陳大忠，賈瑩，楊波，張洋，張曉燕

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，黑龍江 哈爾濱 150040; 2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

制劑工藝

立血康軟膠囊的提取工藝研究

陳大忠1，賈瑩2，楊波2，張洋2，張曉燕1

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，黑龍江 哈爾濱 150040; 2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的:優(yōu)選立血康軟膠囊的提取工藝。方法:以人參皂苷Rg1含量結(jié)合干膏收率為考察指標(biāo)，采用正交設(shè)計法，對提取次數(shù)，提取時間，溶劑濃度和溶劑用量四因素進(jìn)行優(yōu)選研究。結(jié)果:四因素中只有提取次數(shù)有顯著影響。結(jié)論:最佳提取工藝為A3B3C2D1，即乙醇用量為6倍，80%的乙醇提取兩次，每次3小時。

立血康軟膠囊;提取工藝;人參皂苷Rg1

立血康軟膠囊是臨床使用多年的經(jīng)驗(yàn)處方藥，由大黃、三七、牛膽粉組成。臨床主要用于血液黏稠、高血脂，動脈硬化等病癥的治療。根據(jù)處方組成藥味所含活性成分的特點(diǎn)，確定對處方中大黃、三七等比混合后采用乙醇提取的方法，以人參皂苷Rg1的含量結(jié)合浸膏的收率為指標(biāo)，研究本方的提取工藝，從而優(yōu)化出合適的提取工藝，為工業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 儀器與藥品

儀器Waters 600E-2487型高效液相色譜儀，Millennium32色譜工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(美國);分析天平(十萬分之一，湘儀天平儀器廠);乙腈(色譜級);水為重蒸餾水;其它均為分析純;人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所，批號110703-200424，供含量測定用)。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定方法

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(4.6mm×250mm，5μm);流動相:乙腈-水(19∶81);流速:1.0mL·min-1;檢測波長:203nm;進(jìn)樣量:20μL;柱溫:30℃。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1適量加甲醇制成每1mL含人參皂苷Rg1 0.42mg的溶液作為對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備

分別稱取9份樣品適量(約相當(dāng)于三七藥材0.6g)的浸膏細(xì)粉，精密稱定，置50mL容量瓶中，用適量甲醇溶解，超聲30min，加甲醇至刻度，搖勻。過0.45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取混合對照品溶液2、4、6、8、10、15、20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(X，μg)為橫坐標(biāo)，計算回歸方程為:Y=307481.8X-94888，相關(guān)系數(shù) r= 0.9991。表明人參皂苷Rg1在0.84～8.4μg的進(jìn)樣量范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液分別在0、2、4、8、16、24h進(jìn)樣測定人參皂苷Rg1峰面積，計算得其分別RSD為1.95% 。

2.2 提取工藝優(yōu)選

2.2.1 正交設(shè)計 因?yàn)槿藚⒃碥誖g1在乙醇中有較好的溶解度，所以采用醇提的方法可以獲得滿意的轉(zhuǎn)移率，選用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，以人參皂苷Rg1含量和浸膏收率為考核指標(biāo)，選取不同乙醇濃度(A)、提取時間(B)、提取次數(shù)(C)、溶劑倍數(shù)(D)4個因素，每個因素設(shè)定3個水平，因素水平安排見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

按處方比例稱取大黃25g，三七25g，粉碎，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)。藥材用相應(yīng)濃度及倍量的乙醇浸泡30min，加熱回流提取。提取液冷卻后過濾，濾液合并，回收乙醇，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴揮干，置烘箱中(60℃)烘至恒重，稱定重量，研磨成粉末狀，按相應(yīng)比例折算后(相當(dāng)于三七藥材0.6g)，稱取適當(dāng)粉末用甲醇溶解至50mL，超聲30min后用甲醇補(bǔ)足減失的體積，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為樣品溶液。

2.2.3 最佳工藝確定

按人參皂苷Rg1和出膏率權(quán)重分別為0.6和0.4進(jìn)行綜合評分。含量測定中人參皂苷Rg1含量最高的計為10分，其他各項(xiàng)依次與之對比評分，然后將出膏率最高的同樣計為10分，與之對比也依次對9個樣品分別評分。對于影響提取工藝的主要因素人參皂苷Rg1含量權(quán)重系數(shù)設(shè)定0.6;次之因素總固形物出膏率權(quán)重系數(shù)設(shè)定0.4，進(jìn)行加權(quán)評分，公式為 Y= 0.4Ya+0.6Yb，Ya=(10-33.94)+Y1;Yb=(10-6.33)+Y2，以綜合評價值對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析和方差分析，結(jié)果見表2和表3。

