朱 靖 博，遲 曉 君，李 麗

( 大連工業(yè)大學 生物與食品工程學院， 遼寧 大連 116034 )

0 引 言

以動脈粥樣硬化為主的心腦血管病因其具有“發(fā)病率高，死亡率高，致殘率高，復發(fā)率高”以及“并發(fā)癥多”的特點，被世界衛(wèi)生組織認定為危害人類健康的“頭號殺手”[1]。動脈粥樣硬化是與氧化脅迫、血管內壁功能障礙相關的炎癥性疾病[2]，其中，氧化脅迫在動脈粥樣硬化病理過程處于核心地位。丹參酚酸B具有極強的水溶性抗氧化能力和強大的鈣鐵離子螯合能力[3]，研究發(fā)現(xiàn)，其體外抗LDL氧化能力明顯優(yōu)于抗動脈粥樣硬化藥probucol(普羅布克)[4]。然而，到目前為止，丹酚酸B對動脈粥樣硬化的體內活性的研究均通過灌胃的給藥方式，無法避免口服藥物存在的生物利用度差的缺陷。本實驗應用丹酚酸B通過腹腔注射的干預方法，并以辛伐他汀作對照，以血液中高靈敏度C反應蛋白(hs-CRP)及膽固醇與高密度脂蛋白的比值(TC/HDL)聯(lián)合作為評價指標，觀察丹酚酸B對大鼠動脈粥樣硬化的影響，進一步探討其作用機制，旨在為動脈粥樣硬化的預防與治療提供新的方法。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 動物及飼料

SD大鼠，體重130～150 g，由大連醫(yī)科大學SPF實驗動物中心提供，動物許可證號為SCXK(遼)2008-002。

高脂飼料組成：10% 蛋黃粉，市售；5% 豬油，市售；0.2% 膽固醇，購自北京鴻潤寶順科技有限公司；0.5% 膽鹽，購自北京奧博星生物技術責任有限公司；84.3% 基礎飼料，大連醫(yī)科大學SPF實驗動物中心提供。

1.1.2 藥品及試劑

丹酚酸B(純度98%)由本實驗室提供；維生素D3購自上海通用藥業(yè)股份有限公司；辛伐他汀購自杭州默沙東制藥有限公司；血脂檢測試劑購自中生北控生物科技股份有限公司；大鼠血清hs-CRP檢測試劑，美國ADL公司原裝進口試劑。

1.1.3 儀 器

UV-2102 PC型紫外可見分光光度計，BIO-RAD酶聯(lián)免疫儀，TGL-16B離心機。

1.2 方 法

1.2.1 動物飼養(yǎng)及分組

SD大鼠60只，適應性喂養(yǎng)一周后，隨機分為以下6組(n=6)：

Ⅰ，正常對照組；Ⅱ，模型組；Ⅲ，低劑量藥物組[丹酚酸B：2 mg/(kg·d)]；Ⅳ，中劑量藥物組[丹酚酸B：12.5 mg/(kg·d)]；Ⅴ，高劑量藥物組[丹酚酸B：20 mg/(kg·d)]；Ⅵ，辛伐他汀組[辛伐他?。?0 mg/(kg·d)]。

1.2.2 模型制備及給藥

模型組、低劑量藥物組、中劑量藥物組、高劑量藥物組及辛伐他汀組均喂飼高脂飼料，同時于實驗開始時腹腔注射維生素D3(40萬U/kg體重)，每隔一天注射一次，共兩次。正常組喂飼普通飼料，同時腹腔注射生理鹽水做對照。

低劑量藥物組、中劑量藥物組、高劑量藥物組及辛伐他汀組從第5周開始每天注射不同劑量藥物；正常組與模型組注射等量生理鹽水作對照，直至實驗結束。

1.2.3 指標測定及方法

分別于實驗開始前，造模4周末，8周末，從眼眶取血，取血前禁食12 h。待血液自行凝固后離心分離血清。

參照相應試劑盒說明測定血清中各項指標。其中，膽固醇(TC)用酶比色法(CHOD-PAT法)檢測，高密度脂蛋白(HDL)用磷鎢酸-鎂沉淀法檢測，高靈敏度C反應蛋白(hs-CRP)用酶聯(lián)免疫法檢測。

