韓春來(lái)，李全錄，盧 旺

（北京市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，北京 100044）

1 藍(lán)舌病的病原及特點(diǎn)

藍(lán)舌病(Bl uet ongue，BT)是由呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬藍(lán)舌病病毒引起的經(jīng)媒介昆蟲(chóng)(如庫(kù)蠓、伊蚊等)傳播的動(dòng)物傳染病。染病牲畜主要為反芻動(dòng)物，病畜會(huì)出現(xiàn)高燒、黏膜水腫和糜爛等癥狀。該病致死率為20%至30%，目前尚無(wú)有效治療方法。迄今尚未發(fā)現(xiàn)藍(lán)舌病病毒對(duì)人類(lèi)有傳染性。

藍(lán)舌病原來(lái)屬于OIE A類(lèi)疫病，2005年OIE新動(dòng)物疾病名錄將藍(lán)舌病歸為多種動(dòng)物共患疫病，在我國(guó)藍(lán)舌病被列為一類(lèi)動(dòng)物傳染病。

2 近年來(lái)疫情流行情況

BTV分布史表明該病主要分布在北緯40度與南緯35度之間。目前，該病分布于全球大多數(shù)熱帶地區(qū),并散發(fā)于亞熱帶、溫帶地區(qū),成為名副其實(shí)的世界性危害的蟲(chóng)媒傳染?。譂h亮等，2008）。Aver y Br ewer等(1995年)在美國(guó)南部和西部通過(guò)分子流行病學(xué)研究提示血清型之間基因片段有自然重組現(xiàn)象。每隔10年BTV10型2和9片段同源序列發(fā)生置換,這就致使產(chǎn)生一種強(qiáng)毒株,引起疾病嚴(yán)重暴發(fā)。BTV在自然界中的抗原漂移現(xiàn)象已正式得到充分證實(shí)。

2.1 國(guó)際疫情狀況

BTV1：2001、2006 年在地中海地區(qū)流行。

BTV2：2000年在北非流行。

BTV4：1999年和2000年，大面積的流行發(fā)生在希臘，基因進(jìn)化樹(shù)分析表明其和塞浦路斯（CYP1969/01）、土耳其（TUR1978/01）的毒株相似。

BTV9：1998年首次分離于歐洲的土耳其。

BTV16：1999年首次分離于歐洲的土耳其。

1998到2006年,南歐流行的5個(gè)血清型(BTV1,2,4,9,16)僅局限于南歐。2006年以前,北歐沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)藍(lán)舌病病例。BTV8從2006年至2008年在歐洲大面積的流行。這些毒株至少是分九次經(jīng)過(guò)四條線路傳入，分別是：1）經(jīng)過(guò)土耳其或塞浦路斯進(jìn)入歐洲東部；2）從北非東部進(jìn)入意大利和地中海西部島嶼；3）從摩洛哥進(jìn)入西班牙和葡萄牙南部；4）通過(guò)未知渠道進(jìn)入西北歐，2006年8月,荷蘭首先報(bào)道了BTV8的病例，隨后在比利時(shí)、德國(guó)、盧森堡、法國(guó)流行,涉及2000頭反芻動(dòng)物，但具體傳播途徑尚不明確。2007年在丹麥、捷克首先出現(xiàn)BTV8病例。瑞士的首次BTV8臨床病例2007年10月發(fā)生在奶牛場(chǎng)；從10月到11月,又發(fā)生了4次病例。2007年9月，英國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生研究所對(duì)Ipswich1頭可疑癥狀的牛采樣進(jìn)行了PCR檢測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性，分子流行病學(xué)分析結(jié)果顯示，該毒株的基因序列最接近于1982年在尼日利亞分離出的一株病毒，該毒株(BTV8)與一般藍(lán)舌病毒的區(qū)別在于對(duì)牛的危害較大。2008年,BTV8在荷蘭、比利時(shí)、德國(guó)、盧森堡、法國(guó)、丹麥、捷克、美國(guó)、意大利、西班牙和瑞士的牛和羊中引起了快速?gòu)V泛的臨床病例，在法國(guó)尤其嚴(yán)重。2008年初至10月1日，增加了15000個(gè)新的病例。同時(shí)，其它亞型（BTV1、BTV6）也不斷被檢出。2008年初,采用ELISA和熒光PCR的方法在瑞士的臨床不發(fā)病的山羊中檢測(cè)到了藍(lán)舌病病毒。采用熒光PCR檢測(cè)方法從瑞士山羊血液RNA中克隆到了一種新的藍(lán)舌病病毒TOV（BTV25）,與以前的24個(gè)藍(lán)舌病病毒亞型之間的相似性為63-79%,既不同于2007年流行于北歐和英國(guó)的BTV8，也不同于流行于法國(guó)的BTV1。TOV不屬于典型的藍(lán)舌病毒，不引起山羊的臨床癥狀，是否在其它哺乳動(dòng)物也不引起臨床癥狀還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

