韓媛媛,趙燕燕,李月秋,杜光玲,白潔

(河北大學醫(yī)學實驗中心,河北保定 071000)

洛伐他汀膠囊質(zhì)量控制的高效液相色譜方法

韓媛媛,趙燕燕,李月秋,杜光玲,白潔

(河北大學醫(yī)學實驗中心,河北保定 071000)

利用高效液相色譜法(HPLC)建立洛伐他汀膠囊質(zhì)量控制方法.采用VP-ODS(150 mm×4.6 mm i.d)柱,流動相為V(甲醇)∶V(磷酸緩沖溶液(p H=4.0))=78∶22,流速1.0 mL/min,檢測波長238 nm,進樣體積10μL,柱溫為室溫.洛伐他汀在0.004～1.000 g/L內(nèi),峰面積與質(zhì)量濃度呈良好線性關系(r=0.999 9),平均回收率99.19%(n=9),方法精密度RSD為0.32%(n=6),最小檢出限3 ng.該方法簡單,準確,重現(xiàn)性好,可應用于洛伐他汀膠囊的質(zhì)量控制.

洛伐他汀膠囊;高效液相色譜法;質(zhì)量控制

洛伐他汀(lovastatin)是羥甲戊二酸單酰輔酶A(HM G-CoA)還原酶抑制劑[1],屬常見的降血脂藥物.而且隨著各方面研究開展,證實洛伐他汀除了有調(diào)脂作用外,還有許多非調(diào)脂作用[2].測定洛伐他汀的分析方法主要有紫外分光光度法(UV)[3-4]和HPLC法[5-7].HPLC方法穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,目前廣泛應用于藥物質(zhì)量控制領域[8-9].本研究建立的洛伐他汀膠囊HPLC測定方法,具有流動相體系簡單、分離度好、靈敏度高的特點,經(jīng)2005版藥典中規(guī)定的藥品質(zhì)量方法進行驗證,結果準確可靠,可用于洛伐他汀膠囊含量和有關物質(zhì)的同時測定以及質(zhì)量控制.

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

LC-10A Tvp高效液相色譜儀(日本島津公司),SPD-M 10vp檢測器,Class-vp工作站;洛伐他汀對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:100600-200301,純度為99.4%);洛伐他汀膠囊對照藥品(黑龍江肇東華富藥業(yè)有限責任公司,批號:040901);洛伐他汀膠囊樣品(實驗室自制,規(guī)格20 mg);甲醇(色譜純,天津康科德科技有限公司);其他試劑均為分析純.

1.2 色譜條件

色譜柱:Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6 mm i.d.);流動相:V(甲醇)∶V(磷酸緩沖溶液(p H=4.0))=78∶22;流速1.0 mL/min;進樣體積10μL;檢測波長238 nm;室溫測定.

1.3 溶液的制備

精密稱取洛伐他汀對照品適量,加流動相使溶解并制成每1 m L含洛伐他汀0.2 m g的溶液,作為對照品溶液;精密稱取洛伐他汀膠囊內(nèi)容物適量(相當于洛伐他汀20 m g),置100 m L量瓶中,加流動相約80 m L,振搖使溶解,用流動相稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液;按處方比例稱取模擬空白輔料適量,置10 m L容量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,濾過,作為空白對照溶液.

有關物質(zhì)測試液配制:取上述供試品溶液4 m L,在低溫加熱條件下,分別加入0.1 mo l/L NaOH或0.1 mo l/L HCl各1 m L放置1 h,用酸或堿中和后,用流動相稀釋至原體積,作為堿破壞和酸破壞樣品;量取供試品溶液4 m L,在100℃水浴中加熱0.5 h近干,用流動相稀釋至原體積,作為高溫破壞樣品;量取供試品溶液4 mL,加入質(zhì)量分數(shù)為30%雙氧水放置2 h后用流動相補充至原體積,作為氧化破壞樣品.