1.2.4 統(tǒng)計學方法

用 SPSS 10.0軟件包進行統(tǒng)計學處理，數(shù)據(jù)用(x±s)表示，組內檢驗用T檢驗，組間檢驗用方差檢驗，P<0.05為差異在統(tǒng)計學上有顯著性意義。

2 結果與討論

2.1 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中膽固醇(TC)濃度的影響

由表1可見，喂飼高脂飼料及注射大劑量VD3后，丹酚酸B各藥物組，辛伐他汀組及模型組血液中膽固醇濃度具有升高的趨勢，4周末膽固醇濃度與開始時相比具有顯著性差異(*P<0.05)。經過藥物干預后各藥物組均能降低血液中膽固醇濃度，與藥物干預前相比具有顯著性差異(△P<0.05)。

表1 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中膽固醇濃度的影響

Tab.1 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on the concentration of blood total cholesterol

c(TC)/(mmol·L-1)開始4周末8周末對照組1.45±0.421.14±0.221.29±0.23丹酚酸B低劑量組1.84±0.302.86±0.63*1.37±0.30△丹酚酸B中劑量組1.26±0.402.88±0.72*1.53±0.18△丹酚酸B高劑量組1.73±0.212.44±0.60*1.42±0.26△辛伐他汀組1.93±0.322.48±0.66*1.52±0.26△模型組1.91±0.382.69±0.94*5.74±0.90注:飼養(yǎng)前后組內比較:4周末與開始比較,*P<0.05;8周末與4周末比較,△P<0.05。

2.2 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中高密度脂蛋白(HDL)濃度的影響

由表2可見，喂飼高脂飼料及注射大劑量VD3后，丹酚酸B中劑量藥物組，辛伐他汀組及模型組血液中高密度脂蛋白濃度有降低的趨勢，4周末丹酚酸B中劑量組，辛伐他汀組，模型組高密度脂蛋白濃度與開始時相比具有顯著性差異(*P<0.05)。經過藥物干預后各藥物組血液中高密度脂蛋白膽固醇濃度與藥物干預前相比無顯著性差異(△P>0.05)。

表2 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中高密度脂蛋白膽固醇(HDL)濃度的影響

Tab.2 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on the concentration of blood high density lipoprotein

c(HDL)/(mmol·L-1)開始4周末8周末對照組0.98±0.111.02±0.170.98±0.19丹酚酸B低劑量組1.17±0.261.05±0.500.97±0.19△丹酚酸B中劑量組1.22±0.271.01±0.23*0.95±0.20△丹酚酸B高劑量組1.29±0.401.01±0.210.99±0.18△辛伐他汀組1.58±0.251.00±0.26*0.96±0.20△模型組1.95±0.341.38±0.49*1.07±0.19注:飼養(yǎng)前后組內比較:4周末與開始時比較,*P<0.05; 8周末與4周末比較,△P>0.05。

2.3 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中TC/HDL的影響

由表3可見，喂飼高脂飼料及注射大劑量VD3后，丹酚酸B各藥物組，辛伐他汀組及模型組血液中TC/HDL具有升高的趨勢，4周末TC/HDL與開始時相比具有顯著性差異(*P<0.05)。經過藥物干預后各藥物組均能降低血液中TC/HDL，與藥物干預前相比具有顯著性差異(△P<0.05)。

2.4 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中高靈敏度C反應蛋白(hs-CRP)質量濃度的影響

由表4可見，喂飼高脂飼料及注射大劑量VD3后，丹酚酸B各藥物組，辛伐他汀組及模型組血液中hs-CRP均有升高的趨勢，4周末血液中hs-CRP質量濃度與開始時相比具有顯著性差異(*P<0.05)。經過藥物干預后各藥物組均能降低血液中hs-CRP質量濃度，與藥物干預前相比具有顯著性差異(△P<0.05)。

表3 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中n(TC)/n(HDL)的影響

Tab.3 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on then(TC)/n(HDL) of blood

n(TC)/n(HDL)開始4周末8周末對照組1.45±0.381.15±0.291.39±0.46丹酚酸B低劑量組1.59±0.363.32±1.81*1.43±0.26△丹酚酸B中劑量組1.79±0.453.02±1.18*1.66±0.28△丹酚酸B高劑量組1.48±0.402.47±0.89*1.47±0.32△辛伐他汀組1.25±0.272.62±0.94*1.64±0.42△模型組1.01±0.202.12±0.69*5.66±1.74注:飼養(yǎng)前后組內比較:4周末與開始時比較,*P<0.05;8周末與4周末比較,△P<0.05。