2003-2008年世界各國(guó)上報(bào)OIE藍(lán)舌病病例中藍(lán)舌病病毒血清型見(jiàn)表1。

2.2 國(guó)內(nèi)疫情狀況

我國(guó)自1979年云南首次報(bào)道綿羊藍(lán)舌病，隨后湖北（1983）、安徽（1985）、四川（1988）、山西（1991）相繼報(bào)道本病。上世紀(jì)80年代在全國(guó)進(jìn)行的BT流行病學(xué)調(diào)查顯示，所檢29個(gè)省市均檢出了血清學(xué)陽(yáng)性病畜。先后從云南、湖北、四川、山西、新疆、內(nèi)蒙古等地自然感染羊體中分離獲得藍(lán)舌病毒10株，1996年從云南的4個(gè)監(jiān)控動(dòng)物群中分離獲得藍(lán)舌病毒101株。我國(guó)已分離到的這些病毒分屬 7 個(gè)血清型為 BTV1、2、3、4、12、15、16。1984年以來(lái)，應(yīng)用羊體交叉保護(hù)試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、蝕斑減少試驗(yàn)間接學(xué)凝試驗(yàn)進(jìn)行血清型定型研究，結(jié)果表明，中國(guó)動(dòng)物藍(lán)舌病主要血清型為BTV1和BTV16。

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中國(guó)動(dòng)物藍(lán)舌病的研究是始自1979年。據(jù)1979-1989年全國(guó)7省區(qū)抽樣調(diào)查結(jié)果表明，40314只羊瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和ELISA試驗(yàn)檢出血清學(xué)陽(yáng)性羊7406只，陽(yáng)性率18.37%;1998年全國(guó)26省區(qū)抽樣調(diào)查結(jié)果表明，164576頭牛瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)和ELISA試驗(yàn)檢出血清學(xué)陽(yáng)性牛12126頭，陽(yáng)性率7.37%。1987-1989年全國(guó)27個(gè)省區(qū)抽樣調(diào)查結(jié)果表明,276534只羊瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和ELISA試驗(yàn)檢出血清陽(yáng)性羊13093只,陽(yáng)性率4.73%。許建民等(1991年)首次確診并報(bào)道了黃河以北綿羊、綿羊暴發(fā)流行動(dòng)物藍(lán)舌病。研究發(fā)現(xiàn)在發(fā)病期間氣候寒冷，蚊蠓基本停止活動(dòng)，仍有本病流行。提示本病傳播，除蚊蠓以外還存在有其他傳播媒介的可能性，這與郭在君等人在內(nèi)蒙的研究結(jié)果一致，對(duì)廣大華北地區(qū)防治動(dòng)物藍(lán)舌病具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。王桂華等于1993、1994年連續(xù)對(duì)新疆某牧場(chǎng)的1個(gè)羊群進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查，結(jié)果綿羊感染率顯著低于山羊，但成年羊和羔羊的感染率無(wú)顯著差異。我國(guó)曾于2003年向OIE報(bào)告過(guò)（臺(tái)北）牛和羊的藍(lán)舌病，2004年7月、8月向OIE報(bào)告過(guò)山羊的藍(lán)舌病。楊蓮茹等（2008）的研究表明151只舍飼絨山羊藍(lán)舌病血清抗體陽(yáng)性率分別為21.9%；90只放養(yǎng)絨山羊藍(lán)舌病血清抗體為陰性，表明不同的飼養(yǎng)方式對(duì)該病的傳播有影響。

