閆杏蓮，李昌勤，劉瑜新，常星，康文藝#（1.河南大學第一附屬醫(yī)院藥劑科，開封市 475001；河南大學藥學院天然藥物研究所，開封市 475004）

頭花蓼抗氧化活性研究

閆杏蓮1＊，李昌勤2，劉瑜新2，常星2，康文藝2#（1.河南大學第一附屬醫(yī)院藥劑科，開封市 475001；河南大學藥學院天然藥物研究所，開封市 475004）

目的：研究頭花蓼抗氧化活性。方法：分別用石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取頭花蓼，用清除DPPH自由基、清除ABTS自由基和鐵離子還原/抗氧化能力測定法，對頭花蓼體外總抗氧化活性進行評價，并與6-羥基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-2-羧酸及陽性對照丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）比較。結(jié)果：頭花蓼有較好的體外抗氧化活性。其甲醇提取物具有很強的清除DPPH自由基、ABTS自由基及還原Fe3+的能力，總抗氧化能力遠遠超過BHT的作用。結(jié)論：在3種提取物中，頭花蓼甲醇提取物具有最高的抗氧化能力，乙酸乙酯提取物次之。3種方法中，DPPH方法和ABTS方法相關(guān)性（r＝0.991 7）最高。

頭花蓼；抗氧化活性；二苯代苦味酰基；2，2′-連氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨鹽；鐵離子還原/抗氧化能力

＊主任藥師。研究方向：中藥藥理與臨床藥學。E-mail：xinglian55@yeah.net

#通訊作者：教授，博士后。研究方向：中藥活性成分及新藥研發(fā)。電話：0378-3880680。E-mail：kangweny@hotmail.com

頭花蓼為蓼科植物頭花蓼Polygonum capitatumBuch.-Han.ex D.Don的干燥全草或地上部分，又名太陽草、石莽草、四季紅等。主產(chǎn)于江西、湖北、廣西、云南、貴州等地，為貴州苗族用藥。其具有清熱解毒、利尿通淋與活血止痛等功效，用于治療痢疾、腎盂腎炎、膀胱炎、尿路結(jié)石、風濕痛、跌打損傷、瘡瘍濕疹[1]。頭花蓼全草主要成分為黃酮、醛、酮、醇及萜類化合物[2]。最初認為沒食子酸[3]是頭花蓼的主要有效成分，進一步研究認為黃酮類也可能是其有效成分，具有抗炎、抗病毒、抗菌等作用[4]。頭花蓼除黃酮類成分外，其所含的有機酸類成分也被證實為藥理活性成分[5]，藥理活性主要有抗菌、降溫及利尿作用[6]。劉志軍等[7]從頭花蓼中分離出黃酮和酚酸類化合物，通過化學發(fā)光法，發(fā)現(xiàn)它們具有清除氧自由基O2-·、·OH自由基以及H2O2的能力。目前筆者尚未見利用清除二苯代苦味?；―PPH）[8，9]自由基、清除[2，2'-連氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨鹽]（ABTS）自由基以及鐵離子還原/抗氧化能力（FRAP）方法對頭花蓼總抗氧化能力評估測定的文獻報道。

為了進一步豐富頭花蓼抗氧化活性研究內(nèi)容，筆者采用清除DPPH自由基、清除ABTS自由基和FRAP方法，對頭花蓼體外總抗氧化活性進行了考察，并與陽性對照丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）抗氧化活性進行了比較，以為其進一步研究提供理論基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UV-2000型紫外-可見分光光度計（上海尤尼可儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化公司）；電子天平（美國梅特勒-托利多儀器有限公司）；CS-H1型混合器（北京博勵陽科技公司）。

1.2 試藥

頭花蓼于2008年1月采集于貴州省都勻地區(qū)，經(jīng)河南大學天然藥物研究所生藥教研室李昌勤副教授鑒定為真品，標本存放于河南大學天然藥物研究所；DPPH（日本東京化成工業(yè)株式會社）；ABTS（美國Fluka公司）；6-羥基-2，5，7，8-四甲基苯并二氫吡喃-2-羧酸（Trolox，美國Aldrich公司）；Fe3+-三吡啶三啞嗪（TPTZ）、BHA、（BHT）均由比利時Acros organics公司提供。