表4 丹酚酸B及辛伐他汀對血液中hs-CRP質量濃度的影響

Tab.4 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on the concentration of blood hs-CRP

ρ(hs-CRP)/(μg·mL-1)開始4周末8周末對照組0.02±0.010.02±0.010.02±0.01丹酚酸B低劑量組0.26±0.010.45±0.10*0.34±0.12△丹酚酸B中劑量組0.02±0..010.47±0.15*0.35±0.11△丹酚酸B高劑量組0.02±0.010.43±0.17*0.36±0.14△辛伐他汀組0.04±0.060.40±0.12*0.35±0.11△模型組0.02±0.010.41±0.11*0.40±0.11注:飼養(yǎng)前后組內比較:4周末與開始時比較,*P<0.05;8周末與4周末比較,△P<0.05

2.5 丹酚酸B抑制動脈粥樣硬化的量效關系及與辛伐他汀藥效對比

由表5可見，給予藥物干預后，對于血液中TC，HDL，TC/HDL以及hs-CRP等指標，丹酚酸B低劑量組、丹酚酸B中劑量組、丹酚酸B高劑量組各藥物組間進行比較均無顯著性差別(*P>0.05)，且丹酚酸B各藥物組與辛伐他汀組比較亦無顯著性差別(△P>0.05)。

表5 丹酚酸B抑制動脈粥樣硬化的量效關系及與辛伐他汀藥效對比

Tab.5 Dose-effect relationship of the salvianolic acid B inhibiting atherosclerosis and the comparison of efficacy between salvianolic acid B and simvastatin

c(TC)/(mmol·L-1)c(HDL)/(mmol·L-1)n(TC)/n(HDL)ρ(hs-CRP)/(μg·mL-1)對照組1.29±0.230.98±0.191.39±0.460.02±0.01丹酚酸B低劑量組1.37±0.30*△0.97±0.19*△1.43±0.26*△0.34±0.12*△丹酚酸B中劑量組1.53±0.18*△0.95±0.20*△1.66±0.28*△0.35±0.11*△丹酚酸B高劑量組1.42±0.26*△0.99±0.18*△1.47±0.32*△0.36±0.14*△辛伐他汀組1.52±0.260.96±0.201.64±0.420.35±0.11模型組5.74±0.901.07±0.185.70±1.830.40±0.11注:丹酚酸B各藥物組間比較: *P>0.05; 丹酚酸B各藥物組與辛伐他汀組比較,△P>0.05。

3 結 論

動脈粥樣硬化是一種與氧化脅迫、血管內壁功能障礙相關的炎癥性疾病，而丹酚酸B具有極強的水溶性抗氧化能力[5-6]和很強的鈣鐵離子螯合能力，因此有望取得理想的治療效果。本實驗應用丹酚酸B通過腹腔注射的干預方法，并以辛伐他汀作對照，以血液中hs-CRP及TC/HDL聯(lián)合作為評價指標，觀察丹酚酸B對大鼠動脈粥樣硬化的影響，其中，hs-CRP與TC/HDL兩項指標聯(lián)合在臨床上診斷陽性率能達到95%以上[7-8]。實驗結果表明，丹酚酸B能夠通過降低血脂及血液中hs-CRP水平，治療動脈粥樣硬化及其相關疾病。推其作用機制是丹酚酸B的極強水溶性抗氧化能力抑制低密度脂蛋白(LDL)氧化形成氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)，從而抑制脂質的形成以及炎癥反應的發(fā)生，達到治療動脈粥樣硬化的療效。實驗同時發(fā)現(xiàn)，丹酚酸B生物活性很強，其低劑量[2 mg/(kg·d)]與辛伐他汀[10 mg/(kg·d)]對動脈粥樣硬化抑制作用無顯著差異，顯示出其具有預防與治療動脈粥樣硬化的市場潛力。這為動脈粥樣硬化的預防和治療提供了新的思路。然而，其治療動脈粥樣硬化的作用在目前所取得劑量范圍內尚無明顯的劑量依賴關系。因此，其劑量依賴關系的劑量范圍還有待進一步的深入研究。

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