3 檢測(cè)技術(shù)和近年來(lái)藍(lán)舌病監(jiān)測(cè)情況

近年藍(lán)舌病在部分國(guó)家的頻頻暴發(fā)顯示。更多國(guó)家面臨該病的侵襲并呈擴(kuò)大趨勢(shì)，同時(shí)伴隨著新型的出現(xiàn)與傳播 BTV血清型眾多，各型之間交叉免疫性差。因此實(shí)施嚴(yán)格的感染監(jiān)測(cè)是控制該病輸入和輸出的一個(gè)重要措施。

目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《藍(lán)舌病診斷技術(shù)》（GB/T 18636-2002）和《藍(lán)舌病微量血清中和試驗(yàn)及病毒分離和鑒定方法》（GB/T180089-2000） 推薦的藍(lán)舌病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)包括病毒分離鑒定、間接免疫熒光和抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、RT-PCR和基因序列分析等抗原檢測(cè)方法，以及瓊脂凝膠擴(kuò)散、競(jìng)爭(zhēng)性ELISA、血清中和試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等抗體檢測(cè)方法。雞胚接種和細(xì)胞培養(yǎng)相結(jié)合是分離BTV最敏感的方法，該方法最大的缺點(diǎn)就是費(fèi)時(shí)，一般需2周-4周才能有結(jié)果。瓊脂凝膠擴(kuò)散操作簡(jiǎn)便、成本低，是最早得到廣泛推廣應(yīng)用的一種抗體檢測(cè)方法，也是迄今OIE推薦的國(guó)際貿(mào)易采用方法之一，其缺點(diǎn)是特異性和敏感性稍差。競(jìng)爭(zhēng)性ELISA是最敏感的BTV抗體檢測(cè)技術(shù)，它能將藍(lán)舌病與相關(guān)的疾病區(qū)別，是OIE推薦的國(guó)際貿(mào)易采用方法之一，其缺點(diǎn)是試劑不易獲得，因試驗(yàn)中需要所有可疑血清型的抗體，并且國(guó)際市場(chǎng)上商品化的試劑盒使用成本較高。

由于藍(lán)舌病血清多達(dá)24個(gè)，所以采用微量血清進(jìn)行血清中型特異抗體的檢測(cè)被愈來(lái)愈多的實(shí)驗(yàn)室所受；采用微量病毒中和試驗(yàn)進(jìn)行BTv血清型的鑒定均非常繁瑣和費(fèi)時(shí)，且要求的試驗(yàn)條件較高，需專(zhuān)業(yè)實(shí)驗(yàn)室才能完成。核酸檢測(cè)以其快速、特異等特點(diǎn)而成為病毒檢測(cè)的一個(gè)重要發(fā)展方向。采用RT-PCR和序列分析來(lái)進(jìn)行BTV檢測(cè)和鑒定已被愈來(lái)愈多的實(shí)驗(yàn)室所接受。采用巢式RT—PCR檢測(cè)血液和組織中的BTV已被OIE推薦為國(guó)際貿(mào)易采用方法，這是迄今為止OIE推薦用于國(guó)際貿(mào)易的少數(shù)幾個(gè)檢測(cè)特定病原的PCR方法之一，具有靈敏、特異和快速等優(yōu)點(diǎn)，一般一天內(nèi)就可獲得結(jié)果。

近年來(lái)，英國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生研究所藍(lán)舌病參考實(shí)驗(yàn)室致力于藍(lán)舌病病毒的分子生物學(xué)分型研究，將熒光PCR、ELISA、細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)應(yīng)用于2006年北非BTV1檢測(cè)，2006、2007年在北歐和英國(guó)檢測(cè)BTV8和2008年在荷蘭檢測(cè)BTV6，并且每年3月份在世界范圍內(nèi)舉辦藍(lán)舌病檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)班。

4 國(guó)內(nèi)外綜合防控技術(shù)體系的建立和應(yīng)用

我國(guó)以預(yù)防為主，配合種畜檢疫、凈化、限制疫點(diǎn)畜群流動(dòng)，蚊蠓季節(jié)搞好滅蠓，搞好環(huán)境消毒和畜群藥浴，加強(qiáng)免疫監(jiān)測(cè)和疫情監(jiān)控等綜合技術(shù)措施，可將病危害限制在最小范圍。雖然弱毒苗、滅活苗及重組苗都有血清型特異性，都被考慮用于藍(lán)舌病的預(yù)防，但只有弱毒苗已被商業(yè)化且在幾個(gè)國(guó)家被有效的使用。