1.4 標準曲線的繪制

精密稱取對照品適量,用流動相制成0.004,0.04,0.1,0.2,0.6,1 g/L系列質(zhì)量濃度的溶液,按“1.2”色譜條件進樣測定,記錄峰面積,以峰面積對進樣量回歸,繪制標準曲線.

2 結果與分析

2.1 檢測波長的確定

分別稱取3批供試樣品、對照品以及按處方比例配制的模擬空白輔料適量,配制供試品溶液、對照溶液及空白輔料溶液,并在200～400 nm的波長內(nèi)進行紫外掃描.3批樣品均在230,238與246 nm處有紫外吸收,其中在238 nm處為最大吸收,與對照品測定結果一致.輔料在此掃描范圍內(nèi)沒有吸收,對方法無干擾.故選取238 nm做為檢測波長.

2.2 系統(tǒng)適用性實驗

對空白輔料溶液、對照品溶液、供試品溶液,按“1.2”色譜條件進行色譜分析,HPLC譜圖見圖1.結果表明,輔料對洛伐他汀膠囊含量測定無干擾.

2.3 方法專屬性實驗

分別對堿破壞、酸破壞、高溫破壞、氧化破壞有關物質(zhì)測試液按“1.2”色譜條件進行色譜分析,HPLC譜圖見圖2.由圖可知,在堿、酸、熱、氧化等破壞條件下得到的降解產(chǎn)物在該色譜條件下均能與洛伐他汀峰得到良好分離.結果表明,本文建立的HPLC法具有良好的專屬性.

圖1 系統(tǒng)適用性實驗色譜Fig.1 Chromatogram of system suitability

圖2 HPLC方法專屬性考察色譜Fig.2 Chromatogram sof the exclusion inspection of HPLCmethod

2.4 線性范圍與檢出限

按“1.4”繪制標準曲線,所得線性方程為y=3.012×107x+1.071×105,r=0.999 9.結果顯示:洛伐他汀在質(zhì)量濃度0.004～1.000 g/L內(nèi)與峰面積呈良好線性關系.

取洛伐他汀對照品適量,分別用流動相配制成系列濃度的溶液,進樣,按3倍信噪比計算檢測限,得到最低檢出限為3 ng.

2.5 精密度實驗

取按“1.3”制備的對照品溶液,照“1.2”色譜條件進行色譜分析,并記錄色譜峰面積,連續(xù)進樣6次,計算峰面積的RSD=0.32%,符合精密度實驗要求.

2.6 重復性實驗

按“1.3”方法分別配制供試品溶液6份,照色譜條件進行分析,并記錄洛伐他汀峰面積,其RSD=0.99%(n=6),結果表明測定方法重現(xiàn)性良好.

2.7 穩(wěn)定性實驗

按“1.3”方法配制供試品溶液,分別在0,2,4,8,12 h進樣,考察溶液的穩(wěn)定性.計算峰面積的RSD=0.074%(n=6),結果表明,在12 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定.

2.8 回收率實驗

精密稱取洛伐他汀對照品,按供試品溶液質(zhì)量濃度(0.2 mg/m L)的80%,100%和120%分別配制低、中、高3種質(zhì)量濃度的溶液各3份(A,B,C),其中每份中分別按比例加入一定量的輔料,照“1.2”色譜條件進樣測定,計算回收率,結果見表1.

表1 回收率實驗結果(n=9)Tab.1 Results of recovery test(n=9)

2.9 有關物質(zhì)測定

精密稱取洛伐他汀膠囊內(nèi)容物和洛伐他汀標準品適量,分別加流動相制成每1 mL中約含洛伐他汀0.2 m g的供試品溶液和每1 m L中約含洛伐他汀2μg的對照品溶液.照“1.2”色譜條件進樣20μL.供試品溶液的色譜圖中最大雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的30%,各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面積.結果見表2,表明:3批洛伐他汀膠囊的有關物質(zhì)測定結果符合以上相關規(guī)定.

2.10 樣品含量測定

對自制3批樣品及對照藥品按“1.3”方法配制供試品溶液,照“1.2”色譜條件進樣分析,洛伐他汀占標示量的質(zhì)量分數(shù)結果見表2.

