張麗芳，佟 巍，劉先菊，代小偉，王艷蓉，劉云波

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所 衛(wèi)生部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢測(cè)中心，北京 100021)

雪貂葡萄球菌的分離與鑒定

張麗芳，佟 巍，劉先菊，代小偉，王艷蓉，劉云波

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所 衛(wèi)生部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢測(cè)中心，北京 100021)

目的 對(duì)雪貂分離菌株進(jìn)行鑒定。方法 通過(guò)菌落、菌體形態(tài)、生化特征等細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法和藥敏實(shí)驗(yàn)對(duì)所分離菌株進(jìn)行鑒定。結(jié)果 根據(jù)生物學(xué)特性和藥敏實(shí)驗(yàn)確定所分離菌株為金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌。結(jié)論 分離菌株為金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌。

金黃色葡萄球菌;中間葡萄球菌;鑒定;雪貂

1 材料

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基及試劑:營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、MH肉湯培養(yǎng)基及微量生化管由陸橋生物技術(shù)公司提供，藥敏紙片購(gòu)自北京天壇藥物生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。

1.1.2 菌株:金黃色葡萄球菌26003，本室保存。

2 方法

2.1 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)

2.1.1 觸片染色鏡檢 :雪貂眼部分泌物觸片，染色鏡檢。

2.1.2 分離培養(yǎng):無(wú)菌棉簽蘸取眼內(nèi)黃色分泌物接種血瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18～24 h，挑可疑菌落純培養(yǎng)并涂片鏡檢。

2.1.3 生化鑒定:取純培養(yǎng)物接種相關(guān)微量生化管37℃培養(yǎng)18～24 h觀察結(jié)果。

2.2 藥敏試驗(yàn)

參照文獻(xiàn)［1］進(jìn)行。

2.3 血漿凝固酶試驗(yàn)

參照文獻(xiàn)［2］，金黃色葡萄球菌26003作為質(zhì)控菌株。

3 結(jié)果

3.1 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)

3.1.1 觸片染色鏡檢:眼部分泌物姬姆薩染色可見(jiàn)藍(lán)紫色葡萄球菌。

3.1.2 形態(tài)特征:血平板上出現(xiàn)兩種菌落，一種白稍黃(SA)，一種白色(SI)，直徑均為1mm左右，圓形，凸起，邊緣整齊，光滑濕潤(rùn)，菌落周圍有明顯 β溶血環(huán)，兩種菌落分別涂片革蘭染色鏡檢，均可見(jiàn)革蘭陽(yáng)性球菌，呈葡萄狀排列。

3.1.3 生化特征:見(jiàn)表1。

表1 分離菌株生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 The biochemical characteristics of the isolated strains

3.2 藥敏結(jié)果 見(jiàn)表2

表2 分離菌株藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Sensitivity test of the isolated strains

“S”:敏感 “R”:耐藥Note:“S”:Sensitive; “R”:Resistant

綜上所述，通過(guò)菌落菌體形態(tài)、生化反應(yīng)結(jié)果和藥敏試驗(yàn)，確定從雪貂眼部分泌物中分離到的菌株分別為金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌。

4 討論

本研究通過(guò)菌落菌體形態(tài)、生化反應(yīng)結(jié)果和藥敏試驗(yàn)，確定從雪貂眼部分泌物中分離到的菌株分別為金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌。

葡萄球菌(Staphyloccocus)廣泛分布于自然界，空氣、土壤、水、物品及人和動(dòng)物的皮膚及與外界相通的腔道中均有，能引起皮膚黏膜、多種組織器官的化膿性炎癥。葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌和表皮葡萄球菌等20多種，其中常見(jiàn)的動(dòng)物致病菌有金黃色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌厭氧亞種、中間葡萄球菌及豬葡萄球菌，其中金黃色葡萄球菌作為條件致病菌已列為SPF級(jí)嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須排除的致病菌［3］，中間葡萄球菌是動(dòng)物源性細(xì)菌，近年來(lái)成為人類(尤其是動(dòng)物愛(ài)好者)感染常見(jiàn)的葡萄球菌，已有動(dòng)物傳染給人中間葡萄球菌的確切證據(jù)［5］。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中將β溶血，血漿凝固酶陽(yáng)性和甘露醇陽(yáng)性作為鑒別金黃色葡萄球菌的特征性生化指標(biāo)［2］，血漿凝固酶陽(yáng)性，甘露醇陰性的葡萄球菌又被視為金黃色葡萄球菌一種變種［4］。中間葡萄球菌具有 β溶血，血漿凝固酶陽(yáng)性，甘露醇不確定的生化特征，與金黃色葡萄球菌極易混淆，自1976年將中間葡萄球菌從金黃色葡萄球菌中分出，列為葡萄球菌的一個(gè)新種，已有多篇報(bào)道研究二者的鑒別方法［6，7］。金黃色葡萄球菌3-羥丁酮、透明質(zhì)酸酶陽(yáng)性，多粘菌素耐藥是與中間葡萄球菌區(qū)別的主要生化指標(biāo)。本研究通過(guò)透明質(zhì)酸酶和多粘菌素兩項(xiàng)指標(biāo)區(qū)別2種葡萄球菌。