目前，歐洲使用的藍(lán)舌病活疫苗有 BTV2、4、9、16，更加劇了病毒譜的復(fù)雜化。2008年2月27日，瑞士聯(lián)邦政府決定與各州政府及相關(guān)農(nóng)業(yè)部門(mén)一道，出資給全國(guó)牛羊接種藍(lán)舌病疫苗，預(yù)防此病蔓延。

2007年末，阿爾巴尼亞農(nóng)業(yè)食品消費(fèi)者保護(hù)部頒布了針對(duì)法國(guó)暴發(fā)藍(lán)舌病的保護(hù)部令：停止進(jìn)口來(lái)自（法國(guó)）大西洋岸比利牛斯地區(qū)的所有易染染藍(lán)舌病活反芻類(lèi)動(dòng)物物種及草食類(lèi)動(dòng)物、上述有關(guān)動(dòng)物的精液、胚胎、卵和源自上述動(dòng)物的病原材料及生物產(chǎn)品。

5 建議

歷史上我國(guó)主要存在的藍(lán)舌病病毒血清型是BTV1和BTV16，主要感染動(dòng)物是羊，涉及到牛的報(bào)道較少，從2005年至今我國(guó)沒(méi)有上報(bào)OIE藍(lán)舌病病例，也無(wú)BTV8病例的報(bào)道。結(jié)合國(guó)內(nèi)外藍(lán)舌病疫情和近年來(lái)我國(guó)藍(lán)舌病血清學(xué)調(diào)查結(jié)果，世界范圍內(nèi)BTV8的流行對(duì)我國(guó)造成了威脅，這種威脅已經(jīng)突破了傳統(tǒng)意義上的感染動(dòng)物-羊，在近年內(nèi)對(duì)我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)也造成了新的潛在的威脅。

根據(jù)法國(guó)和德國(guó)的經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)藍(lán)舌病的第一年，牛羊感染數(shù)量不會(huì)太多，但第二年感染數(shù)量就會(huì)大幅增加。因此，需要加強(qiáng)對(duì)藍(lán)舌病的警惕，加強(qiáng)對(duì)BTV8和BTV25等國(guó)際上流行但我國(guó)尚未發(fā)生的藍(lán)舌病毒的流行狀況、檢測(cè)技術(shù)儲(chǔ)備和疫苗篩選等方面的研究，從而盡快使用適合我國(guó)國(guó)情的藍(lán)舌病防控措施。

5.1 預(yù)防藍(lán)舌病的技術(shù)儲(chǔ)備措施

在瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)的基礎(chǔ)上，完善、優(yōu)化診斷、監(jiān)測(cè)技術(shù)，加強(qiáng)對(duì)疫苗的篩選和關(guān)注，以便在緊急情況下使用。

5.2 強(qiáng)化研究，示范推廣藍(lán)舌病綜合防控技術(shù)

近十年來(lái)，因動(dòng)物疫病防控重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到禽流感、口蹄疫等重大動(dòng)物疫病上，對(duì)藍(lán)舌病的立項(xiàng)支持較少，監(jiān)測(cè)相對(duì)較弱，急需強(qiáng)化經(jīng)常性監(jiān)控措施。

目前，BTV8型毒株在國(guó)際上的大流行已經(jīng)為我們敲響了警鐘，主動(dòng)研究這種流行趨勢(shì)、在檢測(cè)技術(shù)和防治措施上都有足夠的貯備很重要，加強(qiáng)對(duì)藍(lán)舌病病原分離、鑒定及和綜合防控技術(shù)的研究,堅(jiān)持以預(yù)防為主的防制技術(shù)控制藍(lán)舌病，以防范于未然。

5.3 加強(qiáng)藍(lán)舌病適當(dāng)動(dòng)物衛(wèi)生保護(hù)水平研究

世界各國(guó)尤其是北歐各國(guó)藍(lán)舌病的頻頻暴發(fā)，對(duì)我國(guó)藍(lán)舌病適當(dāng)動(dòng)物衛(wèi)生保護(hù)水平方面提出了新的研究課題，如何避免通過(guò)引進(jìn)動(dòng)物以及精液、胚胎/卵、生物制品等造成藍(lán)舌病毒的污染，引進(jìn)種用（乳用動(dòng)物）及其產(chǎn)品存在多大的風(fēng)險(xiǎn)，這些都是有價(jià)值的課題。

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