田建華,張素華

(山西省林業(yè)科學(xué)研究院,山西 太原 030012)

原花青素(procyanidins)為低聚黃烷化合物的總稱(chēng),由不同數(shù)目的黃烷-3-醇或黃烷-3,4-二醇聚合而成,該類(lèi)物質(zhì)通常能在熱酸作用下產(chǎn)生花青素(anthocyanidin),具有清除自由基、抗氧化、保護(hù)心血管、抗腫瘤、抗輻射、抗突變等作用。原花青素廣泛存在于各種植物 (如葡萄、山楂、蘋(píng)果、藍(lán)莓)的核、皮或種子中,在營(yíng)養(yǎng)保健品、化妝品、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛,目前國(guó)內(nèi)多以葡萄籽、松樹(shù)皮為原料提取原花青素。本文用鹽酸-香草醛比色法對(duì)油松針葉和樹(shù)皮中原花青素含量進(jìn)行了測(cè)定,以期為松針資源開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)所用油松針葉和樹(shù)皮均采自黑茶山,經(jīng)自然干燥后,備用。

儀器與試劑:721分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠(chǎng)制造),康氏電動(dòng)振蕩機(jī)(243次 /min,北京通縣醫(yī)療器械廠(chǎng)制造),植物粉碎機(jī)(飛利浦家電公司生產(chǎn)),兒茶素標(biāo)準(zhǔn)樣品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,純度 98%以上),鹽酸、香草醛、乙醇、甲醇均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥至質(zhì)量恒定的兒茶素標(biāo)準(zhǔn)樣品10 mg,加甲醇溶解并定容至 100 mL的容量瓶中,搖勻得到 0.100 g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 樣品溶液的制備

油松針葉樣品溶液:松樹(shù)針葉樣品干燥至質(zhì)量恒定,粉碎后過(guò) 80目篩,準(zhǔn)確稱(chēng)取針葉粉 1.000 g,加甲醇溶解,置振蕩機(jī)上振蕩 20 min,將萃取液放入離心機(jī)離心 20 min,倒出上清液。共萃取 3次,固液比分別為 1∶9,1∶8,1∶7,將 3次萃取液合并定容至25 m L容量瓶中,搖勻,備用。

油松樹(shù)皮樣品溶液:同上。

1.2.3 兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制方法

分別取上述質(zhì)量濃度為 0.100 g/L的兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.4 mL,0.8 m L,1.2 mL,1.6 mL,2.0 mL及3.0 m L于 6只比色管中,各加入 6 mL質(zhì)量濃度為40 g/L的香草醛-甲醇溶液和 3 m L濃鹽酸,搖勻。置于(20±1)°C溫度下避光反應(yīng) 15 h,于 500 nm處測(cè)吸光度,甲醇為空白參比,以?xún)翰杷刭|(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.2.4 精密度試驗(yàn)方法

1)批內(nèi)精密度:取油松針葉粉 1.000 g,按樣品溶液制備方法定容至 25 m L容量瓶中,取 2 mL萃取液稀釋至 25 mL制成測(cè)定液,在 1 d內(nèi)每隔 1 h測(cè)定 1次,共測(cè)定 6次。

2)批間精密度:將批內(nèi)測(cè)定液,每隔 1 d測(cè)定1次,連續(xù)測(cè)定 5 d。

1.2.5 加標(biāo)回收試驗(yàn)方法

精確稱(chēng)取油松針葉粉 3份,每份0.05 g,分別加入兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品1.0 mg,1.2 mg,1.4 mg,按樣品溶液制備方法制成測(cè)定液,設(shè) 2次重復(fù)。

1.2.6 樣品中原花青素含量測(cè)定方法

分別精確吸取油松針葉和油松樹(shù)皮的樣品溶液各 2 mL,稀釋至 25 m L容量瓶中,制成測(cè)定液,測(cè)其吸光度并計(jì)算原花青素的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。

圖1 兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

用最小二乘法進(jìn)行線(xiàn)性回歸,得兒茶素質(zhì)量濃度與吸光度之間的回歸方程(R2=0.999 9):

2.2 精密度試驗(yàn)

測(cè)得油松針葉樣品溶液批內(nèi)、批間吸光度分別見(jiàn)表1和表2。

表1 批內(nèi)精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2 批間精密度試驗(yàn)結(jié)果

批內(nèi)和批間精密度試驗(yàn)結(jié)果表明,所測(cè)得吸光度結(jié)果相近,原花青素含量差異不大,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差分別為3.2%和1.8%。批內(nèi)精密度試驗(yàn)結(jié)果顯示原花青素含量為(5.992 1±0.194 39)g/100 g;批間精密度試驗(yàn)結(jié)果顯示原花青素含量為(5.985 1±0.110 049)g/100 g,說(shuō)明測(cè)定方法穩(wěn)定性好,可以采用。

2.3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

由表3可看出加標(biāo)回收試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行 6次,結(jié)果差異不大,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為 2.8%,證明試驗(yàn)結(jié)果有效,加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果取 6次重復(fù)的均值,為(100.61±2.828 9)%,說(shuō)明加標(biāo)回收率高。

2.4 樣品測(cè)定

測(cè)定油松針葉和樹(shù)皮中原花青素吸光度,計(jì)算原花青素含量 ,結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 油松針葉和樹(shù)皮中原花青素的含量

由表4可看出,每100 g油松針葉和樹(shù)皮中原花青素的含量分別為 6.0 g和 3.91 g,針葉中原花青素的含量是樹(shù)皮中的1.53倍。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)表明,鹽酸-香草醛比色法測(cè)定油松針葉和樹(shù)皮中原花青素的含量,其方法準(zhǔn)確可靠,操作簡(jiǎn)單。同時(shí),由于原花青素易氧化,見(jiàn)光易分解。因此,在樣品處理及測(cè)定過(guò)程中應(yīng)注意保持避光,避免原花青素分解,以保證測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

目前,我國(guó)對(duì)于松樹(shù)針葉及樹(shù)皮的開(kāi)發(fā)主要為直接利用,對(duì)其深加工利用還處于起步階段,本研究結(jié)果為松樹(shù)針葉和樹(shù)皮中原花青素的開(kāi)發(fā)利用提供了理論依據(jù)。

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