表2 有關物質(zhì)和質(zhì)量分數(shù)測定結果Tab.2 Results of content and related substance determ ination

∑A雜代表各雜質(zhì)峰面積的和占對照溶液的主峰面積的百分數(shù);A最大雜質(zhì)代表最大雜質(zhì)峰面積占對照溶液主峰面積的百分數(shù).

3 結論

本研究應用HPLC法測定洛伐他汀膠囊的含量和有關物質(zhì),方法簡單可靠,重現(xiàn)性好,可作為洛伐他汀的檢測方法,用于洛伐他汀膠囊的質(zhì)量控制.通過對本實驗室自制洛伐他汀膠囊含量和有關物質(zhì)的檢查,結果均符合藥典相關規(guī)定,與市售對照藥品含量相近,且不同批號之間無明顯差異,穩(wěn)定性較好,可向藥廠推廣應用.

[1]張印俊.降血脂藥物的研究進展[J].國外醫(yī)藥抗生素分冊,2003,24(6):241-244.

[2]孔德玲.他汀類藥物非調(diào)脂現(xiàn)狀[J].天津藥學,2005,17(6):57-59.

[3]張建國,劉文華.紫外分光光度法測定洛伐他汀膠囊含量[J].中國生化藥物雜志,1999,20(3):152.

[4]張惠霞,李平,禹風英,等.紫外分光光度法測定洛伐他汀片的含量[J].藥物分析雜志,1999,19(1):60-61.

[5]馮建立,許振良,楊志和,等.洛伐他汀原料的質(zhì)量研究[J].中國藥房,2007,18(31):2450-2451.

[6]陳錫強.高效液相色譜法測定洛伐他汀膠囊的含量[J].中國藥業(yè),2006,15(17):40.

[7]郭瑞峰,郄冰冰,張西如,等.高效液相色譜法法測定洛伐他汀片劑的有關物質(zhì)[J].中國實用醫(yī)藥,2009,4(15):12-13.

[8]劉巖,王洪宇,王英鋒,等.HPLC-PDA法對中成藥養(yǎng)心生脈顆粒丹參素含量的測定[J].河北大學學報:自然科學版,2006,26(3):266-269.

[9]戚燕,楊慶云,吳松.HPLC法測定匹諾塞林含量及有關物質(zhì)[J].藥物分析雜志,2009,29(8):1297-1300.

(責任編輯:梁俊紅)

Quality Control of Lovastatin Capsule by HPLC

HAN Yuan-yuan,ZHAO Yan-yan,LIYue-qiu,DU Guang-ling,BAIJie
(Experimental Center of Medicine,Hebei University,Baoding 071000,China)

The quality contro l method was established by determinating the content and related substance of lovastatin capsule by HPLC.The VP-ODS(150 mm×4.6 mm i.d)co lum n was used and the mobile phase was consisted of V(methano l)∶V(p H=4.0 phosphate)=78∶22,the flow rate was 1.0 m L/min,the detective wavelength was238 nm,the injiection vo lum n was10μL,the column temperatu re w as room temperature.A good linearity(r=0.999 9)w as obtained in the concentration range of 0.004～1.000 g/L,and the average recovery of lovastatin was 99.19%(n=9).The method p recision was 0.32%(n=6),and the lowest examination limitswas3 ng.Themethod is simp le,accurate and rep roducible.It can be app lied fo r the quality control of lovastatin capsule.

lovastatin cap sule;HPLC;quality contro l

R 917

A

1000-1565(2010)06-0662-05

2010-02-20

河北省教育廳資助項目(2009315);河北省衛(wèi)生廳資助項目(20090570);河北省中醫(yī)藥管理局資助項目(2008072);保定市科技局科學研究與發(fā)展計劃項目(09ZF010)

韓媛媛(1980—),女,河北固安人,河北大學講師,主要從事色譜分析方向的研究.

趙燕燕(1960—),女,天津人,河北大學教授,主要從事將現(xiàn)代分離技術用于藥學、臨床、環(huán)境等方面的研究工作.