正交試驗(yàn)結(jié)果與分析根據(jù)表2～3方差分析，因素B離差平方和較小，該因素對試驗(yàn)結(jié)果影響貢獻(xiàn)很低;同時，因?yàn)?因素3水平正交表中無空白組誤差項(xiàng)，將其作為本次試驗(yàn)設(shè)計的誤差項(xiàng)。因素C具有顯著性差異，為提取工藝的主要響因素。根據(jù)分析結(jié)果，最佳提取工藝應(yīng)為A3B3C2D2，但從臨床服用劑量盡量減低和節(jié)約實(shí)際生產(chǎn)成本的考慮，溶劑的用量差異不顯著，所以選D1最終提取工藝為:A3B3C2D1，即80%乙醇回流提取2次，每次3h，溶劑用量為6倍量。

表2 立血康軟膠囊提取工藝正交實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果(ˉx±s)

表3 立血康軟膠囊正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

2.2.4 工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)方差分析獲得的最佳提取工藝方案，測定出膏率和人參皂苷Rg1含量，結(jié)果見表4。

表4 工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

3 討論

3.1 立血康軟膠囊由大黃、三七和牛膽粉組成，對大黃、三七采用乙醇提取，有利于活性成分獲得的同時降低總固形物的出膏率，適合軟膠囊內(nèi)容物藥物含量相對比例小的特點(diǎn)，可以保證服用藥物的治療劑量。

3.2 影響本方提取率的因素有很多，但結(jié)合藥材主要成分的特點(diǎn)，我們選擇了用醇提取，并以加醇倍數(shù)、提取次數(shù)提取時間和醇濃度這4個較為關(guān)鍵的因素作為考察條件，每個因素3個水平，采用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)，制備樣品溶液進(jìn)行測定。

3.3 正交試驗(yàn)考察優(yōu)化提取工藝過程中，采用了多指標(biāo)的綜合評價方法，這種分析方法既保證了數(shù)據(jù)指標(biāo)的全面性，又可根據(jù)各指標(biāo)不同的影響程度進(jìn)行權(quán)重的分配，保證分析采樣指標(biāo)全面的同時，對于關(guān)鍵影響因素又給予了相應(yīng)的側(cè)重，使分析結(jié)果為科學(xué)和客觀，保證提取工藝路線的優(yōu)化合理，可信。

3.4 由于進(jìn)樣量為10μL，溫度為25℃時峰形不好，所以將進(jìn)樣量改為20μL，溫度提高到30℃，峰形得到較好的改善。

［1］ 羅曉健，周書余，王丹蕾，等.均勻設(shè)計優(yōu)化三七總皂苷提取工藝［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2002，19(2):122-124.

［2］ 何靜雯，羅干明.正交試驗(yàn)法優(yōu)選三七提取工藝［J］.中成藥，2005，27(8):964-966.

Optimization of Extractive Technology for Lixuekang Soft Capsule

CHEN Da-zhong1，JIA Ying2，YANG Bo2，ZHANG Yang2，ZHANG Xiao-yan1
(1.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Research Institute of Traditional Chinese Medicine，Harbin 150040，China;2.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040;China)

Objective:To optimize the extractive technology of Lixuekang Soft Capsule.Methods:The extractive procedure was studied by orthogonal design with the content of Ginsenoside Rg1 and the dry extract yield as the index，to optimize the extractive time，solvent concentration and solvent amount.Results:Significant effect was observed in times of extraction.Conclusion:The best extractive process is A3B3C2D1，which is added 6 fold of 80%ethanol，and decocted 2 times，3 hours each time.

Lixuekang Soft Capsule;Extractive procedure;Ginsenoside Rg1

R944.5

A

1002-2406(2010)06-0063-02

黑龍江省教育廳資助課題(1152-1263)

陳大忠(1970-)，男，副研究員，主要研究方向:中藥學(xué)。

2010-04-17

修回日期:2010-05-12