levels

2.3.2 粒徑及分布測(cè)定。取適量LIS-PVA-MP，加入約5mL輕質(zhì)液體石蠟，超聲波分散10min，用粒度粒形分析儀測(cè)定平均粒徑、D10、D50、D90，并由此計(jì)算跨度＝（D90－D10）/D50。

2.3.3 微粒形態(tài)的觀察。取適量LIS-PVA-MP分散于導(dǎo)電膠表面，噴金后，采用掃描電鏡觀察其形態(tài)。根據(jù)顆粒的圓整度、表面凹陷程度、粘連程度對(duì)各微粒評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：球形+++（3），近球形++（2），不規(guī)則形（0）；無凹陷++++（4），略有凹陷+++（3），凹陷較多++（2），不規(guī)則形（0）；顆粒無粘連+++（3），顆粒輕微粘連++（2），顆粒粘連較多（1），顆粒呈條狀絲狀（0）。

2.3.4 載藥量與包封率的測(cè)定。取LIS-PVA-MP適量精密稱定，置于燒杯中，加入溶劑約50mL，60℃水浴加熱5min，完全溶解，放冷，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，溶劑稀釋至刻度，搖勻，0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；同時(shí)配制LIS對(duì)照液，按上述色譜條件，分別取供試品溶液及對(duì)照液各20μL進(jìn)樣，記錄峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。按微粒中LIS的百分含量（%，W/W）計(jì)算載藥量，根據(jù)實(shí)際藥物含量與理論藥物含量比值的百分率計(jì)算包封率（EE%）。

2.3.5 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析。采用綜合評(píng)分法優(yōu)化處方、工藝，按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：S1＝（10/平均粒徑）×2，S2＝（2/跨度）×2，S3＝（載藥量/10）×2，S4＝（包封率/10）×2，S5＝形態(tài)評(píng)分×2，Y＝S1+S2+S3+S4+S5。正交試驗(yàn)的9次試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of orthogonal test

以A、B、C、D因素分別為自變量X1、X2、X3、X4，以Y為因變量，采用Excel電子表格進(jìn)行多元曲線回歸，得回歸方程：Y＝－29.876+0.00031959X1+127.09X2－ 1.9436X3+1.5712X4（r＝0.9355），標(biāo)準(zhǔn)誤差S＝2.4403，F(xiàn)＝7.0087＞F0.05（4，4）＝6.3882，回歸具有顯著性（α＝0.05）。

根據(jù)回歸方程，當(dāng)X1取31000、X2取0.05、X3取0.33（1∶3）、X4取40時(shí)，總分Y最高，即A2B3C3D3。然而，考慮到實(shí)際的試驗(yàn)中，料液中PVA的濃度不宜太高，否則制得的微粒易發(fā)生粘連，LIS-PVA投料比也不宜取最小，否則載藥量過小。因此，根據(jù)實(shí)際情況，本試驗(yàn)中取A2B2C2D3為優(yōu)化結(jié)果。

2.3.6 優(yōu)化條件驗(yàn)證。按A2B2C2D3條件制備3批微粒，分別測(cè)定粒徑、跨度、粒徑分布，考查微粒形態(tài)（結(jié)果評(píng)為9分），并測(cè)定載藥量與包封率，相關(guān)結(jié)果見表3、圖2、圖3。

表3 3批微粒各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果Tab 3 Index determination of 3batches of LIS-PVA-MP

圖2 微粒掃描電鏡圖（×1000）Fig 2 Scanning electron micrograph（×1000）

圖3 微粒的粒徑分布圖Fig 3 Distribution of particle size of LIS-PVA-MP

由圖2可見，LIS-PVA-MP為近球形，表面有孔、略有凹陷。按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為驗(yàn)證試驗(yàn)的產(chǎn)品微粒打分，結(jié)果Y＝48.82。將驗(yàn)證試驗(yàn)的自變量代入回歸方程，可求得預(yù)測(cè)值y＝45.72，預(yù)測(cè)范圍為 y±U0.05×S，查表U0.05＝1.960，預(yù)測(cè)范圍為（40.94，50.50）。優(yōu)化后的實(shí)際得分為48.82，高于前9個(gè)試驗(yàn)號(hào)的得分，并在預(yù)測(cè)范圍內(nèi)，與預(yù)測(cè)值之間的偏差為6.78%。