本研究中分離的金黃色葡萄球菌菌落白色稍黃，中間葡萄球菌為白色，但依據(jù)菌落顏色不能區(qū)別金黃色葡萄球菌與中間葡萄球菌。金黃色葡萄球菌產(chǎn)色素，中間葡萄球菌不產(chǎn)色素，金黃色葡萄球菌菌落色澤依菌株而異，呈白色、檸檬色、或黃色，由于實(shí)驗(yàn)人員的主觀判斷因素常見(jiàn)中間葡萄球菌被描述為黃色菌落。

金黃色葡萄球菌可引起嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物多種化膿性疾病，包括化膿性結(jié)膜炎和角膜炎，中間葡萄球菌的致病性未見(jiàn)報(bào)道，不排除中間葡萄球菌的可能性。作者認(rèn)為在今后的金黃色葡萄球菌鑒定工作中應(yīng)考慮中間葡萄球菌。

雪貂由于獨(dú)特的生理解剖結(jié)構(gòu)已廣泛應(yīng)用于病毒學(xué)、生殖生理、藥理學(xué)等研究，逐漸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化，國(guó)外已開(kāi)展雪貂實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化及相關(guān)條件標(biāo)準(zhǔn)化的研究，如美國(guó)Taconic公司已制定了雪貂微生物和寄生蟲(chóng)學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，而我國(guó)尚未制定雪貂的國(guó)家及地方質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。本文從雪貂中分離到金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌為雪貂微生物檢測(cè)提供了理論依據(jù)。

［1］朱忠勇，主編.實(shí)用醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社.1992:543－549.

［2］中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).GB/T14926-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)檢測(cè)方法(2)［S］.北京:2001.

［3］中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn).GB/T14922.2-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)等級(jí)及檢測(cè)［S］，北京:2001.

［4］陸承平，主編.獸醫(yī)微生物學(xué)(第3版)［M］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.2002:200－204.

［5］Tanner MA.， Everett CL， Youvan DC.， et al， Molecular phylogenetic evidence for noninvasive zoonotic transmission of Staphylococcus intermedius from a canine pet to a human［J］J Clin Microbiol，2000，38(4):1628－1631.

［6］Roberson JR，F(xiàn)ox LK，Hancock D D，et al.Evaluation of methods for differentiation of coagulase-positive staphylococci［J］1992，J Clin.Microbiol，30:3217－3219.

［7］Wakita Y，Wano JK，Shimazu A，et al，Development of a PCR test for the identification of Staphyloccocus intermedius based on the 16S rDNA sequence［J］.J Vet Med Sci，2002，64(7):603－605.

Identification of the Staphylococcus Strains Isolated from Ferret

ZHANG Li-fang，TONG Wei，LIU Xian-ju，DAI Xiao-wei，WANG Yan-rong，LIU Yun-bo
(Institute of Laboratory Animal Science，Chinese Academy of Medical Sciences(CAMS)＆ Peking Union Medical Collage(PUMC)，Monitoring Center for Laboratory Animals of Ministry of Health，Beijing 100021，China)

Objective To detect and identify the bacterial stains isolated from ferrets.Methods Identification of the stains according to their colony shape，thallus features，biochemical characteristics and their sensitivity to medications.Results The biochemical characteristics and drug sensitivities of the isolated strains were consistent with S.aureus and S.intermedius.Conclusions The bacterial stains isolated from ferrets are S.aureus and S.intermedius.

Staphylococcus aureus，Staphyloccocus intermedius，Identification，F(xiàn)erret北京某動(dòng)物室實(shí)驗(yàn)用雪貂眼部出現(xiàn)膿性分泌物，送我們實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測(cè)，通過(guò)菌落、菌體形態(tài)、生化特征等細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法和藥敏實(shí)驗(yàn)對(duì)所分離菌株進(jìn)行鑒定，確定為金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus，S.aureus)和中間葡萄球菌(Staphyloccocus intermedius，S intermedius)混合感染所導(dǎo)致的細(xì)菌性疾病，現(xiàn)報(bào)告如下。

R-33

A

1671-7856(2010)08-0050-03

2010-03-08

中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(DWS200906)。

張麗芳(1971－)，女，助理研究員，研究方向:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)。

劉云波(1962－)，男，研究員，Email:liu-yunbo@263.net。