蔡廣知,王莎莎,孫全樂,沈曉君,郭云龍,貢濟宇

（長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,吉林長春 130117）

UPLC法測定洋鐵酸模中大黃素和大黃酚

蔡廣知,王莎莎,孫全樂,沈曉君,郭云龍,貢濟宇*

（長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,吉林長春 130117）

目的 建立洋鐵酸模中大黃素和大黃酚的定量分析方法。方法采用超高效液相色譜法（UPLC法）。結(jié)果大黃素和大黃酚的質(zhì)量濃度與峰面積間呈良好的線性關(guān)系。平均回收率大黃素為98.7%,RSD為1.38%;大黃酚為100.4%,RSD為0.98%（n=6）。結(jié)論本方法簡便、快速,重現(xiàn)性和精密度均較好,優(yōu)于常規(guī)液相色譜（HPLC）,可用于洋鐵酸模中大黃素和大黃酚的含量測定。

UPLC法;洋鐵酸模;大黃素;大黃酚

洋鐵酸模（Rumex patientiaL.var.callosus F.Schm.et Maxim）為蓼科酸模屬植物巴天酸模[1]（Rumex patientia L.）的變種,又名洋鐵葉,產(chǎn)于我國北方。對該植物的研究,報道很少。但其同屬其它植物有研究報道,如:南方所產(chǎn)羊蹄[2-3]（Rumex japonieus）、北方所產(chǎn)巴天酸模（R.patientia）、毛脈酸模（R.gmelini）和新疆產(chǎn)皺葉酸模（R.crispus）。酸模屬植物的根中含有大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等蒽醌類有效成分[4],具有抑菌、止血及止咳的功效。以治療皮膚疾患和止血著稱。本文采用超高效液相色譜法測定了洋鐵酸模中大黃素和大黃酚的含量。

1 儀器與試藥

Waters Acquity超高效液相色譜、紫外檢測器和Empower工作站軟件。大黃素、大黃酚對照品購于中國藥品生物制品檢定所:批號分別為110756-200110和110796-200110。洋鐵酸模藥材樣品采于吉林省內(nèi)各地,經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)張亞芝教授鑒定。乙腈為色譜純,水為重蒸水,其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:ACQUITY UPLC TM BEH C18（1.7μ m,2.1 mm ×50mm）,流動相:乙腈-0.1%磷酸（60∶40）;流速:0.25mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:254 nm 。

2.2 對照品混合溶液的制備 精密稱取大黃素對照品適量,加甲醇溶解,制成1.00 mg/mL的大黃素對照品儲備液;精密稱取大黃酚對照品適量,加甲醇溶解,制成0.53 mg/mL的大黃酚對照品儲備液;分別精密吸取0.3 mL的大黃素和大黃酚對照品儲備液,置同一10 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,混勻,即得每毫升含大黃素30 μ g和大黃酚10.75 μ g的對照品混合溶液。

2.3 供試品溶液的制備[5-7]取洋鐵酸模藥材粉末0.5 g,精密稱定,置50 mL容量瓶中,加乙醇40 mL,超聲提取30 min,放冷,加乙醇定容至刻度,搖勻,濾過,即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備[8-10]分別精密吸取大黃素、大黃酚對照品儲備液0.18,0.27,0.36,0.45,0.54mL,置同一10 mL量瓶中,加甲醇稀釋并定容至刻度,搖勻,得不同濃度的大黃素和大黃酚混合對照品溶液。依次吸取上述混合對照品溶液5 μ L,注入超高效液相色譜儀,按上述色譜條件測定,記錄峰面積積分值和保留時間,計算得大黃素回歸方程:Y=6×106X-301 050,r=0.999 9,表明大黃素在0.09～0.27 μ g范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好的線性關(guān)系;大黃酚回歸方程:Y=3×107X-434 912,r=0.999 9,表明大黃酚在 0.03～0.09 μ g范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗 取同一供試品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,測定大黃素、大黃酚的峰面積值,計算RSD分別為0.12%和0.11%,表明儀器的精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗 取同一樣品5份,精密稱定,依樣品溶液的制備方法制得供試品溶液,分別進(jìn)樣5 μ L,測得大黃素及大黃酚峰面積值,計算RSD分別為0.19%和0.15%,表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液,分別于0,2,4,8,12,24 h,注入液相色譜儀,測定并記錄大黃素、大黃酚的峰面積值,計算 RSD分別為0.18%和0.16%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗 取同一已知含量的樣品6份,精密稱定,精密加入大黃素和大黃酚對照品溶液,依2.3項下方法分別制得供試品溶液,測定大黃素和大黃酚的峰面積值,計算回收率,大黃素和大黃酚的平均回收率分別為98.7%和100.4%,計算RSD分別為1.38%和0.98%,表明方法的準(zhǔn)確度良好。