2 方法

2.1 頭花蓼活性成分的提取

頭花蓼地上部分陰干，粉碎，石油醚浸泡12 h后，于索氏提取器中連續(xù)回流提取3次，每次1 h，濃縮，得石油醚提取物（PCPE）。揮干溶劑后，依次用乙酸乙酯、甲醇浸泡12 h，回流提取3次，每次1 h，分別得乙酸乙酯提取物（PCEE）和甲醇提取物（PCME）。

2.2 抗氧化活性篩選方法

2.2.1 DPPH方法：按照文獻[10]，將樣品用甲醇配制成一系列濃度，取0.1 mL樣品加入3.5 mL DPPH甲醇溶液（0.06 mmol·L-1），混合30 min后測定515 nm波長處吸光度。每份樣品平行操作3次，取平均值，計算出清除率，并計算出半數(shù)抑制率（IC50）。

2.2.2 ABTS方法：按照文獻[11]，配制ABTS自由基工作液。將樣品用甲醇配制成一系列濃度，取0.15 mL樣品加入2.85 mL ABTS自由基工作液，混合，放置10 min后，在734 nm波長處測定吸光度。每份樣品平行操作3次，取平均值，計算出清除率，并計算出IC50。

2.2.3 FRAP方法：按照文獻[12]，將樣品用甲醇配制成一系列濃度，取0.2 mL樣品加入3.8 mL新鮮配制的TPTZ工作液，混勻，37℃反應(yīng)30 min后測定593 nm波長處吸光度。每份樣品平行操作3次，取平均值，計算出清除率，結(jié)果以Trolox當量表示。

3 結(jié)果

3.1 頭花蓼對DPPH自由基的清除作用

PCME和PCEE均有很好的清除DPPH自由基的能力。PCME清除DPPH自由基的能力（IC50＝2.98 μg·mL-1）遠遠強于陽性對照BHT（IC50＝18.71 μg·mL-1），約為其6.28倍，也強于BHA的能力（IC50＝3.20 μg·mL-1）；PCEE清除DPPH自由基的能力（IC50＝15.34 μg·mL-1）比 BHT強，約為 BHA 能力的20.83%；由于PCPE清除DPPH自由基的初篩抑制率太低，故其IC50未測定。頭花蓼3種提取物和陽性對照BHA、BHT對DPPH自由基的清除能力順序為：PCME＞BHA＞PCEE＞BHT＞PCPE。頭花蓼不同溶劑提取物的抗氧化活性見表1。

表1 頭花蓼不同溶劑提取物的抗氧化活性Tab 1 Antioxidant activity of the different extr acts of P.capitatum

在試驗的濃度范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度在1.74 μg·mL-1時，PCME和PCEE對DPPH自由基的清除率分別是34.32%和8.85%。隨其質(zhì)量濃度的增加，清除率也增高。當質(zhì)量濃度增加到13.89 μg·mL-1時，兩者的清除率分別增高到90.82%和46.86%。說明頭花蓼提取物清除DPPH自由基的能力與其質(zhì)量濃度呈正量效關(guān)系，即隨著提取物用量的增加，對DPPH自由基的清除率也增高。PCEE在質(zhì)量濃度為27.78 μg·mL-1以下時，清除率幾乎隨質(zhì)量濃度增大而線性增加；PCME質(zhì)量濃度在6.94 μg·mL-1以下時，清除率幾乎隨質(zhì)量濃度增大而線性增加，在6.94 μg·mL-1以上時，清除率幾乎不變，說明抗氧化作用已接近飽和，再增加提取物的用量，清除率變化不大?？寡趸瘎PPH自由基的清除作用見圖1。