2.4 LIS-PVA-MP體外溶出度考察

對(duì)驗(yàn)證試驗(yàn)制得的3批微粒，各稱取約相當(dāng)于LIS 10mg的微粒裝于膠囊殼中，放入沉降籃內(nèi)，根據(jù)《美國藥典》28版（簡(jiǎn)稱USP 28）[7]LIS片溶出度測(cè)定方法，分別在0、5、10、15、20、30、40、50、60、75min 時(shí)各取5mL，并向溶出杯內(nèi)補(bǔ)加溶出介質(zhì)5mL，采用“2.1.2”所述色譜條件測(cè)定，計(jì)算累積溶出百分率（n＝3），結(jié)果見圖4。

圖4 LIS-PVA-MP體外溶出曲線（n＝3）Fig 4 Dissolution curves of LIS-PVA-MP（n＝3）

圖4 表明，微粒15min時(shí)溶出50%左右，30min溶出達(dá)90%以上，40min可達(dá)98%以上，其釋藥規(guī)律符合Weibull方程：lnln[1/（1－F（t））]＝1.6841ln（t－1.05）－4.7517（r＝0.9990），T50＝14.57min，Td＝17.85min。

3 討論

3.1 色譜條件的確立

基于USP 28LIS片含量測(cè)定方法，以本文所述色譜系統(tǒng)，色譜柱為Shim-Pack VP-ODS，其他條件按USP 28進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果主峰拖尾嚴(yán)重，無法達(dá)到其規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。通過單因素考查，調(diào)整流動(dòng)相pH值、柱溫、流速，可獲得適宜保留時(shí)間，改善LIS的峰形和拖尾，這與Bouabdallah 和Kocijan等[8，9]的報(bào)道一致。最終確立了條件相對(duì)溫和的流動(dòng)相pH 2.5、柱溫55℃、流速0.5mL·min－1的色譜條件，理論塔板數(shù)按LIS計(jì)算為1903，拖尾因子為1.3，符合USP 28對(duì)該片劑的規(guī)定。

3.2 噴霧干燥法制備LIS-PVA-MP

根據(jù)PVA、LIS的性質(zhì)以及料液噴霧干燥的效果，確定進(jìn)風(fēng)溫度為185℃，出風(fēng)溫度為95℃。霧化器轉(zhuǎn)速對(duì)微粒形態(tài)、大小影響很大，其低于36Hz時(shí)，粒徑大、分布寬，微粒易發(fā)生粘連，故選擇在36～40Hz作進(jìn)一步考查。

通過單因素考查，采用醇解度為87%～89%，Mr為13000～23000、31000～50000、85000～124000的PVA制備LIS-PVA-MP，發(fā)現(xiàn)PVA Mr對(duì)微粒大小、形態(tài)影響較大，Mr為85000～124000的PVA含藥料液由于黏度大不能很好地被霧化，干燥過程中易形成絲狀、條狀物，故選擇的Mr為13000～23000、31000～50000采用正交試驗(yàn)作進(jìn)一步考查。PVA濃度對(duì)微粒大小、形態(tài)影響也較大，6%PVA料液所得微粒發(fā)生粘連，表面變形嚴(yán)重；此外隨濃度增大，載藥量、包封率略有增加，但趨勢(shì)并不顯著。投藥比對(duì)微粒載藥量、包封率有較大影響，隨投藥比增大，載藥量增大，但包封率降低。

由初步試驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)各主要因素的水平作適當(dāng)調(diào)整后進(jìn)一步安排了正交試驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)化。按優(yōu)化的參數(shù)制備LIS-PVA-MP，結(jié)果其粒徑和粒徑分布適當(dāng)，有比較滿意的載藥量、包封率及體外溶出速度，且制備工藝簡(jiǎn)單，重復(fù)性好。

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Preparation and Quality Evaluation of Lisinopril Polyvinyl Alcohol Particles

WU Jun-zhu（School of Pharmacy，Dali University，Dali 671000，China）
WU Jun-zhu，JIN Tuo（School of Pharmacy，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200240，China）

OBJECTIVE：To prepare lisinopril-loaded polyvinyl alcohol（PVA）particles（LIS-PVA-P）and establish its quality control method.METHODS：LIS-PVA-P was prepared by spray-drying process with PVA as carrier.The preparation was detected in terms of morphology，particle size，span，drug-loading capacity，encapsulation and in vitro dissolution.RESULTS：The preparation assumed sphere with porous surface.The average particle size was 17.29μm while drug-loading capacity 31.40%，encapsulation 94.20%，Span was 0.88，90%of the drug loads were released within 30min.CONCLUSION：The preparation process is simple，good in repeatability and qualified in quality.

Lisinopril；Polyvinyl alcohol；Particles；Spray-drying process；Preparation；Quality evaluation

R943；R972

A

1001-0408（2010）09-0825-04

2009-04-09

2009-09-25）