2.9 樣品測定 取各批次洋鐵酸模樣品,按2.3項下方法制得供試品溶液,進(jìn)樣量5 μ L,測定并記錄大黃素、大黃酚的峰面積積分值,計算大黃素及大黃酚的含量,結(jié)果見表1,圖1、圖2。

圖1 大黃素、大黃酚標(biāo)準(zhǔn)品液相色譜圖

圖2 洋鐵酸模的超高效液相色譜圖

表1 洋鐵酸模中大黃素、大黃酚的含量

3 討論

相對于常規(guī)高效液相色譜法（HPLC）而言,超高效液相色譜法（UPLC）[11]有高分離度、高速度、高靈敏度等優(yōu)點。AQUITY UPLC系統(tǒng)可以實現(xiàn)樣品的高效、快速分析。本文中樣品采用UPLC法分析檢測時間僅為HPLC的1/4,適當(dāng)增加流速可以使檢測時間縮短為HPLC的1/6。UPLC使用1.7 μ m粒徑的色譜柱填料,使色譜柱的柱效極大提高,色譜峰變窄,峰容量增加。此外,UPLC進(jìn)樣量為5μ L時,最高峰的吸收值為0.20 AU,HPLC進(jìn)樣量5 μ L時,與UPLC中對應(yīng)峰的吸收值為1.7 AU,檢測靈敏度提高了8倍以上,UPLC的優(yōu)勢明顯。UPLC在樣品分析測定中的優(yōu)越性,可以大大提高工作效率。

實驗結(jié)果表明,不同地區(qū)洋鐵酸模中游離大黃素和大黃酚的含量差異較大,這可能與采收時間,藥材的生長環(huán)境等因素不同有關(guān);生長在山上及河邊潮濕地區(qū)的洋鐵酸模藥材,其游離大黃素和大黃酚的含量要高于生長在路邊干燥地區(qū)的藥材。洋鐵酸模的莖、葉、花及果實中只含有少量的大黃素,未檢測出大黃酚。本文首次采用超高效液相色譜法測定了吉林省不同產(chǎn)地洋鐵酸模中游離型大黃素和大黃酚的含量,為充分開發(fā)利用該種藥用資源提供了依據(jù),為UPLC在中藥分析中的深入應(yīng)用積累了條件。

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[1]蘇躍增,高黎明,沈序維.巴天酸模中的蒽醌類化合物[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2000,36（3）:47.

[2]鄭水慶,陶朝陽.中藥羊蹄化學(xué)成分的研究（I）[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2000,21（10）:910.

[3]周雄,宣利江,張書偉.中藥羊蹄的化學(xué)成分研究[J].中藥材,2005,28（2）:104.

[4]朱蕾,王竹天,楊大進(jìn).蒽醌類化合物的定性定量方法研究進(jìn)展[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2006,18（2）:155.

[5]李曉瑜,鄭達(dá)敏,張建珍,等.HPLC測定傷科膏中大黃酚含量[J].吉林中醫(yī)藥,2008,28（8）:605-606.

[6]程曉梅,劉振凌.雙波長薄層掃描法測定梔核肝膠囊中大黃素含量[J].吉林中醫(yī)藥,2003,23（4）:45.

[7]趙琦,張軍武.正交試驗優(yōu)選朱砂其大黃素的提取工藝[J].吉林中醫(yī)藥,2008.28（8）:149-150.

[8]韓桂花,趙志軍,徐紅輝,等.多種藥材與制劑中大黃酚與大黃素含量測定改進(jìn)方法[J].藥物分析雜志2008.28（3）:461-465.

[9]王京霞,許家鸞,朱新顏,等.虎杖中大黃素的量測定[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2005,11（3）:17-18.

[10]溫海婷,高妮娜,周春連,等.利膽膠囊中大黃酚、大黃素含量測定[J].長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2005,21（4）:46.

[11]金高娃,章飛芳,薛興亞.超高效液相色譜在復(fù)雜體系中的應(yīng)用[J].世界科學(xué)技術(shù):中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2006（8）:106.

R285.2

A

1007-4813（2010）01-0121-02

蔡廣知（1977-）,男,博士研究生。研究方向:中藥鑒定和中藥分析的教學(xué)、科研研究。

貢濟宇,女,教授,碩士研究生導(dǎo)師。Tel:0431-86172207,E-mail:gjy0431@126.com

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2009-10-20）