圖1 抗氧化劑對DPPH自由基的清除作用Fig 1 Scavenging effect of antioxidant on DPPH free radical

3.2 頭花蓼對ABTS自由基的清除作用

PCME對ABTS自由基的清除能力很強（IC50＝2.54 μg·mL-1），超過陽性對照BHT（IC50＝7.72 μg·mL-1），約為BHT清除能力的32.89%，比BHA（IC50＝1.88 μg·mL-1）的作用略弱；PCME清除ABTS自由基的能力約為PCEE能力的5.63倍；而PCPE清除ABTS自由基的初篩抑制率過低，故IC50未測定。頭花蓼3種提取物和陽性對照BHA、BHT對ABTS自由基的清除能力順序為：BHA＞PCME＞BHT＞PCEE＞PCPE。

3.3 頭花蓼對Fe3+的還原能力

3種提取物中，PCME還原Fe3+的能力（FRAP＝2 902.26±92.22 μmol TE·g-1）比陽性對照BHT的能力（FRAP＝1 581.68 ±97.41 μmol TE·g-1）強，約為 BHT能力的1.84倍，約為BHA（FRAP＝6 633.04±114.04 μmol TE·g-1）的43.67%；PCME還原Fe3+的能力約為PCEE還原能力的4.22倍，約為PCPE還原能力的22.26倍。頭花蓼3種提取物和陽性對照BHA、BHT對Fe3+的還原能力順序為：BHA＞PCME＞BHT＞PCEE＞PCPE。

3.4 3種方法的相關(guān)性分析與比較

將3種抗氧化方法測定的結(jié)果分別進行相關(guān)性分析。DPPH方法和ABTS方法、DPPH方法和FRAP方法、ABTS方法和FRAP方法的相關(guān)系數(shù)分別為0.991 7、0.940 5、0.975 2。結(jié)果表明，DPPH方法和ABTS方法相關(guān)性最高。

4 討論

頭花蓼具有較好的抗氧化作用，其強弱程度取決于提取溶劑。研究結(jié)果表明，其3種提取物及陽性對照BHA、BHT總的體外抗氧化能力的順序為：BHA＞PCME＞BHT＞PCEE＞PCPE。即隨著提取溶劑極性的增高，相應(yīng)的頭花蓼提取物的抗氧化能力隨之增強；其中PCME總的抗氧化能力很好，強于BHT。

[1]國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草（第6卷）[M].上海：上?？茖W技術(shù)出版社，1999：646.

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AntioxidantActivity ofPolygonum capitatum

YAN Xing-lian（Dept.of Pharmacy，The FirstAffiliated Hospital of Henan University，Kaifeng 475001，China）
LI Chang-qin，LIU Yu-xin，CHANG Xing，KANG Wen-yi（Institute of Natural Products，Pharmacy School of Henan University，Kaifeng 475004，China）

OBJECTIVE：To investigate the antioxidant activity ofPolygonum capitatum.METHODS：The total antioxidant activity ofP.capitatumwas assayed by three methods，such as 1，1-diphenyl-2-picryl-2-picrylhydrazyl（DPPH）radical scavenging，[2，2′-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]diammonium salt（ABTS）radical scavenging，and ferric reducing antioxidant power（FRAP）assay.The results were compared with 6-hydroxy-2，5，7，8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid（Trolox）and positive control butylated hydroxyanisole（BHA），2，6-di-tert-butyl-4-methylphenol（BHT）.RESULTS：The results showed thatP.capitatumhad good antioxidant activity in vitro.The methanol extract showed higher scavenging activity against DPPH radical，ABTS radical，and reducing antioxidant power of TPTZ，and the methanol extract had higher total antioxidant activity than that of BHT.CONCLUSION：Among three kinds of extracts fromP.capitatum，the methanol extract shows the highest antioxidant activity，followed by ethyl acetate extract.The results of DPPH are correlated with that ofABTS assay（r＝0.991 7）.

Polygonum capitatum；Antioxidant activity；DPPH；ABTS；FRAP

R285；R946.81

A

1001-0408（2010）39-3659-03

2009-11-29

2010-04-16）